红旱莲不同部位槲皮素和芦丁的含量测定

李继睿

（湖南化工职业技术学院，湖南株洲 412004）

学术研究

红旱莲不同部位槲皮素和芦丁的含量测定

李继睿

（湖南化工职业技术学院，湖南株洲 412004）

建立了红旱莲中槲皮素和芦丁的高效液相色谱法。采用C18（5μm，4.6 mm×250 mm）柱、以CH3OH∶H2O∶CH3COOH（50∶40∶2）为流动相、254 nm为检测波长、流速为1.0 mL·min－1、在柱温30℃时对红旱莲不同部位槲皮素和芦丁的含量进行检测。结果表明：槲皮素的线性范围为0.14～1.20μg，相关系数r＝0.9989，平均回收率为95.1%，RSD＝1.3%；芦丁的线性范围为0.16～0.88μg，相关系数r＝0.998 2，平均回收率为98.7%，RSD＝1.6%。该方法简便、准确，适合于对红旱莲中槲皮素和芦丁两种有效成分的检测。

高效液相色谱法；红旱莲；槲皮素；芦丁

红旱莲（Hypericum ascyron L.）为藤黄科、金丝桃属多年生草本，高达1 m。茎直立，具4棱。叶卵状披针形，长5—9 cm，宽约2 cm，先端渐尖，基部抱茎，两面都有黑色小斑点。聚伞花序顶生；花金黄色，直径约2.8 cm，萼片、花瓣各5，宿存；雄蕊5束；花柱5，中部以上5裂。蒴果圆锥形，长约2 cm，5室。种子细小，多数。花期6—7月，果期8—9月。其花叶秀丽，雄蕊细如金丝，可群植或从植用于观赏，全草入药，有平肝、止血、败毒、消肿的作用。全草含蛋白质4.6%、胡萝卜素0.735 mg%、核黄素0.024mg%、尼克酸0.12mg%，含槲皮素、山柰酚、金丝桃甙、异槲皮甙、芸香甙。全草含挥发油约0.8%，油中主含α-丁香烯（α-caryophyllene）等。槲皮素和芦丁的含量测定方法有薄层色谱扫描法、高效液相色谱法等[1-4]。本法选择室温下在甲醇中超声提取后[5，6]，再测定槲皮素和芦丁的含量来控制本品质量，方法简便、准确。

1 仪器与试剂

高效液相色谱仪：美国戴安公司P680分析型液相色谱仪，包括Summit HPLC UVD检测器，Chromeleon色谱工作站，CTD-6A色谱柱恒温箱；岛津UV-2550紫外可见分光光度计；试剂：水为超纯水；甲醇为色谱纯；其余均为分析纯；对照品：槲皮素对照品，芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；样品：采自湖南邵阳。

2 实验条件

2.1 色谱条件

色谱柱：C18（5μm，4.6 mm×250mm），流动相：甲醇－水－乙酸（50∶50∶2），流速：1.0 mL·min－1，检测波长：254 nm，柱温：30℃。按以上条件分析，得槲皮素对照品、芦丁对照品与样品色谱图如下：

图1 槲皮素对照品色谱图

图2 芦丁对照品色谱图

图3 红旱莲根色谱图

3 实验方法

3.1 样品溶液的制备

取红旱莲药材适量，研细，精密称取1.000 0 g，加甲醇20.00 ml超声提取2 h，0.46μm聚丙乙烯滤膜过滤，加甲醇定容至25.00ml，作为供试品溶液。供试品溶液的浓度为4.00×104μg·mL－1。

图5 红旱莲叶色谱图

3.2 对照品溶液的制备

精密称取槲皮素和芦丁对照品适量，加甲醇制成60.00μg·mL－1的槲皮素和45.0μg·mL－1的芦丁混合溶液，作为对照品溶液。

3.3 样品测定方法

准确吸取供试品溶液及对照品溶液各5μl，注入高效液相色谱仪，按2.1色谱条件，依法测定。

3.4 线性关系的考察

分别取对照品甲醇溶液4.00、8.00、12.00、16.00、20.00μl，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，分别以槲皮素和芦丁进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，分别得回归方程为：

测定表明槲皮素在0.14－1.20μg范围内，芦丁在0.16－0.88μg范围内均具有良好的线性关系。

3.5 精密度试验

分别精密吸取对照品溶液5μL，重复进样5次，得槲皮素峰面积积分值的相对标准偏差RSD＝0.85%。芦丁峰面积积分值的相对标准偏差RSD＝0.92%。

3.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液5μl，按3.3法测定，结果表明供试品在3 h内有良好的稳定性。

