养阴生肌膜的处方工艺及质量标准研究

罗会盛，寇恒烈，范　竞，王　迅

（1.南京中医药大学附属医院，江苏　南京　210029；2.南京中医药大学，江苏　南京　210023）

养阴生肌膜的处方工艺及质量标准研究

罗会盛1，寇恒烈2，范竞1，王迅1

（1.南京中医药大学附属医院，江苏南京210029；2.南京中医药大学，江苏南京210023）

目的研究养阴生肌膜的成型工艺及其质量标准。方法采用单因素考察及正交设计的试验方法筛选养阴生肌膜的成型工艺；用高效液相色谱法测定盐酸小檗碱的含量，建立其质量标准。结果羧甲基纤维素钠与聚乙烯醇17-88的质量比例为2∶3，羧甲基纤维素钠与聚乙烯醇17-88的总质量在膜浆中的浓度为4％，药粉质量在膜浆中的浓度为2.5％，是养阴生肌膜的最佳处方工艺；盐酸小檗碱的进样量在2.62～13.1ng范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 3），平均回收率为99.4％，RSD=1.48％（n=6）。结论筛选出的成型工艺稳定可靠，含量测定方法简便、重现性好、专属性强，为该制剂的质量评价提供了依据。

养阴生肌膜；成型工艺；高效液相色谱法；质量标准；盐酸小檗碱

口腔黏膜疾病，尤其是口腔溃疡为口腔科常见病、多发病。它以反复发作和剧烈烧灼、疼痛为特点，给患者带来较大的痛苦。其病因复杂，中医认为，口腔溃疡病因归于火热（实火或虚火），与心脾两脏关系最为密切［1］。临床上多以局部用药、对症治疗为主。

我院制剂养阴生肌散具有清热解毒功效，在临床上广泛应用于顽固性口腔炎、口腔溃疡及其他各种口唇炎症的治疗。其外用覆盖面积大，具有易分散、起效快的特点［2］，同时具有一定程度的机械性保护、收敛等作用，而且制备工艺简单，剂量易于控制，可随症增减，便于小儿服用，储存、运输、携带比较方便。但由于养阴生肌散在口腔中具有很强的吸湿性，故其嗅味、刺激性也相应地增加，且治疗时极易发生移位现象，往往达不到良好的治疗效果，而且由于组方中含有雄黄及易挥发成分冰片，因此散剂并不是其发挥药效最理想的剂型。故本研究试图通过研究养阴生肌膜的制备工艺优选及同时建立其质量标准，来满足临床使用量的日渐增加，同时解决散剂的上述缺点。

1　仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪Agilent 1260系统；十万分之一电子分析天平（BP-211D型，德国Sartorius）；万分之一电子天平（AR2140型，美国Ohaus公司）；SK6200H型超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；HH-2型数显恒温水浴锅（金坛市杰瑞尔电器有限公司）；溶出仪（RC-806型，上海隆拓仪器设备有限公司）。

1.2试药养阴生肌散（江苏省中医院医院制剂，批号：1404001、1404002、1404003）；聚乙烯醇 17-50型（国药集团化学试剂有限公司，批号：T20071017）；聚乙烯醇17-88型（阿拉丁，批号：L1409024）；十二烷基磺酸钠（国药集团化学试剂有限公司，批号：20140422）；羧甲基纤维素钠（国药集团化学试剂有限公司，批号：20140520）；甘油（无锡正达药业有限公司）；盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-201401）；液体石蜡（国药集团化学试剂有限公司，批号：20130312）；磷酸（成都市科龙化工试剂厂，批号：2013122801）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。

2　养阴生肌膜的成型工艺研究

2.1成膜材料选择中药膜剂是中药制剂中的一个新兴领域，包括天然或合成高分子成膜材料构成的膜状载体及中药活性成分。通过查阅文献可知，聚乙烯醇（PVA）在体液中溶化慢，作用时间长，具有长效作用，因此采用PVA为成膜材料制备中药膜剂的报道较多，工艺成熟，如芦荟膜剂、丹皮酚口腔药膜、双黄连膜剂等中药膜剂都选用了PVA作成膜材料［3～6］。

