抗中性粒细胞胞浆抗体的两种检测方法比较

卓淑发

（广东省惠州市卫生职业技术学院 医学技术系，广东惠州516025）

抗中性粒细胞胞浆抗体的两种检测方法比较

卓淑发

（广东省惠州市卫生职业技术学院 医学技术系，广东惠州516025）

目的：比较线性免疫分析法（LIA）与间接免疫荧光法（ⅡF）检测抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）的性能，评价两种方法在ANCA检测中的应用效果。方法：用LIA法和ⅡF法对92份自身免疫性疾病患者血清和160份健康献血者血清进行检测，用，检验，对两种方法结果进行比较分析。结果：LIA法阳性率为6.4% （16/252），其中PR3阳性率为2.4%（6/252），MPO阳性率为4.0%（10/252）；ⅡF法阳性率为8.7%（22/252），其中C-ANCA阳性率为3.5%（9/252），P-ANCA阳性率为5.2%（13/252）。在经确证为血管炎的19例标本中，LIA法检出阳性16例，假阴性3例，敏感性为84.2%（16/19），准确性为100%（16/16）；ⅡF法检出阳性23例，假阳性4例，敏感性为94.7%（18/19），准确性为81.8%（19/23）。两种方法的敏感性和准确性比较均差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：两种方法检测ANCA的阳性率的比较差异无统计学意义（P＞0.05）；但ⅡF法相对敏感，LIA法有较高的准确性，两者联舍检测可提高ANCA的检出质量。

抗中性粒细胞胞浆抗体；线性免疫分析法；间接免疫荧光法

ANCA是一种针对中性粒细胞和单核细胞胞浆成分的自身抗体，临床上主要用于诊断Wegener肉芽肿﹑原发性小血管炎﹑炎性肠病等系统性血管炎疾病[1]，现已成为临床常规检测项目。目前常用测定ANCA的方法有ⅡF，ⅡF可将ANCA分为胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体（C-ANCA）和核周型抗中性粒细胞胞浆抗体（P-ANCA），而蛋白水解酶3（PR3）是C-ANCA的靶抗原，髓细胞过氧化物酶（MPO）为P-ANCA靶抗原[2]。作者采用LIA和ⅡF法对252份血清ANCA进行检测比较，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

252份血清标本来自临床不同患者和健康献血者，其中92例患者包括系统性红斑狼疮40例，类风湿性关节炎21例，血管炎19例，系统性硬化病7例，干燥综合征5例，以上病例均符合1982年美国风湿病协会（ACR）修订的诊断标准。

1.2 检测方法

（1）标本采集。静脉取血4～5 ml，置干燥试管中待凝固后分离血清，-20 ℃保存。

（2）线性免疫分析法（LIA）。本试剂由德国IMTEC公司原装生产。将核抗原印迹于硝化纤维膜上，封闭非特异反应区，纤维膜然后被切割成膜条。模条上的抗原与特异性抗体缩合后除去未结合蛋白，加入辣根过氧化物酶标记的抗人IgG二抗与之结合，最后加入无色的TMB底物，结合抗体表现为可见的蓝色免疫复合物。结果判断：待膜条完全干燥后与试剂盒提供的判读卡比较Cut-Off，PR3，MPO三条带。阳性结果：条带颜色比Cut-Off相同或更深；阴性结果：条带颜色比Cut-Off浅。

（3）间接免疫荧光法（ⅡF）。使用欧蒙公司的粒细胞马赛克试剂盒，每张生物载片上包被有乙醇﹑甲醛固定的粒细胞，血清及抗体均用PBS（pH 7.2）稀释，加1:10稀释待测血清﹑阴性﹑阳性对照血清，温育洗涤后加异硫氰酸荧光素（FITC）标记羊抗人IgG，温育洗涤后，滴加甘油用盖玻片封片，于荧光显微镜下读片。结果判定：中性粒细胞不出现特异性荧光为抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）阴性。胞浆型抗中性粒细胞抗体（cANCA）阻性：显示均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。核周型抗中性粒细胞抗体（pANCA）阳性：在中性粒细胞核周显示光滑的带状荧光。

