2009-2012年登封市小肠结肠炎耶尔森菌分布调查

李洪民 ，赵嘉咏， 张胜勇，黄丽莉， 王德祥， 赵长民，夏胜利

2009-2012年登封市小肠结肠炎耶尔森菌分布调查

李洪民1，赵嘉咏2， 张胜勇1，黄丽莉2， 王德祥1， 赵长民3，夏胜利2

目的 调查登封地区家畜家禽小肠结肠炎耶尔森菌感染状况。方法 采集家畜家禽新鲜粪便分离小肠结肠炎耶尔森菌，对分离菌株进行生化鉴定、血清分型、生物分型及毒力基因检测。结果 从1 285份粪便标本中共检出105株，检出率8.17%。其中狗17株(17.35%)；猪35株(13.62%)；检出O∶3血清型12株(13.48%)， O∶5血清型12株(13.48%)，O∶8血清型14株(15.73%)；Ail+、ystA+、yadA+、virF+的菌株占12.36%，ystB+ 的菌株占42.70%。结论 登封市家禽家畜普遍携带小肠结肠炎耶尔森菌，主要动物宿主为猪和狗，是小肠结肠炎耶尔森菌人兽共患感染性腹泻病的重要传染源。

小肠结肠炎耶尔森菌；血清分型；生物分型；毒力基因

小肠结肠炎耶尔森菌(Yersiniaenterocolitica)是一类人兽共患性病原菌，广泛分布于自然界中，尤其是各种动物宿主[1-3](家畜、家禽、啮齿动物等)。该菌还是重要的食源性致病菌，很多国家和地区已将该菌列为常规的进、出口食品检测项目。我国在20世纪80年代中期发生2次大的流行，有500人相继感染该菌[4-5]。因此在我市家畜家禽中进行该菌的病原生物学监测，有着重要的意义。

1 材料与方法

1.1 2009-2012年，在我市各乡镇共采集家畜家禽粪便标本1 285份。其中，采集鸡粪516份、猪粪256份、羊粪177份、牛粪146份、狗粪98份、兔粪46份、鸭粪17份、其他动物粪便28份。

1.2 菌株分离 将我市所采集的标本于4 ℃冷增菌培养，分别于7 d、14 d、21 d转种耶尔森菌选择性培养基,置于25 ℃培养24～36 h,挑取疑似菌落3～5个，分别转种克氏双糖(KIA)斜面和动力/靛基质/尿素半固体培养基，置于25 ℃培养24 h。选择K/A、不产气、H2S-、尿素酶+、25 ℃培养动力+、37℃培养动力-、靛基质+/-、镜检为革兰阴性杆菌或球杆菌菌落,使用API 20E生化板条进行系统生化鉴定。

1.3 生物分型 参照参考文献[6]的生物分型方法进行。

1.4 血清分型 通过玻片凝集试验对鉴定结果为小肠结肠炎耶尔森菌的菌株进行血清学分型，并设盐水对照。

1.5 PCR 用多重PCR检测技术对小肠结肠炎耶尔森菌粘附侵袭点基因(ail)、耐热性肠毒素基因(ystA)、生物1A型携带的肠毒素基因(ystB)、粘附素(yadA)、yop调节子转录活化作用因子(virF)等进行检测。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳分离(170V，30 min),参照参考文献[1]。

2 结 果

2.1 宿主分布 1 285份粪便标本检出小肠结肠炎耶尔森菌105株，总检出率8.17%。各种家禽家畜粪便细菌检出情况分别为：猪35株，检出率13.62%；鸡33株，检出率6.40%；狗17株，检出率17.35%；牛10株，检出率6.85%；羊6株，检出率3.39%；兔2株，检出率4.35%。其他动物2株，检出率7.14%。

2.2 血清型分布 89株检出菌中，O∶3血清型12株(13.48%)，O∶5血清型12株(13.48%)，O∶8血清型14株(15.73%)，未定型51株(57.30%)。各宿主动物携带菌血清型详见表1。

表1 2009-2012年小肠结肠炎耶尔森菌血清学分型及生物学分型

注：弗氏耶尔森菌、克氏耶尔森菌有16株。

Note:YersiniafrederikseniiandYersiniakristenseniihave 16 strains.

