杨东霞,周忠光,胡妮娜,李红梅,王晓滨,李冬梅,侯 琳,吴修红△
(1.黑龙江中医药大学附属第二医院,黑龙江 哈尔滨150001;2.黑龙江中医药大学,黑龙江 哈尔滨150040)
子宫内膜异位症(EMs)是临床上的常见病及疑难病,该病迫使患者就医的主要原因是疼痛、不孕等症状。EMs 导致的疼痛可表现为痛经、持续的下腹疼痛及性交痛等,疼痛严重时需口服止痛药甚至镇痛药,但是由于反复长期的服用去痛片、芬必得、强痛定等药物造成依赖性及耐药性,使患者的身心都受到严重的损害。中药复方少腹逐瘀汤具有温经止痛、活血化瘀之功,对于由EMs 起的疼痛具有明显的效果,针灸具有调畅经络、止痛之功,两者相结合在临床治疗EMs 能明显提高疗效。本研究对针药结合治疗的效果进行初步的研究,现介绍如下。
SN-695 B 型智能放免Y 测量仪(上海原子核研究所日环光电仪器有限公司,中国);Acculab 电子天平(赛多利斯艾科勒,德国);Thermo Scientific Forma 995 超低温冰箱超低温冰箱(赛默飞世尔科技,美国);KDC-40 低速离心机(科大创新股份有限公司中佳分公司,中国)。
TXB2放免试剂盒(北京市福瑞生物工程公司,批号20140225);6-KeTo-PGF1α 放免试剂盒(北京市福瑞生物工程公司,批号20140225)。
达那唑(江苏联环药业股份有限公司,批号20140702);苯甲酸雌二醇注射液(宁波第二激素厂,批号140218);缩宫素针剂(上海子能制药有限公司,批号:130708)。
取处方量少腹逐瘀汤:按当归9 g、川芎3 g、赤芍6 g、蒲黄9 g、肉桂3 g、小茴香1.5 g、五灵脂6 g、没药3 g、干姜3 g、延胡索3 g 配方比例组成药物(上述药物均购自于北京同仁堂哈尔滨药店),共计930 g,水煎、过滤、浓缩至每毫升含生药8 mg,混悬液。均于4℃冰箱保存备用。
清洁级雌性的SD 大鼠(未交配过),8 ~12 周鼠龄,体重(200 ±20)g。由黑龙江中医药大学实验动物中心提供,许可证号:SCXK 黑2008004,质量合格证号:20120059。
模型制备:40 只大鼠随机分为正常对照组、模型组、阿司匹林组、少腹逐瘀汤(SFZYT)组和针药结合组。除正常对照组外,其余各组大鼠连续皮下注射苯甲酸雌二醇7 天(0.1 ml/只)。给药方法:少腹逐瘀汤给予相当于生药量4.2 g/(kg·d)灌胃,每日1 次;阿司匹林给予0.2 g/kg 灌胃,日1 次,在注射苯甲酸雌二醇的第5 日开始给药,连续给药7 天;针刺方法:取穴根据大鼠形态、解剖、生理特点,参照林文注主编《实验针灸学》[1]穴位标准定位,针刺足三里、三阴交、关元、中极、气海穴,每日1 次,每次10 min。以上处置连续3 天。给药第7 日,末次给药30 min 后,腹腔注射缩宫素0.2 单位/只,观察10 min 内各组动物扭体反应次数。
模型制备:大鼠阴道涂片、苏木素-伊红染色观察动情周期。每天定时观察阴道细胞涂片,选择动情期4 ~5 天,且连续有2 个动情周期的大鼠,在动情周期行造模手术。大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠(0.2 mL/100g)麻醉,麻醉生效后,将大鼠固定于操作台上,腹部剪毛,碘伏消毒,在无菌条件下开腹,右侧离卵巢0. 5 cm处分离子宫,结扎后在中间剪取子宫2 cm 左右,剖开子宫剥离子宫内膜,剪成4 mm ×4 mm 小块,分别缝于双角子宫分叉处、左侧腹膜壁层,结束后向腹腔内注射青霉素钠生理盐水溶液,16 万/kg。丝线分层缝合腹部切口。术后第1 天肌肉注射青霉素,16 万/kg,每天1 次,连续3 天,碘酊涂擦手术切口。造模后第3 天腹腔注射苯甲酸雌二醇注射用0. 1 mL/d催情,共3 天。将子宫内膜异位症成功造模大鼠于术后2 周,置于0 ~1℃冰水中10 min,每日1 次,连续2周,制备寒凝血瘀模型,大鼠出现寒战、爪尾部紫暗、蜷缩少动等症状。正常清洁饲养4 周,再次开腹观察移植物生长情况,手术成功的标志为:移植物体积增大,出现液体积聚,移植物被结缔组织或大网膜覆盖,并有血管形成,同时取移植物送病检证实内膜成活。
