HPLC法测定舒胸口腔崩解片中3种皂苷的含量

罗 堃，颜 红，夏新华，雷志丹，彭买姣，焦筱淇

(湖南中医药大学 药学院, 湖南 长沙 410208)



HPLC法测定舒胸口腔崩解片中3种皂苷的含量

罗 堃，颜 红，夏新华*，雷志丹，彭买姣，焦筱淇

(湖南中医药大学 药学院, 湖南 长沙 410208)

目的：建立舒胸口腔崩解片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，Kromasil-C18色谱柱 (4.6mm×250mm，5μm)，以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，流速1.0mL·min-1，柱温30℃，检测波长203nm。结果：三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的线性范围分别为0.41～4.08μg(r=0.9997)、0.80～8.04μg(r=0.9993)、0.82～8.20μg(r=0.9994)。该方法平均回收率三七皂苷R1为98.97%(RSD=2.25%，n=6)、人参皂苷Rg1为101.98%(RSD=2.55%，n=6)、人参皂苷Rb1为98.71%(RSD=2.91%，n=6)。结论：该法简便、准确、重现性好，可用于舒胸口腔崩解片中3种皂苷的含量测定。

舒胸口腔崩解片；三七皂苷R1；人参皂苷Rb1；人参皂苷Rg1；含量测定

本制剂来源于《中国药典》2005年版一部收载方“舒胸片”，原制剂是由川芎、红花和三七三味中药组方制备而成，临床主要用于治疗冠心病、心绞痛、心率失常。本研究应用大孔树脂吸附分离技术，得到三七提取物、红花提取物、川芎提取物后，重新组方，将原制剂改剂型开发为口腔崩解片。三七提取物中含有多种化学成分，其中三七总皂苷是其主要活性成分。研究证明，三七总皂苷具有多方面的生物活性，主要表现在扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、改善心肌代谢、抗自由基、抗凝、钙拮抗等方面，其中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1是其最具代表性的特征化合物[1]。为严格控制本制剂产品质量，本文采用高效液相色谱法，以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1为检测指标，对其含量进行测定，为该制剂的质量控制提供参考。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1200 高效液相色谱仪(德国Agilent公司)，G1314B紫外检测器，安捷伦化学工作站；Kromasil100-C18色谱柱(4.6 mm×250mm，5μm)；AR11401C型电子天平(奥豪斯国际贸易上海有限公司)；SB1200型超声波清洗器(宁波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 材料

三七皂苷R1对照品(批号：110745-200617，供含量测定用)；人参皂苷Rb1对照品(批号：110704-200921，供含量测定用)；人参皂苷Rg1对照品(批号：110703-200726)；以上对照品均由中国食品药品检定研究院提供。舒胸口腔崩解片(自制)。乙腈为色谱纯，实验用水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil100-C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长[2]：203nm；流动相：以乙腈(A)-水(B)为流动相进行梯度洗脱。梯度洗脱见表1。

表1 梯度洗脱 (%)

2.2 混合对照品溶液制备

精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Rb1对照品适量，置于同一量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，摇匀，制成1mL含三七皂苷R10.204mg、含人参皂苷Rg10.402mg、人参皂苷Rb10.410mg的混合对照品溶液，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，即得。

2.3 供试品溶液制备[3-4]

取本品10片，研细，称取细粉约0.2g，精密称定，用水饱和的正丁醇30mL，超声提取2次(45min/次)，合并正丁醇提取液，蒸去溶剂，残渣加甲醇溶解后，置25mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，用0.45μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4 阴性对照溶液制备

按处方组成和工艺要求制成不含三七提取物的舒胸口腔崩解片(阴性样品)，再按“2.3”项下方法制成阴性对照溶液，即得。

2.5 色谱分离效果考察

按照上述色谱条件，分别精密吸取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性对照品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪，测定，并记录色谱图。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上有一相同的色谱峰，且各标准品色谱峰与其它色谱峰之间达到基线分离(R>1.5)，而阴性对照液未见干扰。色谱见图1。

2.6 线性关系考察

按照上述色谱条件，精密吸取“2.2”项下的混合对照品2、4、6、10、14、20μL，注入高效液相色谱仪中，测定其峰面积积分值，以进样量X(μg)为横坐标，峰面积积分值Y为纵坐标，绘制标准曲线。结果见表2。

表2 3种组分线性关系测定结果

2.7 精密度试验

精密吸取“2.2”项下的混合对照品溶液10μL，在上述色谱条件下连续进样6次，测定其峰面积积分值，计算各成分峰面积积分值的相对标准偏差，三七皂苷R1RSD=1.46%(n=6),人参皂苷Rg1RSD=1.66%(n=6)，人参皂苷Rb1RSD=1.14%(n=6)。结果表明，仪器精密度较好。

2.8 稳定性试验

分别精密吸取同一供试品溶液10μL，在上述色谱条件下，于0、2、4、8、12、24h进样，测定其峰面积积分值，计算各成分峰面积积分值的相对标准偏差，三七皂苷R1RSD=2.11%(n=6)，人参皂苷Rg1RSD=2.04%(n=6)，人参皂苷Rb1RSD=1.71%(n=6)。结果表明，供试品溶液在24h内基本稳定。

