泌尿系感染检测应用快速初筛鉴定培养基的临床价值探讨

张亚南+黄柳桓+曹硕+张国军+康熙雄

[摘 要] 目的：为基层医院和社区提供简单、快速细菌初筛鉴定方法。方法：采用麦康凯琼脂、chromID ? ESBL产色培养基和科玛嘉念珠菌显色培养基“三合一”快速初筛鉴定培养基及常规尿培养方法，随机检验北京天坛医院泌尿系感染患者的尿标本。结果：随机检测尿培养标本20份，“三合一”快速初筛鉴定培养基细菌初筛鉴定与微生物室细菌鉴定报告一致（Pearson c2=0.000，P=1.000）。该检验方法比常规细菌检验方法提前一天或两天报告，加快了检验周期。结论：“三合一”快速初筛鉴定培养基分离、鉴定同时进行，具有快速、简单、易操作的优点，是一种适合在基层医院和社区开展、推广、普及应用的细菌鉴定方法。

[关键词] 培养基；细菌培养；泌尿系感染；检验周期

中图分类号：R446 文献标识码： B 文章编号：2095-5200（2015）03-088-03

目前，我国三级医院临床微生物实验室普遍使用全自动细菌培养和鉴定仪，节省人力，显著提速细菌标本检验周期。但是，仍有许多基层医院依然使用传统的手工操作进行细菌鉴定工作。传统手工操作鉴定繁琐、速度缓慢、需要专业技术培养。如果基层医院开展细菌快速初筛鉴定培养，可及时发现耐药菌株、尽早隔离、早期合理选择抗菌药诊治患者，减少医院/社区感染，同时也可以缓解三级医院患者就诊量，提高患者生命质量，减少卫生医疗支出。依据我国尿培养细菌谱及耐药特点，创新设计“三合一”快速初筛鉴定培养基，即麦康凯琼脂、chromID ? ESBL产色培养基和科玛嘉念珠菌显色培养基于一块平皿，国内外尚未见类似报道。本研究探讨“三合一”快速初筛鉴定培养基的实用性，为基层医院和社区的提供简单、快速的细菌初筛鉴定方法。

1 对象与方法

1.1 一般资料

严格遵守无菌操作，收集2014年3月至4月在首都医科大学附属北京天坛医院尿路感染患者尿标本20份。

1.2 方法和设备

“三合一”快速初筛鉴定培养基，即麦康凯琼脂、chromID ? ESBL产色培养基和科玛嘉念珠菌显色培养基。麦康凯琼脂（BD公司）、chromID ? ESBL产色培养基（生物梅里埃）和科玛嘉念珠菌显色培养基（博赛科玛嘉公司）配制参考《临床微生物检验标准化操作》[1]、实验室标准化操作（SOP）及试剂说明书，浇注90mm平皿备用。取中段尿，用定量接种环取尿液10μL分别接种于各琼脂平板上，5%～10%CO2、35℃培养18～24h，观察有无细菌生长，并进行血琼脂平板菌落计数。血琼脂平板生长菌落数乘以100即每毫升尿液的菌落数。根据菌落特征和涂片染色等报告结果。

20份标本分别采用“三合一”快速初筛鉴定培养基菌株鉴定及常规细菌培养、BD PhoenixTM细菌鉴定药敏仪检测两种方法进行检测。

1.3 判定标准

“三合一”快速初筛鉴定培养基通过血平板判定患者有无细菌感染。具体为何种细菌感染根据培养基表面的菌落形态及颜色等进行判定。培养48h血平板无菌落生长报告“无细菌生长”；血平板生长、麦康凯琼脂不生长、革兰染色报告革兰阳性细菌，菌落数XX CFU/mL；血平板生长、麦康凯琼脂生长，科玛嘉ESBL显色培养基生长直接鉴定报告：大肠杆菌呈红色；克雷伯氏菌属、肠杆菌属、柠檬酸菌属呈金属蓝；其他革兰阴性菌有褐色晕环；血平板生长、科玛嘉念珠菌显色培养基生长直接鉴定报告：白色念珠菌菌落呈绿色、翠绿色；热带念珠菌呈蓝灰色、铁蓝色；克柔假丝酵母菌呈现粉红色、模糊有微毛、菌落较大；光滑念珠菌呈现紫色；其他念珠菌呈现白色。

1.4 观察指标

观察并对比两种培养方法的报告生成时间及诊断符合率。

1.5 统计学方法

采用SPSS17.0软件对数据进行统计学分析，统计学数据使用百分比（%）进行表示，计数资料采用c2检验。P<0.05具有统计学意义。

2 结果

2.1 鉴定结果比较

“三合一”快速初筛鉴定培养基检测尿培养细菌初筛鉴定结果与常规细菌报告结果一致（表1）。患者1、2、4和5尿标本分离菌株均为产超光谱β-内酰胺酶的耐药株。两种方法比较，无统计学意义（Pearson c2=0.000，P=1.000），说明“三合一”快速初筛鉴定培养基与常规细菌培养鉴定方法具有相同准确度。

