高效液相色谱法测定吉西他滨含量

刘红

哈药集团生物工程有限公司

高效液相色谱法测定吉西他滨含量

刘红

哈药集团生物工程有限公司

目的建立吉西他滨含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为KromasilC8（250mm*4.6mm,5mm），以甲醇：0.075mol/L的醋酸铵溶液为流动相，检测波长为275nm。结果耐用性试验符合规定，溶液溶度在一定范围内线性关系良好，重复性及中间精密度符合规定，溶液稳定性研究结果表明溶液在24小时内稳定。结论所建立的含量测定方法操作简便、准确，重现性好，与滴定法测定无差别，所建立方法可用于本品含量测定。

盐酸吉西他滨；方法学；高效液相色谱法；滴定法

盐酸吉西他滨是一种破坏细胞复制的二氟核苷类抗代谢物抗癌药，是去氧胞苷的水溶性类似物，对核糖核苷酸还原酶是一种抑制性的酶作用物的替代物，这种酶在DNA合成和修复过程中，对所需要的脱氧核苷酸的生成是至关重要的。我们采用高效液相色谱法测定盐酸吉西他滨含量，建立本品含量测定方法。

1.仪器与试药

Agilent 1260 Series高效液相色谱仪，甲醇为色谱纯，色谱柱KromasilC8（250mm*4.6mm,5mm）盐酸吉西他滨对照品（批号：100622-201202，50mg/支，含量：99.8%），盐酸吉西他滨由哈药集团生物工程公司提供，其它试剂均为分析纯。

2.方法与结果

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇：0.075mol/L的醋酸铵溶液（用醋酸调pH至5.0）（80：20）为流动相，检测波长为275nm。理论板数按盐酸吉西他滨峰计算应不低于8000。

测定法取本品，精密称定，用流动相溶解并制成每1m l含20μg的溶液，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，另精密称取对照品，同法测定。按外标法以峰面积计算，即得。

2.1 耐用性试验

更换色谱柱（相同品牌不同批号的色谱柱）、流动相比例、柱温及流速，考察样品含量测定结果的差异，结果表明各项指标变化对含量测定结果无明显影响，耐用性试验符合规定。

2.2 线性范围

精密称取盐酸吉西他滨对照品51.6mg，加流动相溶解并稀释制成浓度约为5mg/m l的溶液，摇匀，作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备液0.5ml、1ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，置10ml容量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，摇匀。制成系列溶度溶液，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，计算线性回归方程，结果当进样量为20μl时盐酸吉西他滨在0.25mg/m l～1.5mg/m l浓度范围内线性关系良好。

2.3 准确度试验

精密称取盐酸吉西他滨对照品2份，加流动相并稀释制成1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。另精密称取盐酸吉西他滨原料9份，制成浓度为0.8mg/m l的盐酸吉西他滨溶液三份，制成浓度为1.0mg/m l的盐酸吉西他滨溶液三份，制成浓度为1.2mg/m l的盐酸吉西他滨溶液三份，作为供试品溶液的80%、100%、120%组。精密量取对照品溶液及各供试品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算盐酸吉西他滨的含量，计算回收率。结果吉西他滨的平均回收率为99.1%，相对标准偏差为0.5%，准确度试验符合要求。

2.4 重复性及中间精密度试验

精密称取盐酸吉西他滨原料适量，分别加流动相使溶解并稀释制成供试品溶液，共制备6份供试品溶液。按照拟定的含量测定方法进行试验，结果表明本品平均含量为99.7%，RSD为0.6%，重复性较好。

取供试品盐酸吉西他滨供试品，照含量测定方法进行试验，变动因素为人员、时间及实验仪器，考察含量测定结果变化情况。结果12次测定吉西他滨原料的平均含量为99.8%，RSD为0.7%，中间精密度符合规定。

2.5 溶液稳定性试验

精密称取盐酸吉西他滨原料及盐酸吉西他滨对照品各供适量，按照含量测定方法制备盐酸吉西他滨供试品溶液及对照品溶液，在25℃及5℃条件下分别放置24小时，分别于0小时、1小时、2小时、4小时、6小时及8小时、12小时计24小时进样。考察供试品及对照品溶液主峰峰面积变化，结果供试品及对照品溶液主峰峰面积相对标准偏差分别为0.16%及0.24%，含量变化在±1%以内，表明供试品溶液及对照品溶液在25℃及5℃条件下放置24小时稳定。

2.6 定量限

取盐酸吉西他滨对照品，加流动相使溶解，作为定量限测定的对照品溶液，根据吉西他滨主峰与基线的信噪比，不断稀释对照品溶液进样，当信噪比约为10：1时溶液浓度为定量限溶液溶度，结果在溶度为0.1ug/m l时信噪比约为10：1。取此时对照品溶液，重复进样6次，相对标准偏差为0.51%，符合规定。

2.7 样品含量测定

取盐酸吉西他滨原料，采用拟确定的含量测定方法进行测定，结果三批样品含量分别为100.6%，99.8%，99.6%。为评价含量测定方法准确定，采用滴定法[5-6]对含量进行测定，结果三批样品含量分别为99.9%，99.4%及99.6%，高效液相色谱法与滴定法测定结果一致。

3.讨论

所建立含量测定方法可行，操作简便，结果准确，重现性好，专属性强，与滴定法相比含量测定结果一致。可用盐酸吉西他滨原料的含量测定。

[1]李益振,李臣贵,胡育筑.HPLC法测定盐酸吉西他滨含量及有关物质,海峡药学，2010年第6期:67-70.

[2]王广明,王清,秦丽丽.高效液相色谱法测定注射用盐酸吉西他滨中主药的含量.世界最新医学信息文摘,2013年第23期:6-7.

刘红（1978-），女，黑龙江哈尔滨市人，哈药集团生物工程有限公司，质量检测中心，化验员，工程师。