3.7 回收率试验

取已知含量样品加入对照品适量，依法测定，结果平均回收率：槲皮素为95.1%，RSD＝1.3%（n＝5）；芦丁为98.7%，RSD＝1.6%。

3.8 样品测定

分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各5 μL，按2.1色谱条件测定，以外标一点法计算样品中槲皮素和芦丁的含量，不同部位样品的测定结果见表1。

表1 红旱莲中槲皮素和芦丁的含量测定结果

图6 样品与标准对照品光谱比较

4 讨论

4.1 提取方法的选择

为了得到槲皮素和芦丁的提取液，本实验分别采用甲醇、乙醇为溶剂超声提取法，甲、乙醇混合溶剂加热回流提取法进行了对比实验。实验表明，以甲醇为溶剂超声提取2.5 h效果最佳，通过对原料渣的HPLC检测，两目标组分特征峰已消失，其它两组均有少量目标组分残存，而且由于芦丁的水解导致两组分含量发生了变化。

4.2 检测波长的确定

用紫外可见分光光度计，在200－350 nm范围内扫描槲皮素对照品得光谱图，结果在254 nm、312 nm处有最大吸收，但在312 nm处槲皮素峰与其他杂质峰未能达到基线分离，在254 nm处可达到基线分离，同时芦丁和样品在254 nm处也能达到基线分离，故选择254 nm为检测波长，结果见图2.1。

4.3 流动相及组分配比选择

分别选择甲醇－水－磷酸（0.5%）溶液按照（55∶45∶2）、（70∶30∶2）、（40∶60∶5）；甲醇－水－乙酸（55∶45∶2）、（50∶50∶2）为流动相；通过对比试验，就峰形、分离度及柱后处理等三项指标进行了综合考察，结果为：前者峰形和分离度都能满足定量分析的要求，但柱后处理时间较长，对柱使用寿命有一定的影响。甲醇－水－乙酸（50∶50∶2）流动相体系不仅峰形和分离度都能满足定量分析的要求，柱后处理方便易行，可有效提高柱使用寿命，而且分离效果好。故本实验选用甲醇－水－乙酸（50∶50∶2）流动相体系。

5 结论

该方法检测红旱莲中槲皮素、芦丁简便易行、准确、重现性好，适用于红旱莲作为药用原料选择时参考，同时，也适用于以此为原料的制剂业的质量控制。天然野生红旱莲叶中槲皮素含量最高（1.130%），花中芦丁含量最高（25.18%）；红旱莲根中槲皮素、芦丁含量较低（0.362%、5.24%）。

[1]贾晓斌，刘光敏，封亮，等.HPLC测定夏枯草中的芦丁和槲皮素.华西药学杂志，2010.25（1）：70－71.

[2]滕久理，欧辽毅，田江涛.高效液相色谱法同时测定田基黄药材中槲皮素、芦丁和异鼠李素的含量.中南药学，2010.8（1）：41－44.

[3]邹亮，王战国，胡惠玲，等.苦荞提取物中芦丁和槲皮素的含量测定.中国实验方剂学杂志，2010.16（17）：60－62.

[4]戴开金，罗奇志，侯连兵.HPLC法测定桑叶中芦丁、绿原酸和槲皮素.南方医科大学学报，2009.29（3）：579－580.

[5]周光姣，周亚球.正交设计法优选红旱莲总黄酮的提取工艺.甘肃中医学院学报，2011.28（2）：41－44.

[6]刘焱，高智席，李丽，等.金樱子中芦丁和槲皮素不同提取方法的比较研究.安徽农业科学，2011.39（8）：4521－4522，4525.

Determination of Quercetinum and Rutin in Hypericum Ascyron L.

LI Ji-rui
（Hunan Chemical Vocational Technology College，Zhuzhou Hunan 412004，China）

A HPLC method for determination of quercetinum and rutin of Hypericum ascyron L.from different parts was developed by HPLC on C18（5μm，4.6 mm×250 mm）column at 30℃with CH3OH∶H2O∶CH3COOH（50∶40∶2）as the mobile phase.Detection wavelength was 254 nm.The flowing rate was 1.0 mL⋅min－1.The calibration curve of quercetinum was 0.14～1.20 g（r＝0.9989）.The average recovery of quercetinum was 95.1%（RSD＝1.3%）.The calibration curve of rutin was 0.16～0.88 g（r＝0.9982）.The average recovery of rutin was 98.70%（RSD＝1.6%）.The method was simple and accurate，which was applicable for the content determination of quercetinum and rutin in Hypericum ascyron L.

HPLC；hypericum ascyron L.；quercetinum；rutin

R284

B

1003-6490（2015）03-057-03

2015－03－08

李继睿（1964.11—）男，汉族，湖南新邵人，湖南化工职业技术学院副教授，主要研究方向：应用化工和分析检测技术。