蒙药材花锚中黄酮类提取工艺条件的研究

敖道夫 巴达拉胡

(内蒙古民族大学附属医院，内蒙古 通辽 028000)

蒙药材花锚蒙古名为西依热地格达、库日迪克、都莫迪克、达格木-札德朱尔、章古图-地格达。为龙胆科植物花锚(Halenia sibirica Borkh.)的干燥全草。气微，味甘、苦，性平、柔、腻。平息“协日”，清热，愈伤。用于目黄，口苦，高烧，头痛，尿黄，“协日”热，伤热，脉热［1］。是蒙医常用药材，也是传统方剂旺拉嘎-3 汤的主要组成成分。在我国除华南和华东地区外，广布在其他地区以及蒙古、西伯利亚、远东、欧洲等国家，生长于山沟、林缘、林下、水边湿草地［3］。据文献报道，目前已从花锚中分离得到了口山酮、口山酮苷、黄酮、黄酮苷、裂环烯醚萜、三萜类和生物碱等类型成分［4］。现将对蒙药材花锚中总黄酮类成分提取工艺进行研究，以期为该民族药资源的开发研究及临床应用提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器：ZDHW 型调温电热套(北京中兴伟业仪器有限公司)，752 -紫外分光光度计(上海精密科学仪器有限公司)HH-W600 数显三用恒温水箱(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)TG328B 电光天平(福州天平仪器厂)。

1.2 材料：芦丁标准品(由中国药品生物制品鉴定所提供)，花锚药材采自五岔沟林业局浩森沟林场;其他试剂均为分析纯。

2 实验方法

2.1 提取工艺条件的正交安排：对影响花锚提取物收率的溶剂量、提取时间、乙醇浓度、提取次数4 个因素，分别取3 个水平进行考察。因素水平见表1。

表1 因素水平

2.2 考察指标的确定和测定

2.2.1 考察指标的确定：黄酮为花锚的主要有效成分，易溶于乙醇，故采用乙醇回流法提取花锚，并将芦丁作为考察指标，同时结合提取率优选最佳工艺。

2.2.2 浸膏得率的测定：按L9(34)正交表安排实验，取花锚约5.0g 在平行操作条件下加热回流、提取、过滤，滤液水浴浓缩、蒸干，称其质量。按浸膏得率(%)= 浸膏质量/样品质量100%［4］计算.其见表2。

表2 正交试验设计表及结果

2.2.3 标准曲线的绘制：精密称取芦标准20mg，放入100mL 容量瓶中，加无水乙醇90mL，在水浴锅上加热溶解，冷却后，再用无水乙醇定容(0.2mg/mL)，备用。然后精密吸取芦丁对照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0 、5.0、6.0mL 分别置25mL 容量瓶中，分别加水至6.0mL ，加5%的亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加10%的硝酸铝溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加10%的氢氧化钠溶液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min，依据分光光度法在500nm 波长处测定其吸收度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，求出回归方程。结果得到花锚浓度Y 与吸光度X 关系曲线的回归方程为Y =0.608X-0.0023，相关系数r =0.9998，所以本实验花锚浓度与吸光度有良好的相关性。

2.2.4 样品含量测定：精密称取正交实验号花锚各约5.0g，加热回流、提取、过滤、滤液水浴浓缩、蒸干，残渣用无水乙醇定溶至5mL，作为供试品溶液。然后精密吸取上述提取液各1mL，分别加水至6.0mL ，加5%的亚硝酸钠溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加10%的硝酸铝溶液1.0mL，摇匀，放置6min，加10%的氢氧化钠溶液10mL，再加水至刻度，摇匀，放置15min，依据分光光度法在500nm 波长处测定其吸收度，计算黄酮含量，见表2。

2.3 方差分析：将正交试验结果进行方差分析，分析结果见表3。

表3 方差分析表

综合2 个考察指标工艺条件，确定花锚最佳提取工艺条件为A2B2C3D1.

3 结 果

通过以上的L9(34)正交实验，最终确定提取花锚中黄酮类成分的最佳工艺条件为A2B2C3D1。即70%乙醇，12倍量，提取3 次，提取时间0.5h。

本研究建立的分光光度法用于测定黄酮类含量，方法简便，实验结果可靠，最佳条件适合批量生产该药材的提取。

［1］中华人民共和国药典委员会.中华人民共和国卫生部药品标准 蒙药分册［M］.1998：45.

［2］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)［M］.北京：中国医药科技出版社，2010.

［3］邰巴达拉胡，拉喜那木吉拉，桂荣，等.蒙药材花锚的化学成分研究进展［J］.中成药，2015，5(37).

［4］包保全，孙启时，包巴根那，等.花锚属植物化学成分及生物活性研究进展［J］.中药材，2003，5(26).