故本课题对实验室现有的不同规格的成膜材料：聚乙烯醇17-88（PVA17-88）和聚乙烯醇17-50（PVA17-50）进行成膜性能比较。

精密称取PVA17-88和PVA17-50各1.00 g，分别加入不同比例的双蒸水（PVA∶水=1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶6、1∶7），待充分溶胀后，置水浴中加热至溶。观察溶解情况。再加入不同比例的无水乙醇（PVA∶无水乙醇=1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5），搅拌均匀后，超声脱气，涂布在涂有液体石蜡的干净玻璃板上，干燥。观察成膜情况，结果见表1、2。

表2　加入不同无水乙醇量PVA的成膜情况

通过以上两种不同规格PVA的比较，结果表明，PVA17-88水溶性好于PVA17-50，不同水量PVA17-88在70℃的水浴中即可完全溶解，而不同水量PVA17-50则需要在沸水浴中才能溶解，但有一半是粘结状态。加入无水乙醇后，PVA17-88胶液无明显反应，只是胶液变稀，而一部分PVA17-50胶液却出现白色絮状固体，难以成膜，另一部分PVA17-50胶液成膜后，表面有粒状凸起，柔韧性一般。相比而言，PVA17-88成膜膜面光滑，柔韧性较佳。

综上所述，选择PVA17-88作为本课题的成膜材料。

2.2PVA膜处方的研究试验中发现，单独用PVA制膜，膜较硬，柔软性稍差，为了提高膜材的光滑性、均匀性、柔韧性和成膜性，考虑加入一定量的甘油作为增塑剂，同时考察羧甲基纤维素钠（CMC-Na）作为辅料加入能否对膜的柔韧性进一步提高，故对CMC-Na和甘油的用量进行确定。

取6份PVA17-88（3 g）、3份CMC-Na（2 g），分别用30、20 mL双蒸水浸泡。充分溶胀后，将6份PVA17-88置于水浴上加热溶解，其中3份PVA17-88中加入溶胀完全的CMC-Na，搅拌混和均匀，作为一组。另3份PVA17-88作为一组。两组分别加入不同量的甘油（2.5、5.0、7.5mL），混合均匀，加入适量无水乙醇，超声脱气。待气泡除尽后，涂布在涂有液体石蜡的干净玻璃板上，干燥，脱模，结果见表3。

表3　不同甘油量的两组成膜比较（以光滑性、均匀性、柔韧性和成膜性来形容）

结果表明，加入CMC-Na的一组成膜好于不加CMC-Na的一组。在CMC-Na组中，加入7.5mL甘油的膜油腻，加入2.5mL的甘油成膜较佳，加入5.0 mL的甘油成膜效果最佳。

2.3膜剂成型工艺的优化本课题在单因素考察的基础上，对影响膜剂成型的3个因素，采用3因素3水平的正交设计进行工艺优化。试验因素水平见表4，其中，因素A为CMC-Na与PVA17-88的质量比例，因素 B为药在膜浆的浓度，因素C为 CMC-Na与PVA17-88的总量在膜浆中的浓度。正交设计试验见表5。

表4　因素水平表

表5　正交试验安排

2.3.1外观评价外观评价的标准如下：柔软性（满分10分，脱膜容易，膜的完整性好得分高）；光滑性（满分10分，膜表面无粒状固体，无气泡得分高）；成膜性（满分10分，膜浆易涂布得分高）；均匀性（满分10分，药物分散均匀，膜厚薄一致得分高）。外观评价结果如下表6。

