高效液相色谱质谱法测定猪肉中的莱克多巴胺

引言

瘦肉精是指能够促进瘦肉生长的一类药物的统称，主要包括：盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇等肾上腺素受体激动剂。猪摄入瘦肉精后能加速生长、降低脂肪沉积、提高瘦肉率、提高饲料报酬，但猪食用瘦肉精后会在组织内形成残留，人类食用后直接危害人体健康。2002年农业部、卫生部和国家药品监督管理局联合发文，将盐酸克伦特罗和莱克多巴胺一同列入《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》（中华人民共和国农业部公告 第176号）。

2008年以来，国内就多次发生由于猪肉中高浓度的瘦肉精导致的中毒事件。莱克多巴胺过量摄取会引起神经兴奋，出现肌肉振颤、心慌、头疼、恶心、呕吐、甚至心脏骤停致昏迷死亡等症状，特别对心律失常、高血压、青光眼、糖尿病和甲状腺机能亢进等患者有极大危害。所以对猪肉中的莱克多巴胺含量进行检测很有必要。

1.试验部分

1.1主要仪器与试剂

1.1.1仪器

Agilent 6460高效液相色谱质谱联用仪

J2Scientific Preplinc AS4全自动固相萃取仪

1.1.2试剂

莱克多巴胺，纯度97.0%

乙酸铵（0.2mol/L）：称取7.7g乙酸铵，加水溶解并稀释至500mL，用乙酸调pH至5.2

β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶

高氯酸（0.1mol/L）：称取14.35g 70%高氯酸，加水稀释至1000mL

氢氧化钠溶液（10mol/L）：称取400g氢氧化钠，加水溶解并稀释至1000mL

甲酸水溶液：2%

甲醇-0.1%甲酸溶液（10：90）

1.2仪器工作条件

1.2.1色谱条件

色谱柱：Agilent SB-C18 50mm×2.1mm×1.8?m 流速：0.4ml/min

柱温：40℃ 进样体积：2?l 流动相：A0.1%甲酸水 B 0.1%甲酸乙腈

梯度 时间（min） %A %B

0 92 8

1 92 8

5 60 40

8 92 8

1.2.2质谱条件

干燥气温度：350℃ 干燥气流速：5L/min 雾化气压力：45psi

鞘气温度：400℃ 鞘气流速：12L/min

待测物 MRM通道（m/z） Fragmentor（V） Collision Energy（V）

莱克多巴胺 320.2>164.0 90 15

莱克多巴胺 320.2>107.1 90 25

1.3试验方法

1.3.1工作曲线

准确移取莱克多巴胺标准工作液，用流动相稀释成浓度分别为2，4，8，16，40?g/L的莱克多巴胺标准溶液，供高效液相色谱质谱分析。以莱克多巴胺为横坐标，离子峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。

1.3.2样品的预处理

准确称取2.00g测试样品于50ml离心管中，加入0.2mol/L乙酸铵溶液（pH=5.2）8.0ml，再加入β-葡萄糖醛苷酸酶/芳基硫酸酯酶40?l，涡旋混匀，于37℃下避光水浴振荡16h酶解后放置至室温，10000r/min高速离心10min，倾出上清液于另一50ml离心管内，加入0.1mol/L高氯酸溶液5ml，涡旋混匀，用高氯酸调pH至1.0，10000r/min高速离心10min后，将上清液转移至另一50ml离心管内。用10mol/L氢氧化钠溶液调pH至9.5，加入乙酸乙酯15ml，涡旋混匀，并振荡10min，5000r/min离心5min，取出上层有机相至另一50ml离心管内。再在下层水相中加入叔丁基甲醚10ml，涡旋混匀，并振荡10min，5000r/min离心5min，合并有机相，50℃下氮气吹干，用2%甲酸水溶液5ml溶解，經全自动固相萃取仪萃取、净化，最后用甲醇-0.1%甲酸溶液（10：90）0.2ml溶解，供高效液相色谱质谱联用仪测定。

1.3.3测定

将仪器调至最佳测定条件，设定标准系列各点浓度及试样质量、定容体积、稀释倍数。待仪器稳定后依次测定标准空白溶液、标准系列、样品空白溶液、样品溶液。

2.结论

采用高效液相色谱质谱法建立了猪肉中的莱克多巴胺含量的检测方法。样品中残留药物经酶解后，再高速离心去蛋白，用乙酸乙酯和叔丁基甲醚提取，固相萃取、净化，经Agilent SB-C色谱柱分离，梯度洗脱，外标法定量。经实际样品检测的试验，该方法稳定、准确，适合于肉制品中莱克多巴胺的日常检测。

（作者单位：马鞍山市产品质量监督检验所）

作者简介

方猛，男，1975年生，马鞍山市产品质量监督检验所食品化工室主任，高级工程师.