2.3 生物型分布 2009—2012年各种家畜家禽的粪便检出菌中，生物学分型以1A型为主，有74株，占83.15%(详见表1)。

2.4 毒力基因 携带ail+、ystA+、ystB-、yadA+、virF+基因的菌株有11株(12.36%)，ail-、ystA-、ystB+、yadA-、virF-基因的菌株有38株(42.70%)，ail-、ystA-、ystB-、yadA-、virF-基因的菌株有40株(44.94%)。

3 讨 论

3.1 小肠结肠炎耶尔森菌是一种在世界各地均有发现并危害严重的食源性致病菌，无论在发达国家还是发展中国家都有非常高的流行性[7]，已被列入多个国家出入境检疫的常规项目。小肠结肠炎耶尔森菌广泛分布于自然界中，尤其是各种家畜家禽。在我市采集的1 285份粪便标本中，猪、狗、鸡、牛、兔、羊等多种家畜家禽中均有检出小肠结肠炎耶尔森菌。这一结果与文献资料基本相符[7]。各种动物宿主的检出率各不相同，狗的检出率最高(17.35%)，其次是猪(13.62%)。狗和猪为小肠结肠炎耶尔森菌主要宿主，这一结果与相关文献[2，8]相符。在此基础上我们对猪做了进一步的研究，分别采集屠宰场生猪咽拭子以及屠宰场生猪肛内容物作为研究样本，该研究结果另文报道。

3.2 小肠结肠炎耶尔森菌是一种食源性传染菌，主要通过粪-口途径相互传播。我市家畜家禽养殖农户多，而且以养猪户最多。监测结果显示猪的小肠结肠炎耶尔森菌带菌率相对较高。因此在我市人群生活环境中存在小肠结肠炎耶尔森菌“传染源-传播途径-易感人群”传播链，具有引起暴发流行的潜在危险。

3.3 小肠结肠炎耶尔森菌的血清型众多，国内已报道了58个[8-9]。目前的研究认为仅有少数几种血清型为致病性菌株，其中O∶3血清型为最常见的一种[10-11]。我们的研究结果显示O∶3、O∶5血清型各占13.48%， O∶8血清型占15.73%，显示致病性小肠结肠炎耶尔森菌在我市区仍有较高的携带率，提示我们应该加强监测，预防小肠结肠炎耶尔森菌病在动物间和人间造成感染和暴发流行。

3.4 毒力基因检测显示，我市家畜家禽小肠结肠炎耶尔森菌携带致病毒力基因的占12.36%，具有感染人群的潜在危险。携带ystB非致病性毒力基因的占42.70%。相关文献报道携带ystB非致病毒力基因菌株引起流行的事件。因此，我们在今后的防控工作中应重视该环节，加大对养殖农户的相关卫生知识宣传，做好个人防护工作。

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Investigation on distribution ofYersiniaenterocoliticain Dengfeng from 2009 to 2012

LI Hong-min1,ZHAO Jia-yong2,ZHANG Sheng-yong1, HUANG Li-li2,WANG De-xiang1,ZHAO Chang-min3,XIA Sheng-li2

(1.DengfengCenterforDiseaseControlandPrevention,Dengfeng452470,China; 2.HenanProvincialCenterforDiseaseControlandPrevention,Zhengzhou450016,China; 3.ZhengzhouEnvironmentalProtectionMonitoringCenter,Zhengzhou450016,China)

To investigate the infection ofYersiniaenterocoliticain Dengfeng City, the strains were isolated from livestock and poultry. The strains were detected with biochemiological methods, serological methods, and virulence genes were detected with PCR. A total of 105 strains ofYersiniaenterocoliticawere classified from 1 285 stool samples, the total isolation rate was 8.17%. Among the total isolated strains, 17 strains were classified from dogs with a rate of 17.35% and 35 strains from pigs with 13.62%. Twelve strains were O∶3 serotype (13.48%), 12 strains were O∶5(13.48%), and 14 strains were O∶8(15.73%).Ail+,ystA+,yadA+ andvirF+ accounted for 12.36%, andystB+ accounted for 42.70%. In conclusion, the pigs and dogs were important animal hosts, which may play the major role in humans' infection.

Yersiniaenterocolitica; serotype; biological type; toxicity gene

Xia Sheng-li, Email:xiasl@hncdc.com.cn

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.020

“十二五重大专项”细菌性传染病病原谱流行规律及变异研究(2013ZX10004203-002-002)

夏胜利， Email:xiasl@hncdc.com.cn

1.登封市卫生防疫站,登封 452470； 2.河南省疾病预防控制中心,郑州 450016； 3.郑州市环境保护监测中心站,郑州 450007

R378

B

1002-2694(2015)03-0281-03

Supported by the 12thFive-Year Major National Science and Technology Projects of China (No. 2013ZX10004203-002-002)

2014-07-07；

2014-12-02