M uc15基因在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系

2015-06-05 09:33杨国栋赵乐
中国当代医药 2015年12期
关键词:卵巢癌卵巢病理

杨国栋 赵乐▲

河南科技大学第一附属医院,洛阳471003

M uc15基因在卵巢癌组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系

杨国栋 赵乐▲

河南科技大学第一附属医院,洛阳471003

目的检测Muc15基因在卵巢癌组织中的表达情况及其在卵巢癌组织发生、发展中所起的作用。方法应用Western blot、RT-PCR技术检测本院2012年9月~2014年3月收治的65例正常卵巢组织、30例良性卵巢肿瘤组织及65例卵巢癌组织中Muc15蛋白相对表达量及mRNA相对表达量,分析其在三种组织中表达的差异。结果Muc15蛋白相对表达量、mRNA相对表达量在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及卵巢癌组织中比较差异有统计学意义(P<0.05);Muc15蛋白相对表达量、mRNA相对表达量在临床分期为0~Ⅱ期及Ⅲ~Ⅳ期的卵巢癌组织中比较差异有统计学意义(P<0.05);Muc15蛋白相对表达量、mRNA相对表达量在有淋巴结转移组和无淋巴转移组的卵巢癌组织中比较差异有统计学意义(P<0.05);Muc15蛋白相对表达量、mRNA相对表达量在不同年龄和肿瘤直径卵巢癌组织中比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Muc15基因在卵巢癌组织中的表达量升高,其高表达水平可能与卵巢癌的发生有关。

Muc15基因;卵巢癌;W estern blot;RT-PCR

黏蛋白是一类由黏膜组织产生的糖蛋白,具有多种生物学功能[1]。从结构和功能上分为分泌型和跨膜型两型,Muc15是跨膜型黏蛋白中的一种[2]。近年来对Muc15的研究逐渐成为热点[3-6],有学者发现,Muc15在食管癌、直肠癌、乳腺癌等多种肿瘤组织中出现高表达,但是Muc15在卵巢癌中的表达还未见报道,本实验拟通过检测Muc15在卵巢癌中的表达,探讨其与卵巢癌临床病理因素的关系,以期有助于卵巢癌发病机制及诊断治疗的后续研究。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集本院2012年9月~2014年3月手术切除卵巢癌新鲜组织标本65例,年龄43~68岁,中位年龄56.4岁;组织学分期Ⅰ期16例、Ⅱ期21例、Ⅲ期28例;有淋巴转移者39例,无淋巴转移者26例。另同时收集卵巢良性肿瘤30例及正常卵巢组织65例,所有患者术前均未接受过放疗和化疗及等其他治疗,均经病理证实。

1.2 方法

1.2.1 卵巢组织Muc15 Wes ter n b l o t检测①蛋白提取:从液氮中取适量组织标本于匀浆器中,按照蛋白提取试剂盒的说明提取蛋白,BCA法测定其蛋白浓度。②电泳:取蛋白60μg及等量上样缓冲液95℃5min后冷却上样,进行电泳。③转膜及封闭:经10% SDS-PAGE凝胶电泳后转移至硝酸纤维素膜上,加封闭液及一抗(1︰500稀释)4℃过夜,TBST洗涤4次,10 min/次,将膜与HRP标记的二抗(1︰5000稀释)室温孵育2 h,TBST洗涤4次,10 min/次。④蛋白检测:将显影液加到膜上,曝光显影,用Band Scan图像分析系统进行分析。

1.2.2 卵巢组织Muc15 RNA提取及RT-PCR①总RNA的提取:严格按照RNA提取试剂盒的操作步骤提取总RNA。②cDNA的制备:二步法PCR试剂盒逆转录cDNA。③RT-PCR方法:扩增Muc15mRNA,反应结束后,取5μl产物进行电泳,用图像分析软件进行灰度扫描,Muc15与内参的PCR灰度值之比为mRNA水平的相对表达量。

1.3 统计学处理

采用SPSS 17.0统计软件对数据进行分析和处理,计量资料以±s表示,采用t检验或方差分析,计数资料采用χ2检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组Muc15基因的蛋白及mRNA相对表达量的比较

Muc15在正常卵巢组织、良性卵巢组织中的蛋白相对表达量明显低于卵巢癌,差异有统计学意义(t=3.152、2.106,P<0.05);Muc15mRNA在卵巢癌组织中的相对表达量高于良性卵巢肿瘤组织和正常卵巢组织,差异有统计学意义(t=2.230、2.146,P<0.05)(图1、表1)。

图1 Muc15基因Western blot的表达情况

表1 各组Muc15基因的蛋白及mRNA相对表达量的比较(±s)

表1 各组Muc15基因的蛋白及mRNA相对表达量的比较(±s)

组别n Muc15的蛋白相对表达量Muc15mRNA相对表达量正常卵巢组织良性卵巢肿瘤组织癌组织P值65 30 65 0.195±0.035 0.351±0.027 0.769±0.030<0.05 0.236±0.023 0.363±0.021 0.786±0.027<0.05

