灯盏花素注射液对脂多糖致大鼠急性肺损伤保护作用机制的研究

杨秋荻，李建辉

(安新县医院内科，河北 安新 071600)

灯盏花素注射液对脂多糖致大鼠急性肺损伤保护作用机制的研究

杨秋荻，李建辉

(安新县医院内科，河北 安新 071600)

目的 探讨灯盏花素注射液对脂多糖致大鼠急性肺损伤的保护作用。方法健康雄性SD大鼠30只随机分为对照组、脂多糖组(LPS组)和灯盏花素干预组(Bre组)各10只。对照组静脉注射生理盐水0.1 ml/kg；LPS组和Bre组静脉注射脂多糖5 mg/kg；Bre组在注射脂多糖前后30 min分别腹腔注射灯盏花素50 mg/kg。观察三组SD大鼠肺组织病理形态学改变及肺组织中超氧化物歧化酶活性(SOD)、丙二醛含量(MDA)及细胞间粘附分子-1(ICMA-1)的表达变化。结果与对照组比较，LPS组与Bre组SOD降低(P＜0.05)、MDA增多(P＜0.05)、ICMA-1表达增高(P＜0.05)；与LPS组比较，Bre组SOD升高(P＜0.05)、MDA减少(P＜0.05)、ICMA-1表达减少(P＜0.05)。结论灯盏花素注射液可能通过提高机体抗氧化能力、降低细胞间粘附分子-1的表达来减轻脂多糖致大鼠急性肺损伤。

急性肺损伤；灯盏花素；脂多糖；细胞间粘附分子-1

急性肺损伤(Acute lung injury，ALI)是由肺内外各种病因引起的，以进行性呼吸困难和顽固性低氧血症为特征的机体过度炎症反应急性综合征。研究发现，ALI时，氧化应激增强，氧自由基清除减少，体内氧化/抗氧化系统失衡；中性粒细胞是造成ALI时肺组织过度炎症反应的元凶，ICAM-1介导中性粒细胞穿越血管内皮细胞，进一步导致血液黏滞度增加，引发微血管堵塞。因此，有效调控炎症反应是防止ALI发生发展的关键[1-3]。灯盏花又名灯盏细辛，具有降低血液黏度、抑制血小板聚集、改善微循环等作用，临床上广泛应用于治疗缺血性心脑血管疾病，但关于其防治ALI的作用研究较少[4-6]。本研究旨在观察灯盏花对ALI的作用及其可能机制，为临床抗ALI的药物治疗提供一定的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及试剂 SD大鼠：购自河北省实验动物中心提供；灯盏花素注射液(昆明龙津药业股份有限公司，批号：20130802-1)；脂多糖(LPS，美国Sigma公司)；丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶活性(SOD)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。细胞间粘附分子-1(ICAM-1)检测试剂盒(北京博奥森生物技术有限公司)，免疫组化试剂盒(北京中杉生物工程公司)。

1.2 实验分组及急性肺损伤模型制备 健康雄性SD大鼠30只，体质量220～260 g，随机分为三组(n=10)。对照组于尾静脉注射生理盐水0.1 ml/kg；脂多糖组(LPS)和灯盏花素干预组(Bre)于尾静脉注射脂多糖5 mg/kg；Bre组在注射脂多糖前后30 min分别腹腔注射灯盏花素50 mg/kg。各组大鼠注射相应试剂后3 h处死。

1.3 肺病理组织形态观察 肺组织常规多聚甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色，光镜下观察各组大鼠肺病理组织形态学改变。

1.4 肺组织SOD活性和MDA含量的测定 制备10%肺组织匀浆，检测肺组织SOD活性(U/mg)和MDA含量(nmol/mg)，操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。

1.5 肺组织ICAM-1的表达变化 常规石蜡切片脱蜡水化，一抗采用兔抗ICMA-1多克隆抗体，DAB显色，苏木素复染。采用PBS代替一抗作为阴性对照。ICMA-1阳性颗粒表达于胞浆中，呈棕黄色，以平均吸光度(OD值)代表该切片ICAM-1的表达水平。

1.6 统计学方法 应用SPSS11.5统计软件包进行处理，计量数据以均数±标准差(±s)表示，两组间计量数据比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 肺组织病理形态学变化 对照组大鼠肺组织未发现异常改变；脂多糖组肺泡壁增宽，肺泡腔出血，大量白细胞浸润；灯盏花素干预组肺泡腔出血减少，白细胞浸润减轻(见图1)。

图1 各组大鼠肺组织病理形态学变化(HE×400)

2.2 肺组织ICAM-1表达检测结果 对照组肺组织ICAM-1表达的棕黄色阳性信号较弱；脂多糖组ICAM-1表达的阳性信号较对照组明显增强(P＜0.05)，尤其是血管内皮细胞；灯盏花素干预组ICAM-1表达的阳性信号较脂多糖组明显减弱(P＜0.05)。见图2和表1。

