惠州地区人乳头瘤病毒（HPV）的亚型分布特点及其与年龄的相关性分析*

李旭艳

人乳头瘤病毒是一种球形DNA病毒，作为乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，可引起人体皮肤黏膜的鳞状上皮增殖，随着病情进展可诱发生殖道病变，甚至宫颈癌变的发生[1]。目前，流行病学和基础研究已证实HPV感染是宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的主要病因，且已证实高危型HPV感染是宫颈癌的必要病因[2]。同时，国内外文献显示，通过已掌握的大量区域性流行病学本地资料以及研究妇女HPV感染及其与宫颈病变关系，得出HPV感染存在较大的地区差异[3]。近年来，惠州地区每年到本院门诊和体检患者要求检查HPV-DNA的人数逐年增多，且结果显示女性感染HPV人群有逐年增加的趋势，严重影响患者的生活质量。对此，本院通过检测和分析门诊和体检的妇女HPV感染情况及其与年龄的关系，为HPV疫苗研究以及HPV感染早期预防和治疗提供理论依据和指导价值，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2576例2013年1月-2014年12月本院门诊和体检的妇女宫颈分泌物中的脱落细胞，年龄20~78岁，平均年龄（47.21±7.49）岁，且均有性生活史，但无宫颈手术史、无子宫切除手术史、无细胞学检查异常史等治疗史，其中依据年龄分为低龄组（20~29岁）679例、中低龄组（30~39岁）1056例、中龄组（40~49岁）496例、高龄组（>49岁）345例，所有受试者均无心、肝、肾等重要脏器严重性疾病，且签署知情同意书，并经本院医药伦理委员会审批通过。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 所有妇女在门诊和体检时，通过专用刷子置于宫颈口，逆时针方向转3圈，停留10 s后，将采样刷置于专用标本储存瓶并折断采样刷多余部分，将采样刷留于标本储存瓶并送往检验科进行HPV检测。

1.2.2 HPV检测 所有标本均通过全自动离心分离机进行上清液分离和提取，通过由，美国ABI 公司生产的ABI2720扩增仪进行PCR扩增，完成后采用核酸分子导流杂交系统（凯普）对21种常见的HPV基因型进行分型检测，即先预杂交：将固定有探针的尼龙膜浸于2×SSC/0.1% SDS液内，温度为45 ℃，持续15 min，然后把Biotinylated PCR产物置入95 ℃的2×SSC/0.1% SDS中进行变性，持续5 min；再进行杂交，其中杂交液为2×SSC/0.1% SDS，温度为51 ℃，持续1 h，完毕后将尼龙膜置于2×SSC/0.1% SDS中并进行51 ℃洗膜，持续10 min，最后加入sodium citrate和TMB避光反应5 min后弃反应液，洗膜3次后加显色剂进行显色和结果判定，其中HPV检测试剂盒由香港凯普生物科技有限公司提供：DNA提取试剂盒，批号为20091101，PCR扩增试剂盒，批号为20091202，杂交试剂盒，批号为20091202；所有操作均在无菌条件下依据说明书和相关规定进行，检测结果参照说明书评判标准。

1.3 观察指标和标准 统计分析所有受试者HPV的亚型分布特点及其与年龄的关系，HPV检测判定标准：杂交膜共设24个点，Biotin和IC设为对照点，当两点均为阳性则提示检测结果可靠[4]。HPV分型标准：HPV亚型分为高危型和低危型，16种高危型HPV分别为16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68、53、66、cp8304 型，其中53、66、cp8304型为中国人群常见亚型，5种低危型HPV 分别为 6、11、42、43、44 型[5]。

