部分规模化猪场种猪猪瘟抗体监测及免疫效果分析

顾冬花（青海省大通县桦林畜牧兽医站810100）

部分规模化猪场种猪猪瘟抗体监测及免疫效果分析

顾冬花（青海省大通县桦林畜牧兽医站810100）

为了解规模猪场种猪群猪瘟免疫抗体情况，评价猪瘟疫苗加强免疫的效果，对6个规模猪场的种猪群进行了猪瘟抗体检测、补苗、再检测。结果表明种猪群通过科学的增加猪瘟疫苗接种能明显提升猪瘟抗体水平。但6个猪场的种猪群中均有少数种猪通过加免接种疫苗仍不能产生较好的猪瘟抗体，不具备对猪瘟病毒的抵抗能力，规模猪场应该对这些种猪进行淘汰，减少猪瘟病毒在猪场传播的可能性。

猪瘟(CSF)是由猪瘟病毒(CSFV)引起的猪一种急性、烈性、接触性传染病，主要通过呼吸道和消化道传染，临床上以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征。猪瘟被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病，我国列为一类动物疫病，也是目前危害养猪业发展的主要疫病之一。多年来，我国一直采取预防为主的方针，大大降低了猪瘟的感染率和发病率。但随着集约化程度的提高和养猪规模的扩大，在疫苗接种范围越来越大、防疫密度越来越高、接种剂量越来越大的情况下，该病出现了隐性感染、胎盘感染、新生仔猪先天性感染等形式。研究发现，猪场带毒猪持续排毒，是猪瘟在猪场持续发生的根源[1～4]。另外，免疫抑制性因素，如猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒(PCV-2)及日粮中霉菌毒素等，也会严重损害猪的免疫系统，导致免疫失败[5]。研究表明，受PRRSV感染的无特定病原(SPF)的猪接种猪瘟疫苗，猪瘟抗体水平明显低于无感染PRRSV的对照猪[6,7]。为了解规模猪场种猪群猪瘟抗体情况，确保猪瘟疫苗免疫效果，选取6个不同规模猪场的种猪，逐头采血，分离血清，由兰州兽医研究所生产的猪瘟正向间接血凝试验抗体检测试剂盒测定抗体水平，对猪瘟抗体不合格的种猪加强接种1次猪瘟疫苗，3周后再检测猪瘟抗体，对第2次猪瘟抗体检测不合格的种猪进行淘汰，实行猪场猪瘟净化计划。

1　材料与方法

1.1血清来源与数量采集6个不同规模猪场(编号1-6)种猪血样共158份，按常规方法分离血清并置-20℃冰箱保存，待测。

1.2检测试剂与仪器猪瘟正向间接血凝诊断抗原，阳性、阴性血清，稀释液，均在有效期内，由中国农业科学院兰州兽医研究所提供。单多道移液器、生化培养箱、离心机、振荡器。

1.3操作步骤与判定标准检测方法采用正向间接血凝试验，根据《猪瘟诊断技术规程》(NY/SY156-2000)操作。待检血清放在59℃水浴锅中灭能30min；猪瘟抗体检测试剂盒恢复到室温，在96孔血凝板(110V型)中每孔加入50µl稀释液；取50µl灭能待检血清、阳性血清、阴性血清分别加入第1孔作1:1稀释后，混匀3～4次，吸出50µl加入第2孔再混匀3～4次，依次倍比稀释至11孔，然后吸出50µl弃去。稀释液对照孔不加样；然后各孔均加25µl血凝抗原，振荡混匀，盖上玻板，室温或37℃下静置1.5～2.0h后观察结果。

1.4结果判定在对照孔合格的前提下，再观察待检血清各孔，记录各孔凝集情况，用“-、＋、＋＋、＋＋＋、＋＋＋＋”表示。以呈现＋＋血凝反应的血清最高稀释度作为该血清的间接血凝抗体效价。当阳性血清抗体效价≥1:256、阴性血清抗体效价≤1:16、稀释液对照孔无自凝现象时，试验成立。接种口蹄疫O型疫苗的猪免疫抗体效价≥1：128为免疫合格。

