水飞蓟提取物中水飞蓟宾的含量测定

谭佐祥　于跃

摘 要：目的：建立水飞蓟提取物中水飞蓟宾的含量测定方法。方法：本实验采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色谱柱；流动相为甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5；检测波长为288nm；每次进样量20？滋L；流速：0.8mL/min；结果：水飞蓟宾在2.12～64.36？滋g范围内与其峰面积呈良好线性关系。回归方程是y=41676X+178737，R2=0.9984。结论：本实验采用HPLC测定水飞蓟提取物中主要成分水飞蓟宾的含量，方法简便、结果准确、重现性好，可用于水飞蓟提取物中水飞蓟宾的含量测定方法。

关键词：水飞蓟；水飞蓟宾；HPLC

水飞蓟中黄酮类物质是自菊科植物水飞蓟种子中提取的药用有效成分，是一类以二氢黄酮醇与苯丙素类衍生物缩合而成的具有C-9取代基的黄酮木质素类化合物[1，2]。其中主要成分有水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟宁、水飞蓟亭四种同分异构体。其中水飞蓟宾含量最高，保肝活性最强[3，4]，是水飞蓟中黄酮类物质含量测定的标准物质[5，6]。本文采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色谱柱，以甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5为流动相；在288nm检测波长下，采用HPLC测定水飞蓟提取物中主要成分水飞蓟宾的含量，取得了较理想效果。

1 实验仪器与材料

PL203电子天平（上海江仪仪器有限公司）；KQ-100E型超声波处理器（济南华舜仪器有限公司）；Waters 2695高效液相色谱仪（美国沃特世waters有限公司）；水飞蓟宾对照品（中国生物药品检验所）；水飞蓟黄酮类物质提取物（东宁县龙翔中药饮片有限公司）；其他试剂均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

本实验采用Diamonsi（TM） C18（4.6mm×250mm，5？滋m）色谱柱；流动相为甲醇：水：冰醋酸=42：58：0.5；检测波长为288nm；每次进样量20？滋L；流速：0.8mL/min；理论板数按水飞蓟宾峰计算应不低于4000。取对照品溶液及供试品溶液在该色谱条件下分别各进样20？L，记录色谱。详见图1、图2。由图可知，水飞蓟宾与其它组分分离良好。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

精密称取水飞蓟宾对照品50mg（精确至0.01mg），置于500mL容量瓶中，加甲醇制成每1mL含500？滋g的溶液，即得。

2.2.2 供试品溶液的制备

精确称取水飞蓟黄酮类物质提取物50mg（精确至0.01mg），置50mL容量瓶中，用甲醇溶解，超声处理30min。冷却后，加甲醇稀释至刻度，摇匀并滤过。精确量取5mL，置50mL容量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀备用。

2.3 线性关系考察

精确量取水飞蓟宾对照品溶液1.0，2.0，4.0，8.0，10.0，12.0，14.0，16.0

mL，分别置50mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。各精密量取20？滋L，分别注入高效液相色谱仪，以水飞蓟宾峰面积为纵坐标，以水飞蓟宾浓度（mg/mL）为横坐标进行线性回归处理。结果说明，水飞蓟宾在2.12～64.36？滋g范围内与其峰面积呈良好线性关系。回归方程是y=41676X+178737，R2=0.9984。

2.4 精密度试验

取水飞蓟宾浓度约为20？滋g/mL的对照品溶液，重复进样6次，测定峰面积，RSD=0.84%，结果说明该法精密度良好。

2.5 重现性试验

取样品，按供试品溶液制备方法制成6份，照水飞蓟宾方法测定含量， RSD=1.33%，结果说明该法重现性良好。

2.6 稳定性试验

取浓度约为50？滋g/mL的水飞蓟宾对照品液适量，每隔2h进行测定一次，共进行6次，测定峰面积，RSD=0.21%，结果说明本品12小时内稳定性良好。

2.7 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（水飞蓟提取物：含水飞蓟宾34.16%，批号为131026）適量（约相当于水飞蓟宾2.5mg）共6份，精密加入对照品水飞蓟宾2.5mg，置250mL量瓶中，按供试品溶液的制备方法制备，按上述色谱条件测定。计算水飞蓟黄酮类提取物中水飞蓟宾的含量及回收率。平均回收率为101.0%，RSD=1.5%，结果表明该法具有良好回收率。

3 结束语

该实验中通过线性关系考察制定回归方程，得出水飞蓟中水飞蓟宾含量测定的计算方法，并进行了精密度、稳定性、重现性和加样回收率试验。精密度试验中6次重复测定按对照品溶液峰面积计算RSD=0.15%，结果说明，精密度良好；6次稳定性试验按对照品溶液峰面积计算，RSD=0.15%，结果说明，12小时内稳定性良好；6次重现性试验，RSD=1.33%，结果说明，重现性良好。最终结果表明该方法简便，准确、重现性好，可用于水飞蓟提取物中水飞蓟宾的含量测定方法。

参考文献

[1]张淑丽，杨世海，张海 .水飞蓟有效成分及其提取方法研究进展[J].人参研究，2012（4）.

[2]董岩，孔春燕.水飞蓟有效成分的提取研究[J].中成药，2010（7）.

[3]刘洪玲.水飞蓟素的化学成分及药理作用研究进展[J].中国民族民间医药，2008（7）.

[4]张立海，慈慧.水飞蓟素保肝的药理作用及临床应用[J].首都医药，2012（8）.

[5]周采菊，黄华瑞.HPLC法测定水飞蓟素及制剂中水飞蓟宾的含量[J].中国药品标准，2008，9（3）.

[6]中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2010：76.