HPLC法同时测定清肺解毒片中小檗碱、黄芩苷含量

贾云云，罗士香

(淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223300)



HPLC法同时测定清肺解毒片中小檗碱、黄芩苷含量

贾云云，罗士香

(淮安市食品药品检验所，江苏 淮安 223300)

目的：采用HPLC法同时测定清肺解毒片中的小檗碱和黄芩苷含量。方法：采用HPLC法，色谱柱为HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)，流动相为A(0.1%磷酸)∶B(乙腈)=50∶50，柱温为30℃；检测波长为280nm。结果：小檗碱和黄芩苷分别在0.0251～0.251μg和0.0365～0.365μg范围内与峰面积积分呈良好的线性关系，r分别为0.999和0.998；小檗碱平均加样回收率为97.4%，RSD为1.95%(n=6)，黄芩苷为99.6%，RSD为0.94%(n=6)。结论：该方法结果准确，重复性好，可用于清肺解毒片的质量控制。

清肺解毒片；高效液相色谱法；小檗碱；黄芩苷

清肺解毒片由临床经验方清肺解毒汤经剂型改良而来，全方由黄芩、黄连、桑白皮、白芷、甘草等八味中药组成，具有清肺平喘、泻火解毒的功效，临床主治麻疹后期、热毒入肺。黄芩苷为黄芩的主要有效成分，小檗碱为黄连的主要有效成分。本研究参考相关文献[1-3]，采用高效液相色谱法同时测定方中小檗碱、黄芩苷的含量，方法简单可靠，结果准确，重现性好，可用于清肺解毒片的质量控制。

1 仪器与试剂

Waters2695高效液相色谱仪，Waters-2996紫外检测器，Empower色谱工作站；色谱柱为HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)；AG135型电子天平(瑞士梅特勒)；FA1104N电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司)；AS20500A超声清洗器(天津奥特赛恩斯仪器有限公司)。

清肺解毒片为实验室自制(批号：20130715、20130926、20140105)；盐酸小檗碱(批号：0713-9906，中国食品药品检定研究院)；黄芩苷(批号：110715-200413，中国食品药品检定研究院)；甲醇、乙腈为色谱纯，水为双蒸水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：HederaODS-2柱(4.6mm×200mm，5μm)，流动相：A(0.1%磷酸)∶B(乙腈)=50∶50，柱温：30℃；流速：1mL/min；检测波长：280nm。进样量：20μL。

2.2 混合对照品溶液制备

精密称取小檗碱对照品2.51mg、黄芩苷对照品3.65mg，分别置于10mL容量瓶中，加50%乙醇溶解，并稀释至刻度。精密吸取上述两种对照品溶液各1mL至10mL容量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL中含有小檗碱25.1μg、黄芩苷36.5μg)。

2.3 供试品溶液制备

取清肺解毒片，研细，取细粉1g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇25mL，称定重量，超声30min，放冷，再次称重，用50%乙醇补足重量，取上清液过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.4 阴性溶液制备

按照制备工艺分别制备不含黄连、黄芩的阴性样品，按照“2.3”项下处理阴性样品，即得。

2.5 系统适用性试验

精密吸取上述混合对照品溶液、供试品溶液和阴性溶液各10μL，按照“2.1”项下色谱条件进行测定。供试品溶液色谱图中，呈现与对照品保留时间相同的峰，并且达到基线分离；阴性溶液在对应的保留时间处无吸收峰，表明其他几味药对小檗碱、黄芩苷的测定无干扰，见图1。

图1 对照品、供试品和阴性样品HPLC

2.6 线性关系考察

分别精密吸取上述混合对照品溶液1、2、4、6、8、10μL 进样，按照“2.1”项下色谱条件进行测定。以各对照品进样量(μg)为横坐标(X)，相应的对照品峰面积积分值为纵坐标(Y)，进行回归处理得回归方程Y小檗碱=29 561X+23 781(r=0.999)，Y黄芩苷=29 813X+13 902(r=0.998)。结果表明小檗碱在0.025 1～0.251μg、黄芩苷在0.036 5～0.365μg与峰面积积分呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取上述混合对照品溶液适量，重复进样测定6次，按照“2.1”项下色谱条件进行测定，进样量为10μL。小檗碱、黄芩苷峰面积RSD值分别为0.91%、1.93%，表明仪器和方法的精密度良好，符合测定要求。

2.8 稳定性试验

取上述供试品溶液分别于配制后0、2、4、6、8、12h进样，测定小檗碱、黄芩苷的峰面积，进样量为10μL，小檗碱、黄芩苷峰面积RSD值分别为2.01%、1.32%，表明供试品溶液在12h内稳定，符合测定要求。