1.4 统计学处理 采用SPSS 15.0统计软件处理数据，计数资料比较采用 字2检验，多组资料之间比较采用F检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 惠州地区HPV感染亚型分布情况 惠州地区2576例标本经HPV基因检查和分型诊断筛查出412例HPV感染阳性，感染总阳性率为15.99%，诊断试剂包含的16种HPV高危亚型及5种HPV低危亚型且均有检出，其中感染单重亚型共349例，包括感染单重高危亚型317例和感染单重低危亚型的32例，多重感染共63例，包括感染2种亚型的51例，感染2种亚型以上的12例，而在HPV亚型分布方面，主要以HPV亚型52、58、16为主，HPV亚型52感染率最高（2.45%），HPV亚型2感染率最低（0.08%），前者明显高于后者，差异有统计学意义（字2=7.72，P<0.01）；高危型HPV感染361例，感染率为14.01%，低危型HPV感染51例，感染率为1.98%，前者明显高于后者，差异有统计学意义（字2=7.13，P<0.01），见表 1。

表1 惠州地区HPV感染亚型分布情况

2.2 惠州地区不同年龄段HPV感染分布和所占百分比情况 惠州地区诊断筛查出412例HPV感染标本中，低龄组HPV感染121例，所占百分比为29.38%，中低龄组238例，HPV感染所占百分比为57.77%，中龄组HPV感染39例，所占百分比为9.45%，高龄组HPV感染14例，所占百分比为3.40%，中低龄组>低龄组>中龄组>高龄组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表2 惠州地区不同年龄段HPV感染分布 例（%）

3 讨论

HPV是一种双链嗜上皮性DNA病毒，属乳多空病毒科，主要侵犯人体生殖道，可诱发如宫颈炎、生殖器疣等生殖道病变，其中高危型HPV持续感染是宫颈癌变的必要病因之一[6-7]。近年来，随着社会经济的发展，人们的生活、思考方式发生了明显的改变，HPV感染率呈现出上升的趋势，严重降低患者的生活质量[8-9]。HPV感染已成为最常见的性传播疾病，具有明显的异质性，其分布也存在种族和地域差异性[10-11]。因此，对其进行大样本分子流行病学研究以及建立地区性HPV感染流行度及优势型别基因库具有重要的临床意义[12]。

有研究结果显示，通过HPV导流杂交基因芯片技术可一次性检测21种常见HPV基因型，且检测通量大、结果准确，可作为HPV基因分型和调查其分子流行病学特征的理想方法[13]。陈红舟等[14]研究结果表明，浙江省舟山地区的感染率为22.10%，常见HPV亚型由高至低依次为HPV52、16、58、18、33、81。而顺德地区的研究显示，该地区感染率为16.86%，常见HPV亚型由高至低依次为HPV16、52、58[15]。由此可见不同地区流行的HPV亚型分布存在明显的差异。本研究通过检测和分析惠州地区门诊和体检的妇女HPV感染情况及其与年龄的关系，结果显示2576例标本经HPV基因检查和分型诊断筛查出412例HPV感染阳性，感染总阳性率为15.99%，在HPV亚型分布方面，由高至低依次为52、58、16，其中HPV亚型52感染率最高（2.45%），HPV亚型2感染率最低，此结果提示惠州地区或人群具有自身的HPV感染特点；而高危型HPV感染率明显高于低危型HPV，提升患者感染高危型HPV机会更高，在研究HPV疫苗时，应着重针对高危型HPV；此外，在HPV感染所占百分比方面，中低龄患者最高，低龄患者第二，中龄患者第三，高龄患者最低，表明本地区HPV感染率以30~39岁的人群最高，其次为20~29岁人群，且39岁以后随年龄增长，HPV感染率呈现出下降的趋势。研究发现，HPV导流杂交基因芯片技术是一项根据中心法则和碱基互补配对原则建立的且可对病原体核酸进行高通量快速检测的技术，可快速、有效、准确区分HPV亚型。通过该技术加强对HPV易感人群监测、随访和定期复查，有利于降低宫颈癌发病率；同时掌握HPV各型别在各年龄段的感染特点，有助于在研发和应用预防性疫苗时，有效地选择目标人群，有利于提高HPV 感染早期预防和治疗的效果，进而改善妇女的生活质量。

综上所述，惠州地区HPV感染几率具有显著的亚型和年龄分布异质性，对指导HPV疫苗研究以及HPV感染早期预防和治疗具有重要的临床价值。

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