乳糜血液对第四代HIV试剂检测结果的影响及检验对策

李永珍 张志红

【摘要】目的：探讨脂肪血标本对第四代HIV酶联免疫吸附试验（ELISA）检测HIV抗原/抗体的影响及检验对策。方法： 收集正常标本、轻度、中度、重度乳糜样本各20例，在不同程度的乳糜血浆中加入一定浓度的HIV阳性血清，按保存时间顺序，从不同血浆位置取样检测，对检测灵敏度和OD值进行比较。结果：不同程度的乳糜血液随放置时间的延长，不同位置的检测结果有明显差异，轻度乳糜血液上层标本在立即检测时，就与正常标本检测结果有显著差异（P<0.05），中、重度乳糜标本上层血液在立即检测时，与正常标本有极显著差异（P<0.01）；轻度乳糜血液中、下层标本在立即检测和1d时，与正常标本检测结果无差异，从第3d时，与正常标本检测结果出现显著差异（P<0.05）；中、重度乳糜标本中、下层血液在立即检测时，与正常标本无明显差异，从第1d起，分别出现显著和极显著差异。结论：乳糜标本的乳糜程度对ELISA法4代HIV试剂有明显影响，检测乳糜血液时，加样应避开乳糜层，尽量从血浆中下部分取样，且轻度乳糜血液检测时间不超过3 d，中度检测时间不超过1d，重度的必须立即检测。

【关键词】乳糜；ELISA；HIV

【中图分类号】R722.12 【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2015）03-0580-01

人类免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus，HIV），反转录病毒科，慢病毒属（Lentivirus）。该病毒主要破坏人体的免疫能力，导致免疫系统失去抵抗力，而导致各种疾病及癌症并得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病（获得性免疫缺陷综合症），主要经输血，针刺，吸毒等传播。因敏感、特异、操作简便、重复性好等优点，已在疾病诊断、科研等医学领域中得到广泛应用[1]。ELISA方法检测对标本的要求是：空腹抽血，标本不能乳糜。但是在血站日常工作中，无偿献血一般都在餐后进行，所以经常会遇到乳糜的标本，为了了解乳糜标本对第四代国产HIV检测试剂的影响，我们对新型HIV试剂进行了乳糜因素对试剂检测结果影响的评估，并针對乳糜标本的特点，提出一种检验对策，现将结果报告如下：

1材料与方法

1.1 一般资料

临床收集2012年1～12月我单位检测的无偿献血者标本，以淡黄色透明血浆标准管进行清晰度比较，与标准管清晰度一致的稀释倍数为该血浆的乳糜指数，乳糜指数≤2为轻度乳糜血液，3～5为中度乳糜血液，>5为重度乳糜血液[3-5]。收集正常标本、轻度、中度、重度乳糜样本各20例，经HIV检测结果均为阴性。阳性血液为OD值约2.5的阳性样本，经WB法确认为阳性。

1.2 仪器与试剂 德国西门子公司BEPIII型全自动酶免分析仪；RSP全自动加样仪；Tecan公司Sunrise酶标仪。北京万泰HIV四代试剂，批号H201211048。

1.3 方法：

灵敏度及不精密度测定：分别向正常血液、轻度、中度乳糜血液和重度乳糜血液加入同样浓度、同样量的HIV强阳性血清，使血液的检测结果在2-4倍Cutoff值之间，按立即、4℃静置1d、3d、7d，分别进行检测，每天1次。实验由同一个操作人完成，严格按照试剂说明书进行操作，计算 、CV及灵敏度。

1.4 统计学方法采用SPSS 13.0统计软件进行方差分析，比较脂血对丙肝试剂检测OD值的影响。P<0.05 为差异有统计学意义。

2结果

不同程度乳糜血液与放置时间的检测结果比较见表1。

表1 不同程度的乳糜血液与放置时间的检测结果比较

讨论

乳糜血液，对于实验室生化及免疫检测，都有许多不利的影响[2，3]，故此，一般体检均要求空腹采血，因空腹采血可有效避免乳糜血液的产生。但是，由于血站工作的特殊性，献血者多数是在餐后捐献血液，故乳糜血液标本在血站检测标本中占有很大比例，并且，由于献血者个人因素的影响，基本不可能重新采集标本进行检测。为此，就要求血站检验部门，对乳糜血液对检测结果的影响进行系统、全面的评估，只有这样，才可以在兼顾血液检测质量的同时，最大程度的保护珍贵的血液资源。

乳糜对于酶免检测结果的影响，主要有两个方面：一方面，在反应过程中，乳糜微粒可形成乳糜层，覆盖在与游离酶标记物与结合酶标记物之上干扰洗板，导致最后显色反应加强；另一方面，由于乳糜微粒体积大、比重轻，放置一段时间后会形成厚薄不等的乳糜上层，而仪器是从上至下根据液体高度加样，当乳糜层较高时，加入的乳糜血液量多，则血清加入量相对减少，同时乳糜微粒的大小对加样也有影响，乳糜微粒大，加样的液体体积就减少，且大小不一致，使测定结果偏低，误差增大，CV偏大。

万泰第四代HIV试剂的加样量为100ul，在检测过程中，乳糜标本对HIV试剂两方面的影响可能都会有，但是从表1结果的显示来看，第二方面的影响是主要的；并且与正常血液组比较，不同程度的乳糜血液上层标本，其检测结果的平均OD值与放置时间成反比例关系，乳糜血液程度越严重，放置时间越长，OD值下降幅度越大；而乳糜血液中、下层标本，其检测结果的OD值与放置时间的关系与上层标本相比，下降幅度较小。轻度乳糜血液上层标本在立即检测时，就与正常标本检测结果有显著差异，中、重度乳糜标本上层血液在立即检测时，与正常标本有极显著差异；轻度乳糜血液中、下层标本在立即检测和1d时，与正常标本检测结果无差异，从第3d时，与正常标本检测结果出现显著差异；中、重度乳糜标本中、下层血液在立即检测时，与正常标本无明显差异，从第1d起，分别出现显著和极显著差异。

通过以上实验，乳糜标本对第四代HIV-Elisa试剂的检测结果仍然有很大的影响。要控制乳糜标本的影响，首先，要在献血招募时加大宣传力度，宣传乳糜血液对输血的影响，让更多的人知道献血前应合理饮食，并且在体检医师对献血者的问诊中增加饮食内容，对有明显高脂肪饮食者进行适当的劝阻或改约。其次，在实验室检测环节，从标本接收步骤起，就应加强标本核查，对乳糜标本进行特殊标记，并对乳糜程度进行检查，轻度乳糜血液放置时间不超过3d，中度乳糜血液不应超过1 d，重度乳糜血液应立即检测。第三，针对乳糜标本CV值较大的特点，对乳糜标本的检测结果应采用较大的灰区范围，这样可有效提高乳糜血液的阳性检出率，防止重度乳糜血液的漏检，确保输血安全。

参考文献

[1]孙玉荣.乳糜血溶血标本对丙型肝炎抗体检测的影响[J].山西医药杂，2011，40（1）：81-82.

[2]刘运保.乳糜血液对ELISA检测结果的影响[J] .临床输血与检验，2007，9（3）：226-228.

[3]韩戈，宵春容，文定碧.酶标仪比浊法测定血浆乳糜程度[J].中国输血杂志，2005，18（4）：304.

[4]史光耀，刘衍春，唐荣才.微量快速法检测血液乳糜程度[J].临床输血与检验，2005，7（1）：27.

[5]国家质量技术监督局.测定血液乳糜程度的方法.中华人民共和国国家标准GBl8469—2001Is3，2001.14