2 结果

2.1 两种方法对92份患者血清和160份健康献血者血清进行检测结果比较

LIA法阳性率为6.4%（16/252），其中PR3阳性率为2.4% （6/252），MPO阳性率为4.0%（10/252）；ⅡF法ANCA阳性率为8.7%（22/252），其中C-ANCA阳性3.5%（9/252），P-ANCA阳性率为5.2%（13/252）。两种方法检测阳性率用χ2检验，差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1 LIA与ⅡF检测结果阳性率比较

2.2 敏感性与准确性

252例标本中19例确证为血管炎。LIA法检出阳性16例均确证为血管炎，敏感性为84.2%（16/19），准确性为100%（16/16），假阴性3例；ⅡF法检出阳性22例包括系统性红斑狼疮2例，类风湿性关节炎1例，血管炎18例和系统性硬化病1例，敏感性为94.7%（18/19），准确性为81.8%（18/22），假阳性4例。LIA法和ⅡF法的敏感性比较，差异有统计学意义（P＜0.05），准确性比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 LIA法和ⅡF法检测结果比较

3 讨论

NCA为血管炎的一项敏感的血清学标志。本研究结果如表1显示，LIA法中PR3阳性率为2.4%，MPO阳性率为4.0%；ⅡF法中C-ANCA阳性率3.5%，P-ANCA阳性率为5.2%，两种方法检测阳性率差异比较，无统计学意义（P＞0.05）。目前有10余种中性粒细胞细胞质成分被证实为ANCA昀靶抗原[2]，还有许多未知的靶抗原待确定。LIA法抗原成分经重组纯化后标记，有针对性地检测PR3和MPO两种ANCA的靶抗原。但LIA法对PR3和MPO以外的ANCA靶抗原会漏检。目前ⅡF法是检测ANCA的常用方法。随着对ANCA的深入研究，发现与之相关的疾病越来越多，ⅡF法检出的ANCA阳性并不一定意味着血管炎[3]。ⅡF法检出4例假阳性包括系统性红斑狼疮2例﹑类风湿性关节炎1例和系统性硬化病1例。由于乙醇固定的中性粒细胞中同时存在线粒体﹑高尔基体以及核糖体P蛋白等，若被检血清存在相应自身抗体则可与之结合，会呈现强弱不等的荧光，影响对ANCA的检测[4]。由表2可见，ⅡF法敏感性为94.7%，较LIA法敏感性要高。但LIA法相比ⅡF法具有较高的准确性。

自身免疫病本身有大量自身抗体表达，特别是ANA滴度较高时，鉴别非常困难。从而增加了假阳性率，降低了特异度。ⅡF法检测ANCA相对敏感，虽然它能区分P-ANCA 和C-ANCA，但不能准确地区分出属于哪一种靶抗原相关性抗体，故可作为筛选试验。LIA法能特异地检测PR3-ANCA与MPO-ANCA，但不可替代ⅡF法检测总ANCA。因此LIA法可作为ⅡF法的有效补充，进一步提高ANCA检测的敏感性和准确性。

［1］ 赵秀芬，孙彬，钱军，等.抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法及临床意义[J].实用临床医药杂志，2908，12（6）：79.

［2］ 陈武.间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验对比检测抗核抗体[J].检验医学与临床，2006，3（7）：374.

［3］ 罗冰，王艾丽，虞伟.4种自身抗体对问接免疫荧光法检测抗中性粒细胞胞质抗体的影响[J].医学研究生学报，2009，22（2）：124.

［4］ 王涛，李季青，陈琳洁.线性免疫分析法检测39例系统性红斑狼疮患者血清抗核抗体谱结果分析[J].实用医学杂志，2007，23（15）：2426.

R543

B

1002-2376（2015）12-0146-02

2015-08-30