PRRSV感染会影响PAM对副猪嗜血杆菌的杀灭作用

Gloria Solano Elida Bautista Thomas Molitor Joaquim Segalés Carlos Pijoan

朱秀高1杜晓娟2编译（武汉回盛生物科技有限公司，湖北武汉430042；2辽宁省凌海市动物卫生监督所，辽宁锦州121000）

PRRSV感染会影响PAM对副猪嗜血杆菌的杀灭作用

Gloria Solano Elida Bautista Thomas Molitor Joaquim Segalés Carlos Pijoan

朱秀高1杜晓娟2编译（武汉回盛生物科技有限公司，湖北武汉430042；2辽宁省凌海市动物卫生监督所，辽宁锦州121000）

摘要：为了发现PRRSV感染如何改变PAMs对副猪嗜血杆菌的吞噬和破坏功能，测定吞噬比率时，分别通过体外和体内两种感染途径对其变化进行测定，其中体外试验主要是将细胞与病毒直接接触后收集测定，体内试验是将感染PRRSV猪的PAMs收集测定。体外试验结果显示，PAMs中的副猪嗜血杆菌仅在PRRSV感染的早期阶段（感染后2小时）增多；而体内试验结果显示，PRRSV感染猪的PAMs，并使其对细菌的吞噬率在感染的后期发生明显变化；综合吞噬率的下降结果，我们发现在感染后第7天PAMs的杀菌功能出现显著下降。据此，我们假设当猪感染PRRSV后，随着超氧化物阴离子的减少，PAMs的杀菌功能将明显下降。

关键词：PRRSV感染；猪肺泡巨噬细胞；副猪嗜血杆菌

很多猪场存在副猪嗜血杆菌的感染，特别是在保育猪群中尤为明显。有的猪场反映，其场内副猪嗜血杆菌感染的问题由来已久，且很难处理，发病持续时间最长的猪场时间长达3年，发病率超过40%，虽然经过施用药物和疫苗后没有明显的猪只死亡，但猪只感染副猪嗜血杆菌的问题迟迟得不到有效解决。

对此问题，笔者在临床处理中除了针对副猪嗜血杆菌这一显性感染外，还对猪场隐性存在的蓝耳病病毒感染进行了控制，通过综合应用此两种病的防控措施，在很多猪场解决了副猪嗜血杆菌的感染问题。不过根据笔者了解，很多人对蓝耳病病毒（PRRSV）感染而导致副猪嗜血杆菌病多发的问题还不明确，因此临床处理时犹豫不决，对此，本译文给出了极有说服力的证据，即PRRSV感染导致猪肺泡巨噬细胞（PAMs）对副猪嗜血杆菌的吞噬能力和杀灭能力下降，从而引起了副猪嗜血杆菌的继发感染。

呼吸系统的基本组织结构能够避免感染性病原和有害物质的进入。喉部会厌软骨以及与其紧密相连的组织可以有效阻止外界生物进入呼吸道内部。呼吸道表面的多重结构可以起到有效的防御作用，这些结构包括黏液层、纤毛上皮细胞、基膜和黏膜下层的分泌细胞。因此，经过上述结构处理后，通过呼吸吸入的粒子不断进入深层肺泡并变小。这种结构能够非常有效地防止外界物质包括微生物等进入呼吸道内部。

当外界物质突破这些组织结构进入呼吸道末端后，它们也会被其他抵御机制从肺泡内清除，如细菌的感染会有肺泡巨噬细胞（AM）和中性粒细胞（PMNs）等清除。当AM不能清除进入内部的细菌时，PMN就会在肺泡内聚集来执行清除任务。

单核-巨噬细胞是很多微生物的靶细胞，它们能够在其细胞内生存和复制。目前已知，PRRSV能够在单核细胞和巨噬细胞内复制，并引起二者在AM中的百分比下降，但AM的总量不会降低。现在还没有关于PRRSV感染对巨噬细胞清除其他细菌性病原如副猪嗜血杆菌影响的研究报告，也还缺少成功地说明病毒感染能够降低宿主抵抗细菌感染能力的关系模型。

