福建省某公猪站布氏杆菌病的诊断

孙艳发　张敏　戴爱玲等

摘要：为了解福建省某公猪站布氏杆菌病情况，采用平板凝集试验与试管凝集试验相结合的方法以及PCR诊断方法，对该站50头种公猪进行布氏杆菌病诊断。经平板凝集试验筛选，检出疑似阳性血清样本14份，经试管凝集试验复检，确诊阳性血清样本4份。为进一步确诊疑似病例，采用PCR诊断方法，在剩下的10份疑似阳性血清样本中确诊2份。

关键词：猪布氏杆菌病；平板凝集试验；试管凝集试验；PCR

中图分类号：S828；S852.61+4 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）19-4777-02

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.19.030

Abstract： In order to understand the state of Porcine Brucellosis of an Boar Station in Fujian Province， the Plate Agglutination Test and Tube Agglutination Test was used to detect the serum samples collected from boars， as well as Polymerase Chain Reaction （PCR） which was used to test the brucella in sperm of boars.14 serum samples were found positive by the Plate Agglutination Test， then 4 serum samples were confirmed positive by tube agglutination test. Except for the 4 positive samples， 2 out of the 10 samples were confirmed positive by PCR.

Key words： porcine brucellosis；plate agglutination test；tube agglutination test； PCR

布氏杆菌病是动物源性人兽共患病，《中华人民共和国传染病防治法》将其列为乙类传染病，《家畜家禽防疫条例实施细则》将其列为二类动物疫病[1]。该病由布氏杆菌感染引起，包括羊种、牛种、猪种、绵羊型副睾种、沙林鼠种和犬种，其中羊种布氏杆菌、牛种布氏杆菌和猪种布氏杆菌危害较大[2]。布氏杆菌病有多种诊断方法，各检查方法均有较完备的实施标准。本试验采用血清学诊断中平板凝集试验和试管凝集试验，以及PCR诊断技术对福建省某公猪站全部公猪进行布氏杆菌病检测，以淘汰布氏杆菌感染种公猪，确保公猪站无该病流行。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品采集 对福建省某公猪站50头未免疫布氏杆菌疫苗的公猪进行前腔静脉采血并分离血清，同时采取精液，编号，置4 ℃冰箱待检。

1.1.2 药品及配制 平板凝集抗原、试管凝集抗原、布氏杆菌标准阳性血清、布氏杆菌标准阴性血清购自中国疾病与控制中心。石碳酸、NaCl、EDTA、Tris-HCl由福建省龙岩学院生命科学学院动物医学研究所提供。Taq DNA 聚合酶、dNTP和2 000 bp Marker购自宝生物工程（大连）有限公司。引物由上海华津有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 平板凝集试验 按照《布氏杆菌病平板凝集试验操作规程标准》中的技术要求进行操作及结果判定[3]。

1.2.2 试管凝集试验 按照农业部颁发的《中华人民共和国国家标准——动物布氏杆菌病诊断技术》中规定的技术要求进行操作及结果判定[4]。

1.2.3 PCR检测方法 按照《中华人民共和国农业行业标准——奶牛布鲁氏菌病PCR诊断技术》中的技术要求进行操作及结果判定[5]。

2 结果与分析

2.1 血清学诊断结果

运用血清学方法对福建省某公猪站50头公猪布氏杆菌病情况进行确诊，平板凝集试验与试管凝集试验结果见表1。

由表1可知，平板凝集试验结果为阳性的样品有5、9、13、14、16、18、20、22、26、27、29、35、44、46，共14份；试管凝集试验结果为阳性的样品有14、26、29、44，共4份。根据中华人民共和国国家标准《动物布氏杆菌病诊断技术》GB/T18646-2002规定，判定编号14、26、29、44为布氏杆菌感染猪只，编号5、9、13、16、18、20、22、27、35、46的为疑似布氏杆菌感染猪只，需再次检测。

2.2 PCR诊断结果

运用PCR方法对公猪精液进行检测，结果见图1-图4。由图1-图4可知，13、14、16、26、29、44均出现419 bp的带，为阳性。其中14、26、29、44与试管凝集试验疑似相符。而在疑似阳性的10份样品中只有13、16通过PCR方法确诊为阳性。

3 讨论

布氏杆菌病是目前世界上流行最广、危害最大的人畜共患病之一。其一方面直接威胁人民身体健康和公共安全，另一方面影响动物以及动物性产品的贸易，阻碍畜牧业经济发展。布氏杆菌病病原是一种细胞内寄生菌，抗生素对其效果较差，故该病防控以预防为主。对感染动物淘汰是最为理想的方法，因此做出准确诊断尤为重要。

布氏杆菌病的经典血清学诊断方法有虎红平板凝集试验、试管凝集试验、补体结合试验、酶联免疫吸附试验等，这些试验在生产中各有利弊。虎红平板凝集试验最为简单，但就是因为过于简单，其特异性较低，受试验温度和凝集时间相对较短的影响，不易准确判断结果。所以用平板凝集试验检测为阳性者还要经过其他血清学方法进行确诊，才能最终判断为阳性[6]。试管凝集试验是中国法定的诊断布氏杆菌病的方法，其准确性较高，但繁琐费时，不适于现场操作。目前临床上多采取先用平板凝集试验初筛，再用试管凝集试验确诊的诊断思路。另外，20世纪90年代以来，分子生物学技术以其快速、准确、高效等优点已成为布氏菌病检测与诊断应用较多的方法。

本研究采用平板凝集试验与试管凝集试验相结合的方法，最终得到诊断结果为该公猪站50头种公猪中，编号为14、26、29、44的猪只为布氏杆菌感染猪只，编号为5、9、13、16、18、20、22、27、35、46的猪只为疑似布氏杆菌感染猪只，须再次检测。本试验参照《奶牛布鲁氏菌病PCR诊断技术》对公猪站50头种公猪精液进行诊断，检测出阳性条带的样品为13、14、16、26、29、44。其中14、26、29、44与试管凝集试验结果完全相符。在疑似阳性病料中确诊2份阳性，分别为13、16号样品。

参考文献：

[1] 王金良，沈志强.布氏杆菌病研究进展[J].中国动物保健，2008（6）：58-60.

[2] 赵忠鹏，王希良.布氏杆菌毒力因子研究进展[J].微生物学免疫学进展，2007，35（1）：50-53.

[3] SN/T 1088-2002，布氏杆菌病平板凝集试验操作规程标准[S].

[4] GB/T 18646-2002，中华人民共和国国家标准——动物布氏杆菌病诊断技术[S].

[5] NY/T 1467-2007，中华人民共和国农业行业标准——奶牛布鲁氏菌病PCR诊断技术[S].

[6] 孙耀贵，黄姜生，陈 佳.三种血清学方法检测奶牛布鲁氏菌病的比较试验[J].黑龙江畜牧兽医，2005（1）：42-43.