2.9 重复性试验

取同一批次清肺解毒片(批号：20130715)，按照供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，共6份，按照“2.1”项下色谱条件进行测定，进样量为10μL，制剂中小檗碱、黄芩苷含量RSD值分别为1.98%、2.87%，表明小檗碱、黄芩苷在该测定条件下重复性良好。

2.10 加样回收率试验

取同一批样品(批号：20130715)1g ，共6份，精密称定(小檗碱含量为59.1μg · g-1，黄芩苷含量为203.9μg · g-1)，精密加入一定量小檗碱对照品溶液(25.1μg · mL-1)、黄芩苷对照品溶液(36.5μg · mL-1)，按照“2.3”项下供试品溶液的制备方法制备，测定并计算加样回收率。结果显示，小檗碱的平均加样回收率为97.4%，RSD为1.95%，黄芩苷的平均加样回收率为99.6%，RSD为0.94%，均符合测定要求，结果见表1。

表1 清肺解毒片中小檗碱和黄芩苷加样回收率试验 (n=6)

2.11 样品测定

取3批清肺解毒片样品，按照供试品溶液制备方法制得供试品溶液，并按照“2.1”项下色谱条件测定小檗碱和黄芩苷含量，结果见表2。

表2 样品中小檗碱和黄芩苷含量测定 (μg·g-1)

3 讨论

小檗碱在263、345、421nm处均有较强吸收，黄芩苷在276、315nm处有较强吸收，在280nm检测波长处有较好的色谱峰形且有效避免了其他组分的干扰，使结果更加准确。

文献报道中，小檗碱和黄芩苷的同步含量测定流动相多选用缓冲盐或离子对体系[4-6]，离子对试剂对色谱柱的填料具有不可逆的改性作用，缓冲盐体系容易堵塞色谱柱并对仪器泵系统具有较大的磨损作用，因此均不宜采用。本实验采用的流动相为乙腈、磷酸水溶液，系统分离清肺解毒片中的小檗碱和黄芩苷，方法简单易操作，避免了离子对试剂和缓冲盐对色谱柱产生的不良作用，且分离效果良好。

本实验建立的高效液相含量测定方法可在同一色谱条件下同时测定清肺解毒片中小檗碱和黄芩苷两种指标性成分的含量，方法简便、准确、重复性好，可用于清肺解毒片的质量控制，同时可为中药复方制剂定性定量方法的确定提供一定参考。

[1] 戚秋鹏,王中彦,刘天富.HPLC法测定万氏牛黄清心微丸中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J].沈阳药科大学学报,2003,20(5):352-354.

[2] 李妍,宋舒暖,李留法,等.高效液相色谱法同时测定清新灵微丸中盐酸小檗碱和黄芩苷的含量[J].时珍国医国药,2009,20(11):2773-2774.

[3] 王西彬,陈畅,何希荣.RP-HPLC法测定三黄片中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量[J].中国实验方剂学杂志,2012,18(13):128-130.

[4] 田书霞,蒋晔.RP-HPLC同时测定三黄片中4种有效成分的含量[J].中国药学杂志,2006,41(3):220.

[5] 冯有龙,余伯阳,董小平.HPLC法高效液相色谱法同时测定三黄片中的蒽醌类、黄酮类及生物碱类化合物[J].药学学报,2006,41(3):285.

[6] 张艳菊,王晓玲.不同厂家三黄片中黄芩苷、盐酸小檗碱的溶出度[J].安徽中医学院学报,2010,29(6):62.

(责任编辑：尹晨茹)

Determination of Berberine and Baicalin in Qingfeijiedu Tablets by HPLC

Jia Yunyun，Luo Shixiang

(Huaian Institute for Food and Drug Control，Huaian 223300，China)

Objective:To establish a method for determining berberine and baicalin in Qingfeijiedu tablets by HPLC.Methods:A hederaODS-2 column(4.6mm×200mm,5μm) in an oven at 30℃ was used, with a mobile phase consisting of 0.1mol·L-1phosphate(A)-acetonitrile(50∶50). Detective wavelength was 280nm.Results:The berberine and baicalin had good linear relationship in the ranges of 0.025 1～0.251μg(r=0.999) and 0.036 5～0.365μg(r=0.998). The average recoveries were 97.4% and 99.6%, with RSD 1.95%(n=6) and 0.94%(n=6), respectively.Conclusion:The method was accurate and reproducible, and can be used for the quality control of Qingfeijiedu tablets.

Qingfeijiedu Tablets; HPLC;Berberine;Baicalin

2015-01-07

贾云云(1988-)，女，江苏省淮安市食品药品检验所药师，研究方向为药品不良反应监测。

R284.1

A

1673-2197(2015)12-0019-03

10.11954/ytctyy.201512008