2.2 不同临床病理因素卵巢癌组织中M uc15蛋白及mRNA相对表达量的比较

Muc15蛋白及mRNA相对表达量在临床分期0~Ⅱ期中明显高于Ⅲ~Ⅳ期,差异有统计学意义(P<0.05);有淋巴结转移组与无淋巴转移组的Muc15蛋白及mRNA相对表达量比较差异有统计学意义(P<0.05);不同年龄、肿瘤直径卵巢癌组织中Muc15蛋白及mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)(表2)。

表2 不同临床病理因素卵巢癌组织中Muc15蛋白及mRNA相对表达量的比较(±s)

表2 不同临床病理因素卵巢癌组织中Muc15蛋白及mRNA相对表达量的比较(±s)

临床病理因素n Muc15的蛋白相对表达量Muc15 mRNA相对表达量年龄(岁)≥60<60 P值肿瘤直径(cm)≥5<5 P值临床分期0~ⅡⅢ~ⅣP值淋巴结转移34 31 0.746±0.038 0.752±0.042>0.05 0.796±0.026 0.748±0.031>0.05 42 23 0.768±0.040 0.739±0.029>0.05 0.782±0.028 0.770±0.036>0.05 32 33 0.759±0.041 0.535±0.037 <0.05 0.789±0.032 0.525±0.021 <0.05有无P值51 14 0.769±0.034 0.510±0.035 <0.05 0.791±0.027 0.436±0.022 <0.05

3 讨论

黏蛋白家族的成员以其独特的结构保护黏膜免受外界有害物质的侵犯,同时参与上皮细胞的更新和分化,细胞间的信号转导和肿瘤细胞的侵袭和转移[7]。Muc15作为黏蛋白家族的一员,具有共同的结构,自Pallesen等在2002年发现以来,其已被证实在结食管癌、直肠癌、乳腺癌、前列腺癌等多种肿瘤组织中高表达,并且促进肿瘤的侵袭和转移[8-9]。

本实验通过Western blot、RT-PCR的方法检测Muc15在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织及卵巢癌组织中的表达,发现在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤组织中Muc15表达水平比较差异无统计学意义;但在卵巢癌组织中Muc15的表达明显增高,提示Muc15基因促进卵巢癌的发生、发展,Muc15基因的激活可能导致卵巢癌的发生,这与相关研究结果相似[10]。Huang等[11-13]在结直肠癌中的研究表明,结直肠癌中Muc15 mRNA的表达及免疫组化阳性率明显高于正常结直肠组织;同时Muc15基因的过度高表达可激活ERK-MAPK通道,从而增加结肠癌细胞的致癌能力。Shyu等[12,14-15]研究发现,Muc15在人类胎盘组织中呈高表达,从而抑制滋养细胞沿体外入侵。

本研究发现,不同临床分期的卵巢癌组织标本中Muc15的表达水平有差异;有淋巴结转移的癌组织标本表达水平明显高于无淋巴结转移的癌组织标本,说明Muc15基因不仅参与卵巢癌的发生,而且与卵巢癌的发展有一定关系。

综上所述,Muc15在卵巢癌组织中的表达升高,其高表达可能与卵巢癌的发生、发展有关,但是Muc15在卵巢癌组织中的作用机制,还需进一步的后续研究。

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Expression of M uc15 gene in ovarian cancer tissue and its relationship w ith clinical pathological factor

YANG Guo-dong ZHAO Le▲
The First Affiliated Hospital of Henna University of Science and Technology,Luoyang 471003,China

Objective To investigate the status of Muc15 expression in human ovarian cancer and its association with the carcinogenesis and development of ovarian cancer.M ethods The expression of Muc15 protein and mRNA in sixty five ovarian normal tissues,thirty benign ovarian cancer tissues and sixty five ovarian cancer tissues in our hospital from September 2012 to March 2014 were evaluated by using Western blot,RT-PCR,and then the expression difference among three groupswas analyzed.Results There were significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA among ovarian cancer tissues,ovarian normal tissues and benign ovarian cancer tissues(P<0.05).Therewere significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA between clinical stage 0-ⅡandⅢ-Ⅳof ovarian cancer(P<0.05).There were significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA between lymph node metastasis and without lymph nodemetastasis of ovarian cancer(P<0.05).There were no significant difference in the expression of Muc15 protein and mRNA at different age and different tumor size of ovarian cancer(P>0.05).Conclusion The expression of Muc15 is higher in ovarian cancer tissue compared to normal ovarian tissue and benign ovarian cancer tissue,whichmay contribute to carcinogenesis and development of ovarian cancer.

Muc15 gene;Ovarian cancer;Western blot;RT-PCR

R737.31

A

1674-4721(2015)04(c)-0063-03

2015-02-05本文编辑:李亚聪)

赵乐,女,硕士,医师,主要研究方向:肿瘤病理

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