为了确定PRRSV感染能够影响肺泡巨噬细胞的功能这一假设是否成立，试验中我们比较了PRRSV感染阳性和阴性情况下PAMs对副猪嗜血杆菌的吞噬比例和细胞内副猪嗜血杆菌的存活情况。

1　体外试验

光学显微镜下，根据细胞形态确定支气管肺泡冲洗液中PAMs占到95%，用台盼蓝染色后计数发现其中活细胞数约占94%，这些细胞被病毒感染后其存活率有一定程度的下降，特别是与病毒长时间接触的试验组细胞，但这一值均没有低于89%。

图1　AM对副猪嗜血杆菌的吞噬情况注：吞噬情况在AM与1 MOI PRRSV作用后测定，吞噬率用与细菌作用后0、30、60和90分钟的含FITC标记细菌阳性AM细胞百分率表示（%）

用流式细胞仪对AM中能够吞噬副猪嗜血杆菌的阳性细胞进行计数，并计算其比例。这种仪器能够计数所有与异硫氰酸荧光素（FITC）标记细菌有关的细胞，这些细胞假定为PAMs。计数结果显示，在4组试验中的结果均一致，即用调理素处理的细菌和未用调理素处理的细菌计数结果差异显著（P＜0.05），PAMs不能有效吞噬未被调理素处理的细菌。全部使用未被调理素处理的细菌时，试验组和对照组没有明显差异（图1）。

将巨噬细胞先与病毒暴露处理2小时，再加入用调理素处理的细菌，可以发现存在非常多的阳性细胞，与其他先将细胞和细菌暴露处理30分钟，再用病毒处理的组相比，二者具有明显差异。其他处理组中，不管AM有没有被病毒感染，在不同长短细菌暴露时间中，吞噬细胞的比例均没有明显差异。

2　体内试验

为了模拟感染的自然状态，从PRRSV感染猪中收集PAMs。为了保证对多核细胞增加情况监测分析的特异性，用以下两种方法进行监测：FITC标记细菌和藻红蛋白标记的抗猪巨噬细胞抗体，这种监测分析方法能够监测具有吞噬细菌功能的细胞的状态。试验显示，两个处理组中吞噬细胞的比例存在差异，与未感染PRRSV的猪只相比，在感染168小时后感染猪的PAMs吞噬能力明显下降（图2）。感染后6、12和24小时的猪与其对照组相比，AM没有明显差异。

图2　AM对副猪嗜血杆菌的吞噬情况注：将PRRSV感染猪的AM收集后与细菌接触30分钟，然后测定阳性细胞的数量，结果用FITC和藻红蛋白双标记阳性的AM细胞百分数表示（%）

图3　副猪嗜血杆菌在细胞内的存活情况注：将PRRSV感染猪的AM收集后30分钟测定其中副猪嗜血杆菌的存活情况，结果用cfu×106(n=2)表示

图4　AM的超氧化物阴离子产生情况注：将PRRSV感染猪的AMs收集测定其中的超氧化物阴离子含量，并将结果与对照组比较

测定细胞内细菌的存活率时，细菌与细胞暴露30分钟后，与未感染组相比，感染后168和216小时的PAMs中存活的细菌数最高。不过，这种差异只在最后一组中明显（图3）。其他组中的细胞内细菌存活率相似。

用佛波酯（PMA）刺激产生的超氧化阴离子来评价PAMs的功能。用PMA刺激后，立即比较不同处理组中超氧化阴离子的产生情况，其中感染后6和12小时组内PAMs中的超氧化阴离子水平与未感染组相比没有差异；而感染后168和216小时组中的超氧化阴离子水平明显下降（图4）。

