维吾尔药材驱虫斑鸠菊质量标准研究△

阿不都瓦尔·阿布拉克 沙拉麦提·艾力 王亚丽

(1.新疆维吾尔自治区维吾尔医医院，新疆 乌鲁木齐 830049;2.新疆维吾尔自治区食品药品检验所，新疆 乌鲁木齐 830004)

驱虫斑鸠菊为维吾尔医常用药材，维吾尔语名为“Kali zire ”，译音即“卡力 孜然”。其植物基源均为菊科植物驱虫斑鸠菊Vernonia anthelmintica Willd. 的成熟果实［1-3］。我国分布于云南西部。国外分布于印度、巴基斯坦、斯里兰卡、尼泊尔、阿富汗、缅甸、老挝、马来西亚等。生于宅旁荒地或路旁，新疆和田县、阿克苏地区有栽培。性质为三级末干热，具有清除过盛黏液质，促进色素沉着，恢复皮肤颜色，祛湿消肿，散寒止痛，驱虫等功效。临床用于白癜风，湿寒性炎肿，湿痹疼痛，肠道寄生虫等症。目前以其为主药研制的单味和复方制剂有注射剂、软膏、擦剂、丸剂、片剂等［4-6］。卫生部药典会编《中华人民共和国卫生部药品标准-维吾尔药分册》(1998 年)收载了驱虫斑鸠菊，只有性状和显微鉴别项。本标准修订了基源、性状项，增加了薄层色谱鉴别、水分、总灰分、酸不溶性灰分、含量测定等项，使质量标准得到了全面提高。

1 仪器与试药

1.1 仪器：岛津LC- 20AT 高效液相色谱仪，SPD-M10AVP 二极管阵列检测器，Lab solution 色谱工作站(日本岛津);CPA 225D 型电子分析天平(德国sartorius 公司)中草药粉碎机(德国IKA)，定量毛细管(美国Drummond Scientific Company)，OLYMPUS BX- 51 生物显微照相系统(日本)，CAMAG REPROSTAR3 薄层色谱成像系统(瑞士卡玛柯公司);KLZ-UP 超纯水仪(台湾艾柯成都康宁实验专用纯水设备厂)。KUDOS SK7210LHC 型超声仪(上海科导超声仪器有限公司)

1.2 试药：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。对照品：绿原酸对照品(中国食品药品检定研究院，批号：110753-200413，供含量测定用)。样品：驱虫斑鸠菊样品11 批，经自治区食品药品检验所苏来曼·哈力克主任药师鉴定均为菊科植物驱虫斑鸠菊Vernonia nthelmintica Willd.的成熟果实。

2 方法与结果

2.1 性状：本品呈倒圆锥形，长4 ～6mm，直径1 ～2mm，表面棕色至墨绿色，顶端平截，下端稍细。具10 条纵向突起棱肋，用放大镜观察，棱肋处被短柔毛。气特异，味极苦。

2.2 显微鉴别：横切面：外果皮细胞l 列，方形，在棱脊处可见棕色单细胞和叉状非腺毛，在肋间凹陷处有棕黄色卵形或乳头状单细胞腺毛。中果皮细胞多层，棱脊处中央有维管束，木质部内侧有石细胞群和纤维群散在，最内侧有石细胞带，从棱脊一直延伸与另一棱脊石细胞带相连，在每个棱脊处断开，呈V 字形。薄壁细胞中含众多草酸钙方晶和柱晶。内果皮细胞黄棕色。种皮细胞2 层，黄棕色。胚乳不发达，为2 ～3 层薄壁细胞，中央有子叶2 枚，子叶为长圆形，外侧有1 层方形细胞，内有长方形细胞，其间有维管束。(见图1)

粉末：粉末棕黄色，石细胞为类圆形、椭圆形或纺锤形，成群或单个散在，棕黄色，细胞壁厚，直径20 ～35μm，长120μm，孔沟明显。腺毛为单细胞卵形，长23 ～25μm。非腺毛单一或呈叉状，长达160μm。螺纹导管直径15 ～25μm。果皮细胞含有方晶和柱晶。种皮细胞黄棕色，细胞壁形状特异，呈网纹状。胚乳细胞多角形，内含众多油滴。

图1

2.3 薄层色谱鉴别 取本品粉末2g，加甲醇20mL，超声提取20min，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL 使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品适量，加甲醇制成每1mL 含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典2010年版一部》附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液20μL，对照品溶液5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7：2.5：2.5)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，见图2。