2.9 重复性试验

取同一批号样品(批号：20100816)5片，共6份，按上述方法制成供试品溶液，在上述色谱条件下，测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量，计算平均含量。结果三七皂苷R1平均含量为1.99mg/片，RSD=1.23%(n=6)；人参皂苷Rg1平均含量为7.85mg/片，RSD=1.42%(n=6)；人参皂苷Rb1平均含量为7.89mg/片，RSD=1.01%(n=6)。结果表明，样品测定方法重复性较好。

2.10 加样回收率试验

取已知含量的舒胸口腔崩解片样品(批号：20100825，其中三七皂苷R1含量为1.17%、人参皂苷Rg1含量为4.62%、人参皂苷Rb1含量为4.64%)约0.2g，精密称定，置于25mL量瓶中，共6份，分别精密加入1mL含三七皂苷R11.27mg、人参皂苷Rg13.43mg、人参皂苷Rb13.52mg的混合对照品溶液2mL，然后按上述方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下，测定含量，计算回收率：三七皂苷R1平均回收率为98.97%，RSD=2.25%；人参皂苷Rg1平均回收率为101.98%，RSD=2.55%；人参皂苷Rb1平均回收率为98.71%，RSD=1.91%。试验结果见表3。

2.11 样品含量测定

按上述含量测定方法，测定3批舒胸口腔崩解片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量，每批平行测定2份，三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1平均含量分别为(1.98± 0.04)mg/片、(7.83± 0.04)mg/片、(7.87± 0.06)mg/片。

3 结语

三七总皂苷是从五加科植物三七提取物中的主要有效部位，具有活血祛瘀、通脉活络、改善血液循环的功效，是许多心脑血管药的主要原料。它含有三七皂苷R1、R2、R3、R4、R5、R6，人参皂苷Rb1、Rb2、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Rg2、Rh等20多种皂苷成分，其中以三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量最高[5]，常作为其制剂的质量控制指标。文献报道[6]的三七单体皂苷的方法有比色法、薄层扫描法、高效液相色谱法等，比色法专属性差，不能反映内在质量，薄层色谱扫描法的影响因素较多，显色后扫描结果不稳定。本文采用高效液相色谱法，通过色谱适应性试验和方法学考察，对舒胸口腔崩解片中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1进行了含量测定，结果表明，本法操作简便，准确可靠，可为该制剂的质量控制提供参考。

图1 舒胸口腔崩解片中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1的HPLC色谱

表3 加样回收率试验结果

[1] 李东,黄罗生,平其能.三七总皂苷纯化和脱色工艺研究[J].海峡药学,2008,20(1)：12-14.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[S].北京：化学工业出版社,2010.

[3] 张宪臣,王淑敏,陈光,等.人参总皂苷超声提取工艺研究[J].现代中药研究与实践,2005,19(6)：55-57.

[4] 孔燕君,洪美凤.紫外分光光度法测定人参及三七中总皂苷含量[J].中国现代应用药学,2000，17(1)：51-52.

[5] 苏静,朱卫泉.RP-HPLC梯度洗脱法测定血塞通片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及人参皂苷Rb1的含量[J].药物分析杂志,2005,25(2)：212-214.

[6] 胡静,张铁军,许浚. RP-HPLC法测定三七总皂苷中3种皂苷[J].中草药,2006,37(2)：218-219.

(责任编辑：余 婷)

Determination of Notoginsenoside R1and Ginsenoside Rg1, Rb1in the Shuxiong Orally Disintegrating Tablets by HPLC

Luo Kun,Yan Hong, Xia Xinhua*,Lei Zhidan ,Peng Maijiao ,Jiao Xiaoqi

(Hunan University of Chinese Medicine,College of Pharmacy,Changsha 410208,China)

Objective:To establish a method for determining the content of Notoginsenoside R1and Ginsenoside Rg1, Rb1 in the Shuxiong Orally Disintegrating Tablets.Methods:The product was analyzed by HPLC.The Kromasil-C18column (4.6mm×250 mm,5μm) was used with a mobile phase of acetonitrile-water gradient elution , the flow rate was 1.0 mL·min-1,203nm as the decetion wavelength and column temperature was 30℃.Results:The linear rang of R1, Rg1, Rb1was 0.41～4.08μg(r=0.9997), 0.80～8.04μg(r=0.9993), 0.82～8.20μg(r=0.9994).The average recovery was 98.97%(RSD=2.25%, n=6), 101.98%(RSD=2.55%, n=6), 98.71%(RSD=2.91 %, n=6). Conclusion:The method is simple,accurate,and sensitive,and can be used for controlling the quality of Shuxiong Orally Disintegrating Tablets.

Shuxiong Orally Disintegrating Tablets；Notoginsenoside R1；Ginsenoside Rg1；Ginsenoside Rb1；Quantitative Determination

2015-06-12

湖南省科技厅科研项目(2009031)

罗堃(1980-)，男，湖南中医药大学讲师,研究方向为中药制剂工艺及其质量标准。Email:23689818@qq.com

夏新华(1962-)，男，湖南中医药大学教授、博士生导师,研究方向为中药制剂新技术与新剂型。E-mail:xiaxinhua001@163.com

R284.2

A

1673-2197(2015)21-0030-03

10.11954/ytctyy.201521013