1.5加强免疫试验对猪瘟抗体检测不合格的所有种猪，避免所有人为因素的情况下，加强注射1次猪瘟疫苗，3周后采血，按常规方法分离血清，用同样的方法再次检测猪瘟抗体。

2　结果与分析

2.1不同规模猪场种猪群猪瘟抗体结果见表1。

表1　不同规模猪场种猪猪瘟抗体检测结果

表1结果显示，6个规模化猪场种猪的猪瘟抗体合格率各不相同，但均高于70% 。其中1场的种猪猪瘟抗体合格率最高(85.42%)，5场的最低(72.22%)，158份检测样本中，免疫抗体合格124份，不合格34份，抗体平均合格率为78.48% ，抗体平均不合格率为21.51%，1、2、3、4场的种猪猪瘟抗体合格率均高于78.48%，5、6场的种猪猪瘟抗体合格率低于平均合格率。这表明，不同规模猪场种猪猪瘟抗体的整齐度存在差异。对猪瘟抗体不合格种猪加强免疫后再次进行抗体检测，检测结果见表2。

2.2猪瘟抗体不合格种猪加强免疫后猪瘟抗体

表2　猪瘟抗体不合格种猪加强免疫后猪瘟抗体检测结果

表2结果显示，猪瘟抗体不合格种猪加强免疫后各场种猪猪瘟抗体合格率均有不同程度的上升，1～6场的合格率分别上升了6.25个百分点、6.67个百分点、12个百分点、4.55个百分点、11.11个百分点、6.67个百分点。加强免疫后，免疫抗体合格140份，不合格18份，平均合格率为88.60%，平均不合格率为11.39%，平均合格率上升了10.12个百分点，平均不合格率下降了10.12个百分点。其中以3场抗体合格率上升幅度最大，上升了12个百分点。结果说明，规模化猪场猪瘟免疫抗体合格率不高存在多方面的原因，通过加强免疫可以适当提高规模化养殖场猪瘟抗体的合格率，为科学合理的制定猪场种猪淘汰计划奠定了基础。

3　讨论

（1）到目前为止，加强免疫接种仍是对猪瘟预防与控制最有效的措施，而通过对免疫猪群进行抗体水平监测，及时掌握猪群免疫抗体水平，了解免疫状况，对控制疫病起着至关重要的作用。此次调查采用正向间接血凝试验，检测规模猪场种猪猪瘟免疫后能否产生抗体或抗体滴度能否达到免疫保护，以及加强免疫后猪瘟抗体的变化情况，从检测结果可以看出，不同规模猪场种猪猪瘟抗体合格率均存在差异，说明规模化猪场的猪瘟抗体相对不太稳定，抗体滴度高低不齐，经加强免疫可以适当提高规模化猪场猪瘟抗体的合格率。（2）规模化猪场的稳定生产与持续发展是以种猪的健康稳定为前提，猪场种猪猪瘟控制的好坏直接关系到整个猪群的健康状况。种猪群携带猪瘟病毒或机体免疫受到抑制，猪瘟抗体水平低下，会造成仔猪先天性感染猪瘟或新生仔猪得不到母源抗体的充分保护，很容易感染包括猪瘟在内的各种病原，成为猪场的隐患[1]。免疫注射操作方法不规范、剂量不足等，也会直接影响猪瘟疫苗的免疫效果。因此，在临床上，通过严格检测每一头种猪的猪瘟抗体水平，评估其猪瘟免疫保护力。淘汰加强免疫后猪瘟抗体水平不合格的种猪，从源头上降低猪瘟感染风险，是预防、控制、消灭、净化猪瘟最有效的手段之一。（3）免疫抗体检测是科学掌握疫苗免疫接种后抗体产生和消长变化的有效方法之一[9]。通过此次检测、补苗、再检测的过程分析猪场种猪猪瘟抗体不合格的原因可能有：①疫苗免疫操作不当存在打“飞针”现象，造成抗原量不足以诱导猪体产生免疫应答反应[6]；②疫苗质量和冷链存在问题，疫苗保存、运输不当造成疫苗质量受到影响，抗原性能降低[8]；③某些猪体本身免疫功能差，存在免疫抑制性疾病(如混合感染PRRSV、PRV、PCV或饲喂发霉饲料等)或猪在免疫接种前后曾使用黄胺类等免疫抑制药物[4]，造成猪体免疫功能受损而失去对疫苗的免疫应答能力[7]；④疫苗免疫没有根据猪只大小选择合适的针头，大猪使用短针头将疫苗注入脂肪疫苗未产生免疫应答；⑤重视程度不够，对疫病的危害程度认识不够深刻，思想上没有引起足够的重视。再加上防疫管理中的失误，造成种猪漏防，成为免疫空白猪。为了排除人为和疫苗自身的因素，针对首次检测猪瘟抗体不合格的所有种猪，加强接种1次猪瘟疫苗再检测，结果显示不同规模猪场种猪猪瘟抗体合格率均有不同程度的提高，但每个猪场仍存在一定比例的猪瘟抗体不合格的种猪，认为可能属于种猪自身因素(猪瘟带毒或免疫抑制)。由于免疫受抑制的种猪，本身没有足够的猪瘟抗体，母乳中的母源抗体不足以保护其后代，新生仔猪免疫保护不足而成为易感猪。所以应淘汰猪瘟抗体不合格种猪，才能保证整个猪群的健康。