图2

2.4 杂质：按(《中国药典2010 年版一部》附录ⅨA)规定测定样品，杂质量为0.5% ～12.3%，平均值为4.6%(n =11)。

2.5 水分：按(《中国药典2010 年版一部》附录ⅨH)第一法规定测定，结果水分含量为5.5% ～6.7%，平均值为6.3% (n=11)。

2.6 总灰分：按(《中国药典2010 年版一部》附录ⅨK)规定测定，结果总灰分为5.2% ～11.4%，平均值为7.7% (n=11)。

2.7 酸不溶性灰分：按(《中国药典2010 年版一部》附录ⅨK)规定，结果酸不溶性灰分为0.2% ～6.1%，平均值为2.5% (n=11)。

2.8 重金属及有害元素：按(《中国药典2010 年版一部》附录ⅨB)(原子吸收分光光度法)规定测定样品。重金属及有害元素均未超出药典规定限度。

2.9 含量测定

2.9.1 色谱条件：色谱柱为Agilent TC-C18 (4.6mm ×150mm ，5μm);流动相以乙腈为A，以0.2%磷酸溶液为B按表1 梯度洗脱;检测波长：280nm;流速：1.0mL/min ，柱温：30℃。

表1 梯度洗脱流动相比例

2.9.2 对照品溶液的制备：精密称取绿原酸对照品适量，加75%甲醇制成每1mL 含30μg 的溶液，作为对照品溶液。

2.9.3 供试品溶液制备 取本品粉末(过三号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75%甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率350W，频率59kHz)60min，放冷，再称定重量，用75%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液。

2.9.4 标准曲线制作：精密称取绿原酸对照品适量，加75%甲醇适量溶解，摇匀，制成每mL 含绿原酸1.218μg、5.22μg、15.225μg、30.45μg、60.9μg、91.35μg 的系列浓度对照品溶液，分别进样10μL，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行回归，绿原酸标准曲线方程为：Y =30454X-5743.7，r2 =0.9999。绿原酸在1.218μg ～91.35μg 范围内，有良好的线性关系。

2.9.5 精密度试验：精密吸取供试品溶液，重复进样6 次测定绿原酸的峰面积值，计算相对标准偏差，结果绿原酸的RSD=0.0709%，显示精密度良好。

2.9.6 稳定性试验：取同一供试品溶液，室温下放置，每隔2h，连续测定绿原酸的峰面积值，计算RSD 为0.15%，表明供试品溶液室温下36h 内稳定。

2.9.7 重复性试验：取同一样品6 份，照前述方法测定，结果绿原酸的峰面积的RSD 为0.41%，表明重复性良好。

2.9.8 回收率试验：取已测定量1.0g，共9 份，精密绿原酸对照品溶液(0.0816mg·mL-1)4mL、5mL、6mL，按上述色谱条件下测定，计算回收率。绿原酸平均回收率为102.5%，RSD 为1.25%。

2.9.9 样品的测定 分别精密称取11 批不同产地、不同采集期驱虫斑鸠菊药材粉末各1g，按正文方法测定，记录HPLC 图谱，外标法计算含量，结果绿原酸含量为0.074%～0.184%，平均0.110%(n=11)。

3 讨论

3.1 杂质、水分、总灰分和酸不溶性灰分是平价药材质量的主要参数。相应的限度是水分必要的。根据试验结果，规定其杂质不得过6%，水分不得过8.0%，总灰分不得过10.0%，酸不溶性灰分不得过3.0%。重金属及有害元素均未超过百万分之十，暂不在质量标准中设置此项目。

3.2 本试验中多次探索流动相，最终选择梯度洗脱以确保峰形较好、基线平稳、保留时间稳定，杂质峰较少。

3.3 上述研究项目内容全面，方法简便快速，能有效控制维药材驱虫斑鸠菊的质量。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准-维吾尔药分册［S］. 乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1998，47.

［2］国家中医药管理局中华本草编委会.中华本草-维吾尔药卷［M］.上海：上海科技出版社，2005：164-165.

［3］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.第74 卷.北京，科学出版社，1979：08.

［4］中国药品生物制品检定所等.中国民族药志［M］.第1卷.人民卫生出版社，1990;249-252.

［5］新疆植物志编委会. 新疆植物志［M］. 第5 卷. 新疆科技卫生出版社，1999：473.

［6］刘勇民，沙吾提. 衣克木. 维吾尔药药志［M］. 乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1993;207.