香芍胶囊挥发油中桉油精的HPLC含量测定方法研究

张 林 朱丽萍 张爱军

1.成都中医药大学，四川成都611137；2.四川省中医药科学院，四川成都610041

香芍胶囊方中的川芎、香附、豆蔻等6味药含有药用挥发油，其中豆蔻挥发油含桉油精且豆蔻用量较大。桉油精作为处方中挥发油的有效成分，提取中对桉油精的合理控制，在一定程度上间接控制了挥发油的质量。但桉油精属于小分子挥发性化合物，有关桉油精的含量测定大多采用GC法，但色谱条件差异较大[1-12]。HPLC有更好的普适性[13]，HPLC法也应用于多种挥发性成分的含量测定[14-15]。故拟建立HPLC法测定桉油精含量，为控制香芍胶囊挥发油质量提供依据。

1 仪器与材料

AUW200D分析天平（日本岛津SHIMADZU），高效液相色谱分析仪（Agilent 1200 series），桉油精对照品（中国食品药品检定研究院，110788-201105，99.9%），所用药材由扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司提供并鉴定，均符合药典规定；除乙腈为色谱纯，其余所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 挥发油的提取

取处方中6味含有药用挥发油药材，加5倍于药材量的水，挥发油提取器加热回流提取5h，静置1h，取油层，即得。

2.2 含量测定方法

2.2.1 溶液配制 对照品溶液制备：取桉油精标准品约5mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的制备：取挥发油约10mg，精密称定，置10mL容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤（0.45μm），取续滤液，即得。阴性溶液制备：处方中缺豆蔻药材，其余药材量不变，按2.1项下方法提取挥发油，按供试品溶液制备方法制成阴性溶液，即得。

2.2.2 色谱条件与系统适用性研究 色谱柱：Diamonsil C18（2）（250nm×4.6nm，5μm）；检测波长：203nm；流动相：水-乙腈（53:47）；柱温：30℃；流速：1.0mL/min；进样量：10μL。在此色谱条件下，供试品图谱中干扰峰对桉油精峰无干扰，并与桉油精峰达到基线分离，理论塔板数大于20000，峰型尖锐，基线平稳。色谱图见图1。

2.2.3 线性关系考察 精密称取桉油精对照品适量，加乙腈制成0.6595 mg/mL溶液，分别吸取1、3、5、7、10、15、20、25、30μL，按上述色谱条件测定峰面积，以桉油精进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，回归方程为：Y=118.48X+4.0292，r=0.9999，表明进样量在1.319～39.570μg范围内线性关系良好。

2.2.4 精密度实验 精密吸取10μL对照品溶液，重复测定6次，以桉油精峰面积计算，RSD为0.35%，表明仪器精密度好。

2.2.5 稳定性实验 取供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、24h 进样，每次 10μL，同法测定，以桉油精峰面积计算，RSD为0.48%，结果表明供试品溶液在24h内稳定。

2.2.6 重复性实验 取同一批挥发油，按2.2.1项下制备6份供试品溶液，分别测定，每次10μL，测定含量RSD为1.27%，表明方法的重复性良好。

2.2.7 加样回收率实验 精密称取已知含量的挥发油6份，每份约5mg，精密称定，置10mL容量瓶中，分别精密加入含桉油精约8.313mg/mL的对照品溶液1mL，按2.2.1项下供试品溶液制备方法制备，即得。按2.2.2项下方法测定含量，计算加样回收率，结果桉油精的平均加样回收率（n=6）为103.60%，RSD为1.11%。

图1 系统适用性实验HPLC图

表1 桉油精加样回收试验

2.3 样品测定

按2.1项下方法提取3批挥发油。每批测定2份。测定结果见表2。

3 讨论

3.1 色谱柱的选择

本实验考察了在相同色谱条件下，不同色谱柱的分离效果。考察了phenomenex luna C18（2）（150mm×4.6mm，5μm），Dikma Diamonsil C18（2）

（250mm×4.6mm，5μm），luna色谱柱不能分离，Diamonsil色谱柱分离效果好，柱长对其影响较大。

表2 样品含量测定（mg/mL）

3.2 洗脱条件的选择

同时使用供试品和阴性供试品，以保证即能达到分离效果，又能确保阴性无干扰，考察了乙腈-水（70∶30）；乙腈-水（64∶36）；乙腈-水（60∶40）；乙腈-水（48∶52）；乙腈-水（47∶53）；乙腈-水（46∶54）；乙腈-水（45∶55）；乙腈-水（40∶60）；乙腈-水（25∶75），结果显示乙腈-水（47∶53）能够基线分离，且阴性对照无干扰，含量测定方法简便可行。

3.3 波长选择

采用紫外-可见分光光度计对桉油精标准品进行200～800nm扫描，桉油精为末端吸收，200～350nm有一定紫外吸收，350nm后几乎无吸收，且在吸收区间内为波长与吸光度的单调递减函数。文献在建立桉油精HPLC分析时使用203nm下分析，干扰小，结果可行[13，16]。本研究参考文献值203nm，桉油精分离效果好，干扰小。

3.4 气相色谱法

按中国药典2010版豆蔻项下含量测定法[17]对 20140804、20140805、20140806批挥发油测定，桉油精平均含量645.76mg/mL，RSD为1.07%。故认为本研究中HPLC法可以代替气相色谱控制挥发油质量。

本研究品种具有平肝理气、除胀止痛、疏肝和胃之功效，用于治疗妇女经期综合征。方中挥发油是该品种发挥药效的重要组成部分，本实验建立挥发油质量控制方法，是成品质量得到保证的依据。

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