2.2 两种方法检验周期比较

“三合一”快速初筛鉴定培养基方法比常规细菌培养方法提前一天或两天报告结果（表2）。

3 讨论

泌尿系感染（urinary tract infection，UTI）是临床常见感染性疾病之一。美国每年有700万人因泌尿系感染就诊，100万就诊急诊，10万人住院治疗[3-4]。住院患者泌尿系感染占35%[5]。约25%～50%健康女性曾患单纯性泌尿系感染[6]。泌尿系感染也是小儿常见病[7]，且临床表现不典型，美国每年新确诊的泌尿系感染患儿占儿童总数2.4%～2.8%[8]。泌尿系感染已成为常见病、多发病，且发病率高、发病人群广。

我国泌尿系感染病原菌以肠杆菌科细菌为主，占38.1%～77.3%，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌是感染的主要病原菌[9-14]。尿培养是诊断泌尿系感染的金标准[15]，但是耗时长（初次分离菌株需18～24h，再次鉴定需18～24h），缩短菌培养及药敏试验时间是研究关注重点之一。

2012年，卫生部实施《抗菌药物临床应用管理办法》（卫生部令第84号），加强医疗机构抗菌药物临床应用管理，规范抗菌药物临床应用行为，促进临床合理应用抗菌药物，控制细菌耐药，保障医疗质量和医疗安全。该条例指出二级以上医院应当根据实际需要，建立符合实验室生物安全要求的临床微生物室，开展微生物培养、分离、鉴定和药敏试验等工作，提供病原学诊断和细菌耐药技术支持，参与抗菌药物临床应用管理[16]。因技术水平、经济条件和人力资源限制，基层单位自动化检测仪器和快速检测鉴定系统应用受到限制。因此，细菌实验诊断方法发展应该强调应用和满足患者需求，本研究“三合一”快速初筛鉴定培养基涵盖大部分细菌和真菌，分离和鉴定同时检验，18～24h可早期筛查耐药菌株，提高检验报告周期。

本研究设计“三合一”快速初筛鉴定培养基，即麦康凯琼脂、chromID ? ESBL产色培养基和科玛嘉念珠菌显色培养基，是一种适合在基层医院和社区开展、推广、普及应用的方法，具有快速、简单、易操作优点。该培养基也可用于痰、无菌体液等标本的快速初筛鉴定。

参 考 文 献

[1] 周庭银， 倪语星. 临床微生物检验 标准化操作（第二版）[M]. 上海：上海科学技术出版社，2010.

[2] 沈颖. 儿童泌尿系感染的流行病学与诊治[J]. 临床儿科杂志，2008， 26（4）：276-279.

[3] Schappert SM. Ambulatory care visits to physician offices， hospital outpatient departments， and emergency departments： United States， 1997[J]. Vital Health Stat 13， 1999，143：1-39.

[4] Schappert SM.， Rechtsteiner EA. Ambulatory medical care utilization estimates for 2007[J].Vital Health Stat， 2011，169（13）：1-38.

[5] Stamm WE. Scientific and clinical challenges in the management of urinary tract infections[J]. Am J Med， 2002， 113（1）：1-4.

[6] Naber KG.， Bergman B.， Bishop MC.， et al. EAU guidelines for the management of urinary and male genital tract infections. Urinary Tract Infection（UTI）Working Group of the Health Care Office（HCO）of the European association of urology（EAU）[J]. Eur Urol， 2001， 40（5）：576-588.

[7] 陈娟， 王乾. 小儿泌尿系感染53例临床分析[J]. 国际泌尿系统杂志， 2011，31（2）：274-275.

[8] Freedman AL. Urologic diseases in North America Project： trends in resource utilization for urinary tract infections in children[J]. U Urol， 2005， 173（3）：949-954.

[9] 张秀岭， 黄文红. 泌尿系感染细菌的分布及药敏结果分析[J]. 医学检验， 2012， 9（10）：111-112，118.

[10] 陈求刚， 崔颖鹏， 廖康，等. 泌尿系感染病原菌的分布及耐药性分析[J]. 中华医院感染学杂志， 2006， 16（5）：579-581.

[11] 吴均竹， 彭敬红， 周作华. 498株泌尿系感染病原菌的分布及耐药性调查[J]. 现代预防医学， 2008， 35（13）：2558-2560.

[12] Zorc J J，Kiddoo D A，Shaw K N. Diagnosis and management of pediatric urinary tract infections[J].Clinical Microbiology Reviews，2005，（02）：417-422.

[13] Nadi HM，Shalan YA，Al-Qatan HY. Urinary tract infection in boys less than five years of age：A general pediatric perspective[J].Kuwait Medical Journal，2006，（03）：220-225.

[14] 杨春霞， 陈山， 杨勇，等. 北京地区社区获得性单纯性泌尿系感染病原菌对常用抗菌药物的体外活性分析[J]. 中华泌尿外科杂志，2012， 33（2）：132-136.

[15] Wilson ML， Gaido L. Laboratory diagnosis of urinary tract infections in adult patients[J]. Clin Infect Dis， 2004， 38（8）：1150-1158.