3　讨论

本试验的目的是为了研究PAMs中PRRSV和副猪嗜血杆菌的相互作用。在我们的试验条件下，吞噬能力试验显示当猪与病毒接触后，短期内其PAMs对副猪嗜血杆菌的吞噬能力没有影响；感染后168小时，对细菌的吞噬能力则呈下降趋势，这提示我们：细胞的吞噬功能主要受病毒感染时间的影响。

在猪感染PRRSV后期，其PAMs杀灭副猪嗜血杆菌和受PMA刺激产生超氧化阴离子的能力明显下降，这种变化提示病毒对细胞依赖内部氧化机制杀灭革兰氏阴性细菌的能力具有一过性的负面作用。

综上所述，AM中超氧化物产生能力的下降能够给细菌如副猪嗜血杆菌的生存和繁殖创造良好的条件，这种对巨噬细胞功能的抑制可以解释临床中见到非常多的PRRSV感染后继发感染如副猪嗜血杆菌的情况。据此，我们可以假设，当PRRSV爆发时，由于机体对细菌感染的主要防御机制受损，所以机体对细菌的易感性增加。

译自：Gloria Solano, Elida Bautista, Thomas Molitor, et al. Effect of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection on the clearance of haemophilus parasuis by porcine alveolar macrophages. Can J Vet Res [J], 1998(62): 251-256.

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到2017年江苏将关闭所有不合格生猪屠宰场

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2017年湖南六成以上肉类通过冷链或冷藏运输

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湖北畜牧腐败窝案仅一省招标苗回扣4千万

【本刊辑】据中国青年报2015年7月6日报道，湖北省检察机关根据审计署驻上海特派办移送的违法违规问题线索进行了查处，结果是，大到省级畜牧兽医局一个处室的处长，小到地市级畜牧兽医局下辖一个兽医站的站长，共27人，凭借一支支最贵不超过8毛钱的动物疫苗，多的受贿1 400多万元，少的贪污公款数万元到100余万元不等。

郑州机场首次空运冰鲜肉类产品将分拨到全国

【本刊辑】据中国猪业网2015年6月17日报道，近日，一批重6.5吨的进口冰鲜肉搭乘飞机抵达郑州，成为郑州机场首次空运的冰鲜肉类产品。这批冰鲜肉在郑州短暂停留后将快速分拨到北京、上海、广州等城市。

这批来自澳大利亚的进口冰鲜肉被分成6个AKE集装箱装载。为了满足货主对通关、查验的快速要求，郑州市海关、检验检疫、机场货运等部门按照商定的保障流程，提前完成了报关、报检、提货等手续，航班到达后，率先将进口冰鲜肉运送至国际进港仓库，经检疫初步查验后，由郑州机场货运部门直接将AKE集装箱装至冷藏车运至指定的控温取样库进行取样，检验合格后立即装载至冷藏车，运往收货地。

2015年以来，郑州机场国际货运枢纽作用继续发力，截至6月15日，已经有郑州至欧洲卢森堡、美洲芝加哥、俄罗斯新西伯利亚和符拉迪沃斯托克的国际货运航线相继开通，越来越多来往于河南与欧、美、大洋洲等地的中高端货物品类，开始通过郑州机场集散分拨。2015年下半年，郑州机场将配合有关部门加快推进农副产品、活体动物进口航空口岸平台建设，届时从国外引进的鲜活牛羊、冰鲜肉类等农产品将大批量通过郑州机场向全国集散分拨。

黑龙江省对俄出口猪肉实现陆路运输一天即达

【本刊辑】据东北网报道，2015年6月9日，黑龙江省对俄出口的一批货重40吨、货值达102.3万美元的猪肉从望奎县装车启运，经饶河口岸过境通关，已运往俄罗斯哈巴洛夫斯克市。这是黑龙江省对俄出口猪肉首次采用陆路运输方式，将使企业对俄出口猪肉产品的运输时间由之前的40天缩短至24小时，大大降低出口企业成本。