3　对策

在日常生产中经常开展种猪猪瘟抗体检测，摸清种猪群抗体水平状况，分析原因，采取相应措施：（1）加强免疫管理，适时免疫接种，防止种猪漏防，在防疫注射时注意种猪的保定，注射部位要准确，确保免疫剂量。（2）强化疫苗的冷链运输及保存，做好疫苗冷藏，稀释后分不同气温不同要求在规定时间内用完。（3）及时淘汰机体免疫功能有缺陷的种猪，特别是多次免疫仍达不到免疫要求的种猪，可借鉴汤薇等[10]对低抗体水平母猪的淘汰方法，以消灭传染源。（4）强化消毒，净化环境，做好引进种猪的隔离、检测和补防工作，防止外来疫源传入。总之从源头抓起，及时补免，将疫苗接种与免疫监测有机结合起来，以免疫监测制定合理的免疫程序[4]，达到最佳免疫效果，及时淘汰不合格种猪，确保整个猪群的健康。

[1] 郑建波, 李永福. 猪瘟的诊断与防治[J]. 畜牧兽医科技信息, 2007(2): 28- 30.

[2] 陈西钊, 叶春艳, 蒋进等. 猪瘟抗体监测及免疫效果分析[J].中国农业科学, 2002, 35(4): 457- 4591.

[3] 周绪斌, 赵亚荣, 许秀梅等. 规模化猪场猪瘟的净化与防制[J].养猪, 2006(3): 44- 46.

[4] 解跃雄, 邰国伟, 冯俊仙. 猪瘟综述[J]. 猪业科学, 2006(3): 19-21.

[5] 代广军, 蔡雪辉, 苗连叶等.规模化养猪高热病等流行疫病防控新技术[M]. 北京: 中国农业出版社, 2008: 44- 45.

[6]陈浩波, 郑如胶.免疫失败的原因分析及相应对策[J].广西农学报, 2009, 24(1): 50-52.

[7]王琴, 宁宜宝.猪瘟免疫失败主要原因的解析[J].中国兽医杂志, 2005, 41(6): 61-63.

[8] 黄诚华.浅谈猪瘟免疫失败的原因[J]. 福建畜牧兽医, 2006, 28(3): 57-58.

[9] 李明义, 白志娟, 赵雪丽等. 猪瘟抗体消长规律动态研究[J].中国动物检疫, 2004, 21(8): 24-26.

[10] 修金生, 吴顺意, 周伦江等.淘汰猪瘟抗体不合格种猪对母猪繁殖性能和仔猪生长性能的影响研究[J].中国农学通报, 2010, 2(20): 1-6.

S851.33

B

1007-1733(2015)10-0041-02

（2015–06–02）