表6　外观评价结果

2.3.2溶解时间评价精密称取各处方膜0.5g，以（37±0.5）℃的水为溶剂（30 mL），观察溶解情况。溶解情况见表7。

2.3.3盐酸小檗碱的含量测定盐酸小檗碱的含量按照《中国药典》2010年版（一部）中黄柏的含量检测方法进行测定［7］，结果见表8。

表7　溶解时间评价结果

表8　盐酸小檗碱含量测定结果

2.3.4综合评价数据处理及评分用多指标试验全概率法［8，9］，进行数据处理，设Bi为第i号试验，Aj为第j个指标，i=1、2、3……n，j=1、2、3……k，且 A1、A2、A3……An，互不相容，又设各指标的重要程度之比为A1∶A2∶A3……Ar=M1∶M2……Mr，则：

以Xij表示第j个指标下的第i个测定值，以Sj表示第j个指标下各次（n次）试验结果的和。即：

［3］式即为同时兼顾各指标综合效应的全概率公式。以膜的外观、膜的溶解时间及盐酸小檗碱含量的加和为综合评分，三者权重系数相同。综合分值公式用下式计算：P（Bi）=P（Bi/A1）+P（Bi/A2）+P（Bi/A3），i=1、2、3……n，结果见表6～8。正交试验的直观分析、方差分析结果如表9、10所示。

由表可以得出结论，因素A、因素B和因素C对试验结果无显著影响（F比小于F临界值）。根据直观分析和方差分析结果，选定A2B2C3（处方5）作为养阴生肌膜最佳的成型工艺处方。即：CMCNa与PVA17-88的质量比例为2∶3，CMC-Na与PVA17-88的总质量在膜浆中的浓度为4％，药粉质量在膜浆中的浓度为2.5％，是养阴生肌膜的最佳处方工艺。

表9　正交直观分析法

表10　正交方差分析表

2.3.5验证试验按照正交试验优选出来的最佳工艺，取7剂药量进行验证，平行做3份。按前面的方法进行膜的外观、膜的溶解时间及盐酸小檗碱含量的测定，结果见表11。

表11　验证试验结果

结果表明，优选出的成型工艺质量稳定，重现性好。

3　养阴生肌膜的质量标准研究

3.1色谱条件色谱条件：Agilent C18（4.6mm× 250 mm，5 μm）；流动相：乙腈-0.1％磷酸溶液（每100 mL加0.1g十二烷基磺酸钠）（36∶64）；流速：1.0 mL·min-1；检测波长：284 nm；进样量：5 μL；柱温：30℃。

3.2溶液的制备对照品溶液：精密称定盐酸小檗碱对照品（6.55 mg）于25 mL容量瓶中，加入适量流动相超声溶解45 min，定容至刻度，摇匀，作为母液（262 μg·mL-1）。用移液管移取2.5mL母液于25 mL容量瓶中，加入流动相定容至刻度线，得到盐酸小檗碱对照品溶液（26.2μg·mL-1）。

供试品溶液：取养阴生肌膜精密称定0.5g，加水30 mL，超声溶解40 min，用移液管移取1 mL溶液于10 mL容量瓶中，加流动相定容至刻度线，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照溶液：按照供试品溶液的制备方法，同法制备盐酸小檗碱的阴性溶液。

3.3方法专属性研究分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪。结果见图1，说明该方法可行。

图1　HPLC图谱

3.4线性关系考察分别精密移取0.2、0.28、0.4、0.6、0.8、1.0 mL盐酸小檗碱对照品溶液（26.2μg·mL-1）到6个10 mL容量瓶中，加流相定容至刻度线，按“3.1”项下色谱条件测定。以峰面积积分值（A）对盐酸小檗碱进样量（C）进行线性回归，得回归方程为A=4.528 1C+1.889 1（r= 0.999 3）。结果表明，盐酸小檗碱的进样量在2.62 ～13.1ng范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 3）。

3.5精密度试验精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液，重复进样6次，按“3.1”项下条件测定。结果RSD=0.95％（n=6），表明仪器精密度良好。

