槲皮素减轻顺铂引起肾损伤的作用研究

郑 华 孙 艺* 纪镇华

（沈阳医学院附属中心医院，辽宁 沈阳 110000）

槲皮素减轻顺铂引起肾损伤的作用研究

郑 华 孙 艺* 纪镇华

（沈阳医学院附属中心医院，辽宁 沈阳 110000）

目的 观察槲皮素拮抗顺铂引起肾小管上皮细胞凋亡的作用。方法 6～8周龄雄性Wistar大鼠15只，随机分为3组，每组5只。A组：腹腔注射顺铂6 mg/（kg·d）；B组：腹腔注射顺铂6 mg/（kg·d）+槲皮素50 mg/（kg·d）；C组：正常大鼠。结果 A组大鼠的肌酐水平增加，肾脏间质水肿严重，凋亡蛋白表达增加。B组大鼠肌酐水平低于A组大鼠，凋亡蛋白表达低于A组。结论 槲皮素可拮抗肾小管上皮细胞凋亡，减轻肾脏损伤。

顺铂；槲皮素；肾脏；凋亡

顺铂是一种常见的抗肿瘤药物，已有研究证实顺铂对肾脏的毒性主要表现为对肾小管-间质损伤。槲皮素（3，3’，4’，5，7-五羟基黄酮）是植物界分布最广的黄酮类化合物，本实验研究槲皮素在拮抗顺铂引起肾小管上皮细胞凋亡的作用。

1　材料与方法

1.1动物模型：6～8周龄雄性Wistar大鼠15只，体质量（197.18±8.88）g。随机分为3组，每组5只。A组给予腹腔注射顺铂6 mg/（kg·d），连续性给药3 d；B组：腹腔注射顺铂6 mg/（kg·d）+槲皮素50 mg/（kg·d）连续给药7 d；C组正常大鼠。7 d后处死大鼠，留取血标本及肾脏组织。

1.2免疫组化实验方法：组织浸泡在4%多聚甲醛中固定，蜡块包埋组织，切片。脱蜡，抗原修复，山羊血清封闭10 min，孵一抗4 ℃过夜，bax，bcl-2一抗（santa公司）浓度1∶200，PBS清洗3次，二抗37 ℃孵育15 min，辣根过氧化物酶标记二抗37 ℃孵育15 min，PBS清洗3次，加DAB显色剂，显棕色后水洗终止反应，苏木素复染10 min后水洗。梯度酒精脱水，二甲苯透明，光学树脂胶封片。随机选取光镜400倍下5个视野进行半定量分析，每个视野含1个肾小球及附近10个肾小管，按肾小管染色百分比评分：0～10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，76%～100%为4分，染色强度评分（不着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分），评分值=（阳性率评分+染色强度评分）/2。

1.3统计学方法：所有数据均采用SPSS13.0统计软件分析，数据采用方差分析进行统计学处理，P＜0.05具有统计学差异。

2　结 果

2.1A组大鼠的肌酐水平增加，B组大鼠肌酐水平低于A组大鼠，但高于正常组。P＜0.01，见表1。

2.2免疫组化结果：A组大鼠的肾间质水肿严重，bax表达较正常组明显增加，B组大鼠肾脏损伤改变减轻，bax表达较A组下降，Bcl-2表达较A组增加。具体见图1、2和表2。

表1　各组大鼠肌酐、尿素氮水平变化

图1　bax表达的免疫组化结果（×400）

图2　Bcl-2表达的免疫组化结果（×400）

表2　光镜下免疫组化评分

3　结 论

给予顺铂注射组大鼠的肌酐水平较正常组升高，t检验，P＜0.01，有统计学意义，Western blot结果示bax表达明显增加；顺铂+槲皮素注射后大鼠肌酐水平低于顺铂组大鼠，bax表达低于单纯注射顺铂组大4讨 论

鼠，bcl-2表达高于单纯注射顺铂组大鼠，t检验，P＜0.01。单纯注射槲皮素大鼠与正常组比较无明显变化。槲皮素可减轻顺铂引起的肾间质水肿及减少细胞凋亡，改善肾功能。

顺铂在肿瘤治疗中占有十分重要的地位，但其在肿瘤治疗的同时，肾毒性作用也陆续被大量研究所证实，顺铂对肾脏的毒性包括对线粒体的损伤，活性氧的增多，启动细胞凋亡途径等［1-2］。过度凋亡可导致肾组织结构和功能丧失。凋亡作为细胞丢失的途径之一，同样可造成肾小管基底膜裸露、转运功能丧失及小管液回漏等功能障碍，成为少尿或无尿的病理生理基础。有研究表明，肾小管上皮细胞凋亡在肾间质纤维化中具有重要作用［3］。槲皮素（quercertin）是黄酮类化合物，主要有抗氧化，抗炎，抗增殖，抗肿瘤，降血压，抗血小板聚集，抗动脉粥样硬化等作用［4］，可减轻肾脏组织纤维化［5-6］。Bcl-2家族成员在细胞凋亡过程中起着至关重要的作用，目前认为Bax同源二聚体能促进细胞凋亡，而Bcl-2则通过与Bax竞争结合，形成异源二聚体来抑制细胞凋亡。Bcl-2与而Bax比值下降可进一步导致caspase-3和caspase-9活化，最终导致细胞凋亡［7］。本研究结果表明应用顺铂后肾小管上皮细胞肿胀水肿，凋亡蛋白bax表达增加。给予槲皮素后顺铂所致的肾脏间质纤维化减轻，肾功能改善，考虑槲皮素中的黄酮类化合物抑制了氧自由基大量生成，以及由此引起的脂质过氧化反应，抑制了肾小管上皮细胞凋亡及坏死。

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Quercertin Protect Renal Injury Induced by Cisplatin

ZHENG Hua， SUN Yi， JI Zhen-hua
（Affiliated Central Hospital of Shenyang Medical College， Shenyang 110000， China）

Objective To study if quercertin can protect renal tubular cells apoptosis induced by cisplatin. Methods 15 male wistar rat devided into three groups. Group A： cisplatin intraperitoneal injection 6 mg/（kg·d）. Group B： cisplatin intraperitoneal injection 6 mg/（kg·d）+quercertin 50 mg/（kg·d）. Group C：normal rat. Result The blood creatinin of group A increased， interstitial of kidney injured， the apoptosis protein express increased. The level of creatinin and apoptosis protein of group B is lower than group A. Conclusion Quercertin can protect renal tubular cells apoptosis induced by cisplatin.

Cisplatin； Quercetin； Kidney； Apoptosis

R282.710.7

B

1671-8194（2015）26-0001-02

沈阳医学院青年基金（项目编号：20142052）