将造模成功者随机分为4 组,每组10 只:模型组、针药结合组、SFZYT 组、达那唑对照组。给药方法:少腹逐瘀汤给予相当于生药量4.2 g/(kg·d)灌胃,每日1 次;达那唑0.036 g/kg 灌胃,日1 次;针刺方法:同2.1项针刺方法;以上处置连续4 周。在给予治疗第4周的第1 天开始,除正常对照组外,其余各组大鼠连续皮下注射苯甲酸雌二醇7 天(0.1 ml/只)。末次给药及针灸30 min 后,给予腹腔注射缩宫素每只大鼠4.5单位,即刻使用秒表记录大鼠疼痛出现的时间、5 min之内的扭体次数、5 ~10 min 内的扭体次数。
造模方法及分组情况同2.2 项,连续给药4 周,不给予大鼠连续皮下注射苯甲酸雌二醇。末次给药及针刺30 min 后,大鼠腹腔注射2%戊巴比妥钠(0.2 ml/100 g)麻醉,腹主动脉取血3 ml,3000 rpm 离心10 min分离取血浆,放免法测定TXB2和6- KeTo- PGF1α的含量。
与模型组相比,阿司匹林组、少腹逐瘀汤组及针药结合组均能显著抑制缩宫素所致大鼠扭体次数(P <0.05);与少腹逐瘀汤组相比,针药结合治疗后大鼠扭体次数显著降低(P <0.05)。结果见表1。
表1 针药结合对缩宫素所致大鼠疼痛的影响
与模型组相比,达那唑组、少腹逐瘀汤组及针药结合组均能显著抑制缩宫素诱发的EMs 模型大鼠扭体次数(P <0.05);与少腹逐瘀汤组相比,针药结合治疗后大鼠扭体次数显著降低(P <0.05)。结果见表2。
与正常对照组相比,模型组血浆内TXB2和6-KeTo-PGF1α 都分别具有显著性差异(P <0.05);与模型组相比,达那唑组、少腹逐瘀汤组及针药结合组均能分别回调血浆内TXB2和6-KeTo-PGF1α 水平,差异具有显著性(P <0.05);与少腹逐瘀汤组相比,针药结合组血浆内TXB2水平具有显著性差异(P <0.05),6-KeTo-PGF1α 水平具有升高趋势,但差异无显著性。结果见表3。
表2 针药结合对EMs 模型大鼠缩宫素所致疼痛的影响
表3 针药结合对EMs 大鼠血浆内TXB2和6-KeTo-PGF1α 的影响
EMs 导致的疼痛具有得热痛减、遇寒加重的特征,中医认为“寒凝血瘀”是子宫内膜异位症的根本病因。少腹逐瘀汤源于《医林改错》具有温经止痛、活血化瘀之功,已有诸多文献证实少腹逐瘀汤是治疗EMs 的常用有效方剂[2]。针刺具有良好的镇痛作用,EMs 导致的疼痛主要表现在少腹、胞宫。“经脉所过,主治所及”,足三里为阳明胃经合穴,《四总穴歌》载:“肚腹三里留”,提示了足三里穴与少腹部疼痛密切关系;三阴交为妇科及血证的要穴,是肾、脾、肝三阴交会之所,足三阴经均循行于少腹,针刺该穴可使少腹及胞宫气机调畅、瘀血得行;关元穴、气海穴、中极穴具有培元固本、补益下焦之功。
子宫内膜是合成前列腺素(PGS)的重要部位,血浆PGs 的水平与EMs 痛经程度呈正相关。血栓素A2(TXA2)和前列环素(PGI2)是一对PGs 类化合物。TXB2和6-KeTo-PGF1α 是TXA2和PGI2的稳定代谢产物,后两者均是花生四烯酸的产物,TXA2对血管收缩及血小板聚集有很强的促进作用。PGI2具有舒张血管、抑制血小板聚集则作用,但是TXA 和PGI2的半衰期短,故选用前两者进行研究。已有研究证实痛经模型大鼠存在TXB2和6- KeTo- PGF1α 的代谢失衡,针刺可通过纠正其失衡达到止痛效果[3]。金某等[4]研究证实EMs 痛经患者的血浆PGs 水平异常,针刺可以升高血浆6-KeTo-PGF1α 的水平,降低PGE2的水平。
本研究发现少腹逐瘀汤结合针刺有明显的镇痛作用,可以明显减低缩宫素诱导的EMs 大鼠扭体次数。同时研究发现针药结合可升高6-KeTo-PGF1α 的水平,降低TXB2的水平,提示少腹逐瘀汤结合针刺减轻EMs 疼痛的机制可能是通过调节两者的失衡,对EMs导致疼痛的治疗提供了有效依据。
[1] 林文注,王佩. 实验针灸学[M]. 上海:上海科学技术出版社,1999:285-288
[2] 洪佩佩,张玲璐.少腹逐瘀汤加减辅治子宫内膜异位症痛经的疗效观察[J].浙江中医杂志,2014,49(6):488-489
[3] 李春华,任晓暄,嵇波,等. 预先电针对实验性类痛经模型大鼠血浆血栓素B2及6-酮-前列腺素F1α 的影响[J].中华中医药杂志,2012,27(4):1038-1041
[4] 金亚蓓,孙占玲,金慧芳.耳穴电针治疗子宫内膜异位症痛经的随机对照研究[J].针刺研究,2009,34(3):188-193