3.6重复性试验取供试品，照供试品溶液制备方法，制备溶液6份，分别进行测定。结果RSD= 0.51％（n=6），表明供试品重现性良好。

3.7溶液稳定性研究取同一供试品溶液，分别在制备后0、2、4、6、12、24 h进样，结果RSD=0.43％，表明其在24 h内稳定。

3.8加样回收率试验精密称取同一批号样品（批号：1404001）共6份，加入相应量的盐酸小檗碱对照品，按“3.1”项下的方法制备并测定，计算回收率，结果见表12。RSD为1.48％（n=6），结果表明本方法准确可靠。

表12　养阴生肌膜中盐酸小檗碱加样回收率试验

3.9样品含量测定分别取3批样品，按“3.2”项下的方法制备供试品溶液，按“3.2”项下条件测定，按外标法计算样品中的盐酸小檗碱含量。RSD= 0.57％（n=3）。结果见表13。

表13　样品含量测定结果

4　讨论

4.1黄柏碱与小檗碱作为处方中主药黄柏的含量测定指标，检视波长分别为265 nm与284 nm，在265 nm波长下，黄柏碱几乎没有吸收，在284 nm处有最大吸收，而小檗碱在2个波长下几乎没有影响，所以选择284 nm作为检测波长。但是在本试验中，因为制备供试品所称取膜的量相对较少，在试验中黄柏碱的峰并不明显，因此本试验通过测定小檗碱含量建立养阴生肌膜质量标准。

4.2本方中含有少量有毒中药雄黄，因时间原因，本课题暂时没有对雄黄的有毒成分制定限度标准，该限度标准将在下一步的试验中进行制定。

4.3与原来的散剂相比，养阴生肌膜的成型工艺简单可靠，含量测定方法准确，可用于该制剂的制备及其质量标准的参考。同时，新剂型将会满足临床的需要，被进一步推广，服务病人。

目前，中药膜剂尚属发展阶段，其以精制度高、工艺简单、疗效精确、缓慢释放、使用舒适、设备便宜、成本低廉等诸多特点，符合中药剂型现代化的改革趋势，具有十分广阔的发展空间。

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The prescription process and quality standard of Yangyin Shengji Membrane

LUO Hui-sheng1，KOU Heng-lie2，FAN Jing1，WANG Xun1
（1.Affiliated Hospital of Nanjing University of TCM，Nanjing 210029，China；2.Nanjing University of TCM，Nanjing 210023，China）

Objective To study the molding process and quality standard of Yangyin Shengji Membrane.Methods The optimum conditions about molding process of Yangyin Shengji Membrane were optimized by the single factor test and the means of the orthogonal design；The content of berberine hydrochloride was determined by HPLC and its quality standard was established.Results The best molding process of Yangyin Shengji Membrane as follow：the mass ratio of CMC-Na and PVA17-88 was 2∶3，the total mass of CMC-Na and PVA17-88 in the plasma membrane was 4％，the concentration of the medicine in the plasma membrane was 2.5％.The linear range of berberine hydrochloride was 2.62～13.1 ng（r= 0.999 3）.The average recovery was 99.4％，RSD=1.48％（n=6）.Conclusion The screened molding process was stable and reliable.The method of measurement was simple and had good reproducibility and specificity.It can provide a basis for the quality evaluation of Yangyin Shengji Membrance.

Yangyin Shengji Membrance；Molding process；HPLC；Quality standard；Berberine hydrochloride

R927.1

A

2095-5375（2015）12-0714-005

江苏省药学会奥赛康临床药学基金（No.201304）

罗会盛，男，副主任中药师，研究方向：中药制剂的研究与标准制定，E-mail：870646578@qq.com

王迅，男，主管中药师，研究方向：中药制剂的研发及质量标准的建立，Tel：025-86614204，E-mail：xiaowangyaoshi@hotmail.com