据悉，自2014年俄罗斯准许我国对其出口猪肉以来，黑龙江省对俄出口猪肉全部经由大连口岸通过海运方式运往俄罗斯，海上运输路途较远、运输时间较长，增加了企业的物流和储藏成本。目前，经过黑龙江检验检疫部门多次与俄方商谈，俄方最终同意了对我国开放萝北和饶河内陆口岸，即黑龙江省对俄出口猪肉可经萝北、饶河通过公路运输通关出境，黑龙江省企业对俄出口猪肉也将实现一天即可到达俄罗斯境内。

5　干部参与虚报病害猪数量骗96万元补贴

【本刊辑】据河池日报2015年7月10日报道，广西都安瑶族自治县商务局5名工作人员与辖区生猪定点屠宰企业负责人联手，采用虚报病害猪无害化处理数据的手段，骗取国家财政补贴资金96万多元，从中收取40%～50%的分成款私分。经都安县人民检察院立案侦查并提起公诉，都安县人民法院一审以贪污罪，判处被告人钟继辉有期徒刑五年零六个月；被告人梁济平、唐金兰、覃喜阳、唐锦高分别被判处有期徒刑三年，缓刑四年。上述被告人不服，在法定期限内提出上诉。近日，河池市中级法院依法作出“维持原判，驳回上诉”的终审判决。

中新食品区百万生猪深加工项目签约

【本刊辑】据商务部网站报道，2015年6月14日，中新吉林食品区百万头生猪深加工产业化项目签约仪式在吉林市隆重举行，吉林市市政府与正大畜牧投资（北京）有限公司、新加坡新吉丰私人有限公司、吉林中新食品区开发建设投资有限公司正式签署项目合作协议。泰国正大集团、新加坡淡马锡旗下的新翔集团新吉丰公司与中新投公司合资成立中新正大有限公司，由正大集团主导合资公司运营。按照合资公司规划，项目总投资42亿元人民币一期计划投资12.7亿元，年出栏生猪30万头，其中10万头出口新加坡。二期建成后生猪年出栏总量达到100万头规模并形成深加工能力。该项目是全产业链自繁自养模式的生猪深加工产业一体化项目。项目签约后将迅速启动实施。预计到2016年底，多个10万头生猪规模的场区将建成投入运营。

金新农拟9000万增资新大牧业持股30%

【本刊辑】据全景网报道，金新农（002548）于2015年7月2日发布公告称，公司近日与河南省新大牧业有限公司（简称“新大牧业”）及新大牧业原股东签署了相关增资协议，拟以自有资金人民币9 000万元向新大牧业增资。此次增资后，新大牧业注册资本由600万元变更为900万元，其?中，公司占新大牧业30%的股权。

公告显示，新大牧业是集种猪繁育、商品猪、饲料生产、健康肉食品开发、养猪工程研究、生物有机肥、有机蔬菜种植于一体的循环经济型农牧产业集团。2014年实现营业收入2.61亿元，亏损2 172.16万元；2015年一季度实现营业收入7 824.09万元，亏损2 756.16万元。

金新农表示，此次增资符合公司战略发展规划，同时也有利于公司进一步开拓中部地区市场，扩大市场份额以提升公司的主营业务盈利能力。公司称，此次增资资金来源为公司自有资金，不会对公司未来财务状况产生重大影响。