图2 各组大鼠肺组织ICAM-1表达结果(×400)

2.3 肺组织SOD活性、MDA含量检测结果 与对照组比较，脂多糖组肺组织中SOD活性降低、MDA含量增加(P＜0.05)；与脂多糖组比较，灯盏花素干预组SOD活性升高、MDA含量降低(P＜0.05)，见表1。

表1 SOD活性、MDA含量及ICAM-1表达检测结果(±s,n=10)

表1 SOD活性、MDA含量及ICAM-1表达检测结果(±s,n=10)

注：a与对照组比较，P＜0.05；与Bre组比较，bP＜0.05。

组别SOD活性(U/mg)MDA含量（nmol/mg）ICAM-1(OD值)

3 讨论

ALI是临床上常见的危重病症，病死率高达40%～70%。针对其发病机制的研究表明：氧化抗氧化失衡、炎症与抗炎平衡失调参与了ALI的发生和发展[7]。静脉注射LPS是常用的复制ALI模型的方法。本研究光镜下肺组织病理学改变显示：肺泡间隔增厚，肺泡腔出血，大量炎性细胞浸润，说明ALI模型成功建立。应用灯盏花素注射液后，上述病理改变得到有效缓解，提示灯盏花素可有效缓解ALI时肺组织的炎症反应。

ALI时氧化应激增强，氧自由基产生增多，进一步激活中性粒细胞加重肺损伤[8]。SOD活性与MDA含量高低可反映机体脂质过氧化及组织损伤程度的高低。本实验显示：LPS组较Control组大鼠肺组织SOD活性显著降低(P＜0.05)，MDA含量明显增加(P＜0.05)，说明LPS导致大鼠肺部出现了严重的氧化应激反应；应用灯盏花素后，肺组织SOD活性升高(P＜0.05)，MDA含量减少(P＜0.05)，提示灯盏花素具有一定的抗氧化能力，可减少ALI时氧自由基的生成，抑制脂质过氧化反应的发生，从而有效地保护肺组织。

ICAM-1在急性肺损伤的发生发展过程中起着重要作用，抑制肺血管内皮细胞ICAM-1的表达，可有效降低中性粒细胞与内皮细胞的粘附，减少中性粒细胞在肺部的聚集和活化，减轻肺损伤[9-10]。本研究免疫组织化学染色技术结果显示：脂多糖组较对照组肺组织ICAM-1表达显著增强(P＜0.05)；应用灯盏花预处理后，肺组织ICAM-1阳性表达信号明显减弱(P＜0.05)，提示灯盏花可能通过抑制ICAM-1的表达而发挥对肺组织的保护作用。

综上所述，灯盏花素对抗ALI的作用机制之一，可能与其减少氧自由基的生成，抑制脂质过氧化反应的发生，下调ICAM-1的表达有关。

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Protective effects of breviscapine injection on acute lung injury induced by lipopolysaccharides in rats.

YANG Qiu-di,LI Jian-hui.
Department of Internal Medicine,Hospital of Anxin County,Anxin 071000,Hebei,CHINA

ObjectiveTo explore the protective effect of breviscapine(Bre)on acute lung injury induced by lipopolysaccharides(LPS)in rats and its possible mechanisms.MethodsThirty male Sprague-Dawley rats were randomly divided into three groups:Control group,LPS group,Breviscapine(Bre)group,each with 10 rats.Control group was injected by 0.1 ml/kg normal saline.LPS group and Breviscapine group was injected of LPS(5 mg/kg).Additionally,Bre group received intraperitoneal injection of breviscapine(50 mg/kg)30 minutes before LPS injection and 30 min after LPS injection.Morphological changes of lung tissues were observed under light microscope.The activity of superoxide dismutase(SOD),the content of malondialdehyde(MDA)in lung tissues and the content of I intercellular adhesion molecule-1(CAM-1)in serum were detected in each group.ResultsCompared with Control group,the activity of SOD decreased(P＜0.05),the content of MDA increased(P＜0.05),and the content of ICAM-1 increased(P＜0.05)in LPS group and Bre group.Compared with LPS group,the activity of SOD increased(P＜0.05), the content of MDA decreased(P＜0.05)in lung tissues,and the content of ICAM-1 decreased(P＜0.05)in Bre group.ConclusionBreviscapine could reduce inflammation reaction in lung tissues during acute lung injury,which is probably through enhancing antioxidant activity of organism and decreasing the content of ICAM-1.

Acute lung injury;Breviscapine;Lipopolysaccharides(LPS);Intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1)

R-332

A

1003—6350（2015）02—0163—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.02.0058

2014-08-06)

李建辉。E-mail：782349019@qq.com