染色质重塑因子ARID1A在胃癌中的表达及临床意义

窦晓坛 李 丽 谢 颖 邹晓平

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤之一。近年来，虽然胃癌的发病率有所下降，但病死率仍较高［1］。目前晚期胃癌的治疗以化学治疗为主，用于胃癌的靶向治疗药物还较少［2］。由于胃癌是一种异质性很强的疾病，寻找与胃癌发病及预后相关的分子标志物显得尤为重要［3］。

染色质重塑因子AT丰富结合域1 A（ARID1A）是SWI／SNF染色质复合物家族的重要成员，ARID1 A失活导致的染色质重塑可促进多种肿瘤的发生和进展，提示ARID1 A起到抑癌基因的作用［4］。目前有研究发现，ARID1 A在胃癌中存在高频突变，并与PIK3CA和TP53突变相关，提示ARID1 A在胃癌中起到重要作用［5］。

本研究旨在通过免疫组织化学检测ARID1 A在胃癌中的表达情况，并分析其与临床病理特征的关系，探讨其在胃癌发生发展中的作用，为将其作为胃癌早期诊断、判断预后的指标提供依据。

1 材料与方法

1.1 资料

组织芯片购自上海卓立生物科技公司，包括2008年行手术切除的胃癌标本103例以及癌旁组织41例。其中男43例，女60例，年龄32～78岁，平均年龄58.6岁。所有患者术前均未进行任何化学治疗和放射治疗。根据TNM分期标准进行分期，Ⅰ～Ⅱ期59例，Ⅲ～Ⅳ期44例。有淋巴结转移者56例，无转移者47例。

1.2 免疫组织化学方法

标本作4μm厚度的连续切片，经脱蜡、水化处理后，柠檬酸盐高温高压修复3 min，双氧水30 min以阻断外源性过氧化物酶，山羊血清37℃封闭20 min，兔抗人ARID1 A多克隆抗体（Abcam公司，1∶200稀释，一抗）4℃过夜，山羊抗兔二抗（北京中杉金桥公司）37℃ 孵育40 min，DAB显色，苏木素复染，脱水透明封片。

1.3 结果判定

显微镜下计数ARID1 A阳性细胞，计算阳性表达的百分数。根据细胞染色百分率分别计分：无阳性细胞计0分，阳性细胞＜25%计1分，25%～50%计2分，50%～75%计3分，＞75%计4分。根据染色强度分别计分：未染色计0分，弱染色计1分，中等染色计2分，强染色计3分。采用染色强度与细胞染色百分率评分相乘的计分方法，≤3分为阴性，＞3分为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS17.0统计软件对数据进行统计学处理，以P＜0.05为差异有统计学意义。应用χ2检验分析与临床病理特征的相关性，Kaplan－Meier单因素分析和Cox多因素分析来分析与预后的关系。

2 结果

2.1 ARID1 A在胃癌中的表达

在103例胃癌组织中，36例表达阳性，阳性率35.0%。而在41例癌旁组织中，23例表达阳性，阳性率56.1%。ARID1 A在胃癌组织中的阳性表达显著低于癌旁组织，差异有统计学意义（P＜0.05）。见图1、图2。

图1 ARID1 A在胃癌中的表达

图2 ARID1 A在癌旁组织中的表达

2.2 ARID1 A表达与临床病理特征的关系

ARID1 A的表达与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移和 TNM 分期呈负相关（P＜0.05），即ARID1 A在肿瘤体积大、低分化、有淋巴结转移及Ⅲ～Ⅳ期的胃癌组织中表达较低，而其与性别、年龄、Lauren分型、肿瘤浸润深度无关（P＞0.05）。见表1。

表1 ARID1A蛋白在胃癌中的表达与临床病理特征的关系

2.3 ARID1A表达与预后的关系

Kaplan－Meier单因素分析显示ARID1 A表达、肿瘤大小、肿瘤浸润深度、淋巴结转移及分期与患者预后相关（P＜0.05），见图3。Cox多因素分析结果显示，ARID1 A表达是影响胃癌患者预后的独立因素（P＜0.05），见表2。

3 讨论

胃癌的发生发展是一个涉及多种基因、多个步骤的复杂过程［6］。目前认为，肿瘤的发生不仅包括遗传学的改变（即基因改变），如碱基插入或缺失，同时也包括表观遗传学改变。表观遗传学改变是指在基因核苷酸序列不发生改变的情况下，基因表达的可遗传改变，其主要包括染色质重塑、DNA甲基化和非编码RNA［7］。染色质重塑过程需要两类复合物参与，一类是ATP依赖的染色质重塑复合物，另一类是蛋白质共价修饰复合物，如组蛋白乙酰化等。ATP依赖的染色质重塑复合物由多种亚基组成，通过影响局部染色质结构而激活或抑制基因转录［8］，其中ARID1 A是重要的亚基之一。

图3 胃癌患者预后分析

表2 胃癌患者多因素预后分析

ARID1 A属于SWI／SNF重塑复合物成员，人ARID1 A基因定位于第1号染色体1p35.3，包含20个外显子，编码一个由2 285个氨基酸残基构成，相对分子质量约240 000的蛋白质［9］。近年来研究发现，ARID1 A在许多肿瘤中有特异性的突变，如在卵巢透明细胞癌中有50%的突变，在33%的子宫内膜癌中也有突变［4，10］。研究表明 ARID1 A可能起到抑癌基因的作用。Katagiri等［11］运用免疫组织化学技术检测ARID1 A在60例卵巢透明细胞癌中的表达，发现ARID1 A在肿瘤中出现表达缺失，与FIGO分期和CA125水平相关。预后分析提示ARID1 A表达是卵巢癌的独立预后因素。

目前有研究发现，在胃癌中也存在ARID1 A的高频突变，且这种突变在EB病毒感染和存在微卫星不稳定性的胃癌亚型中频率更高［5，12］。ARID1 A在胃癌中也起到抑癌基因的作用。Wang等［13］采用免疫组织化学和real－ti me技术检测ARID1 A在胃癌中的表达，发现与非肿瘤组织相比较，ARID1 A在胃癌中的表达降低，并与T分期和分级相关，且预后分析提示ARID1 A是胃癌的独立预后因素，Yan等［14］的研究也得出类似结论。但是 Wiegand等［15］的研究并未发现ARID1A是胃癌的独立预后因素。本研究发现，与癌旁组织相比，ARID1 A在胃癌中的表达降低，且与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移和TNM分期呈负相关，预后分析也发现ARID1 A是胃癌的独立预后因子。以上研究提示ARID1 A可能参与胃癌的侵袭转移。

目前对于ARID1 A对胃癌细胞生物学行为影响的机制研究还较少。Yan等［14］发现沉默ARID1 A后 E－钙黏蛋白（E－cadherin）的表达也降低，荧光素酶报告基因和染色质免疫共沉淀（CHIP）显示ARID1 A与CDH1（编码E－cadherin）启动子区结合，调控其转录。降低ARID1 A表达后，可促进胃癌细胞发生上皮间质转化（EMT），从而促进其侵袭和转移。ARID1 A是否对胃癌细胞的其他生物学行为有影响，如增殖、凋亡、血管形成等，尚需进一步研究。

综上所述，ARID1A是胃癌发生发展中的重要因子，与胃癌的侵袭转移和预后密切相关，这可为研究胃癌的发生机制和寻找靶向治疗靶点提供依据。

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