洮南市雏鹰农牧集团400万头生猪一体化项目

【本刊辑】据吉林日报2015年6月16日报道，洮南市雏鹰农牧有限公司年出栏400万头生猪一体化项目是全产业链生产，全链条开发利用，公司利用清华大学及中国农业大学先进技术，实现动物粪便无害处理和资源利用，从而解决了粪污产生的环境问题，实现变废为宝。项目计划总投资56亿元，为全产业链生产、全链条开发利用、一体化生产经营的循环经济发展模式。一期工程建设时间为2013—2015年，投资30亿元。建设内容为年出栏250万头生猪养殖基地、1个年产18万吨饲料厂、2个年产70万吨饲料厂、年屠宰100万头生猪的屠宰加工厂和年产2万吨的肉制品加工厂、年出栏400万头生猪项目相配套的有机肥加工厂和新能源沼气项目；二期工程建设时间为2016—2017年，投资26亿元。建设内容为年出栏150万头生猪养殖基地及一期工程续建。项目全部建成投产后，年可实现产值140亿元，安置就业11 900人。2015年投资及建设计划为：总投资20亿元，具体实施养殖项目、屠宰及熟食加工厂、有机肥生产和新能源沼气及附属设施、科研楼及无害化处理厂工程。

中国将从巴西进口更多的禽肉和猪肉

【本刊辑】据农产品期货网2015年6月19日报道，中国政府已经按程序向巴西的7家禽肉加工和1家猪肉加工厂发放了进口许可，那么巴西拥有出口至中国许可的禽肉加工厂达到了29家，2015年1—5月，巴西向中国出口鸡肉11.4万吨，相比于2014年同期增加了26.7个百分点。其中，2014年5月出口24 900吨，同比增速更快，为38%。巴西公司在2015年头五个月的出口总量的7.3%被送到了中国市场。

中韩联合培育出转基因猪或将优先在中国上市

【本刊辑】据生物探索2015年7月2日报道，根据Nature网站、《每日邮报》等报道，不同于常规的将来自一个物种的基因移植到另一个物种体内的基因改造技术，韩国首尔大学的科学家与中国延边大学的动物克隆研究人员尹熙俊进行合作，通过编辑单个的MSTN基因，繁殖出“双肌型”猪。科学家希望监管机构对这种仅改变单个基因繁殖出“双肌型”猪持宽松态度，一经批准，或成为首个获得批准、供人食用的转基因动物。

加拿大开发预防新生仔猪PED病毒感染新疫苗

【本刊辑】据国际畜牧网2015年6月25日报道，过去大约12个月当中，VIDO-InterVac的科学家们开发了一种新疫苗，用来保护新生仔猪免受猪流行性腹泻(PED)病毒的感染。该疫苗在母猪产前四周和两周分别接种两次，可提供母源免疫。临床前试验已经显示，接种母猪可把免疫力传给自己的仔猪，保护新生仔猪免受该病毒感染。VIDO-InterVac已经生产了几千剂疫苗，希望不久的将来能够供应那些疫苗。

传闻我国取消订单美国DDGS价格大跌

【本刊辑】据我的农产品网报道，熟悉出口情况的消息人士2015年6月15日表示，本周美国玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)的价格每吨猛跌逾15美元，因有传闻称全球头号进口国中国取消订单或将交付时间推迟至秋季。两位消息人士表示，中国取消两船美国DDGS订单，最终可能将取消六船订单。一船可装载5.5万吨DDGS。玉米干酒糟及其可溶物是一种富含高蛋白质的动物饲料，是将玉米加工成乙醇过程中的副产品。另一消息人士称，中国只是将交割时间推迟至10月或更晚，这在谷物出口市场是一个相对普通的事情，因秋季收割时的供应最为充足，价格较低。他们说，在美国驳船出口市场，6月及7月发货的玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)报价在每吨170美元，低于周一的187美元，更别说月初的200美元。美国农业部(USDA)数据显示，在爱荷华州东部，DDGS的报价在每吨160美元，创年内最低位。中国动物饲料需求降低，加之豆粕饲料价格低廉，使得一些中国买家爽约。大约一年前，中国曾暂停发放DDGS进口许可，一是由于中国国内玉米库存庞大，并且担心其中含有未被批准的DDGS转基因成分MIR162。中国在2014年底批准了玉米转基因成分，恢复进口DDGS。

中图分类号：S852.4

文献标识码：B

文章编号：1673-4645(2015)07-0077-03

收稿日期：2015-05-07