一例母麝因打斗造成死亡的鉴定

竭 航，封孝兰，曾德军，陈 强，张承露，舒 刚，赵贵军*

(1.重庆市药物种植研究所药用动物研究室，重庆 南川 408435;2.四川农业大学动物医学院，四川 雅安 625014)

林麝属于国家一级保护动物，被列入《濒临灭绝野生动植物国际贸易公约》和《世界自然保护联盟濒危物种红色名录》，主要产品麝香是珍贵的中药和香料［1，2］，目前全国人工养殖的林麝数量仅6 000余头［3］。林麝数量增长缓慢，其中很重要的一个原因是林麝尚未完全驯化，野性较强。付聪［4］研究表明，雄性林麝常常因为争夺配偶和食物而发生打斗，轻者造成外伤感染，重者甚至发生死亡。因此，雄性林麝之间的打斗已引起人们的关注。而母麝因争偶而打斗也会给养殖户造成重大损失，本研究就1例母麝因争夺配偶打斗引起瘫痪，最终因形成化脓型窦道而死亡的病例鉴定进行报道，以期为减少林麝养殖户的损失提供参考。

1 发病情况

2013年11月，某养殖场2头成年母麝由于争偶而发生打斗，体质较弱的母麝发生开放性创口和后肢瘫痪。养殖场立刻将受伤的母麝隔离单独饲喂，用碘酒进行伤口消毒并敷消炎粉处理，配合抗生素进行全身治疗。受伤母麝开始阶段采食情况正常，精神未见异常，但移动时后肢只能在地上拖行。2014年8月12日开始出现采食量下降，精神萎靡的症状，于8月16日死亡。

2 病理变化

剖解可见死亡母麝被毛凌乱，尸僵不全，后肢严重溃烂，肛门处已经完全化脓腐烂成为窦道，化脓灶上布满蛆，散发恶臭;肺部有明显出血点(见图1);肝脏肿大，比正常颜色较深;脾脏肿胀。

图1 死亡林麝解剖情况

3 病理组织切片

无菌采集死亡林麝的心、肝、脾、肺、肾病灶部位，置于10%福尔马林中固定。待福尔马林完全渗入病灶组织后，将样品送到四川农业大学动物病理实验室进行病理切片的制作。实验采用HE染色法。

4 病原微生物鉴定

4.1 病原菌分离培养 无菌采集心、肝、脾、肺、肾的病变部位和脓肿病灶与周围组织交界处组织，迅速保存于 -20℃冰箱中。按照方法［5］将病样用无菌生理盐水稀释成 10-1、10-2、10-3、10-4、10-5共5个浓度梯度，每个浓度做3个重复。分别接种于S.S平板培养基、麦康凯平板培养基、血平板培养基、营养琼脂培养基、巧克力培养基(郑州博赛生物有限公司生产)，37℃培养箱中培养48 h，观察菌落形态、革兰氏染色和显微镜检，初步确定各培养基上细菌生长的种类和数量。

4.2 16S rRNA测序分析［5］挑取数个菌落悬浮于含50 μL超纯水的小试管中，振荡混匀，用PCR仪95℃加热10 min，置于冰上冷却15 min，12 000 r/min离心2 min，取上清液作为PCR反应的粗制DNA模板，置-20℃保存备用。采用细菌16S rRNA通用引物进行PCR扩增，PCR反应体系为:10×Taq Buffer 5 μL，Mg2+3 μL，2.5 μmol/L dNTPs 4 μL，10 μmol/L上、下游引物各 1 μL，Taq DNA 聚合酶 0.5 μL，无菌水30.5 μL，模板 5 μL，共 50 μL。PCR 反应条件为:95℃预变性5 min，94℃变性45 s，49℃退火45 s，72℃延伸1.5 min，35个循环，最后72℃充分延伸10 min，用1%琼脂糖电泳检测。由上海生工贸易有限公司测序，序列在GenBank中进行BLAST比对判断细菌的种类。

5 结果与分析

5.1 病理切片观察结果

5.1.1 心脏:结构均匀，心肌纤维完整，形态正常(见图2)。

图2 死亡林麝心肌纤维完整，形态正常(H.E.400×)

5.1.2 肝脏:肝脏中央静脉溶血、瘀血，肝索间隙增宽(见图3A，箭头所指为增宽的肝索间隙和中央静脉瘀血);肝索肿胀、溶解，中性粒细胞浸润，胞浆颗粒变性(见图3B，箭头所指为中性粒细胞浸润)。

图3 肝脏的病理切片观察结果

5.1.3 脾脏:脾脏被膜有坏死灶，脾小动脉出血(见图4)。

图4 脾脏被膜坏死，脾小动脉出血(H.E.400×)

5.1.4 肺脏:肺泡间质细胞肿胀、融合，结缔组织增生、瘀血(见图5A，箭头所指为肿胀的间质细胞);肺泡间炎症细胞增生，含铁血黄素出血，静脉瘀血，炎症细胞增多(见图5B，箭头所指为炎症细胞浸润)。

图5 肺脏的病理切片观察结果

5.1.5 肾脏:肾小球瘀血，肾小管出血、瘀血(见图6A，箭头所指为瘀血的肾小球);肾小管间隙消失、肿胀;肾小管炎性细胞浸润;肾小球肿胀(见图6B，箭头所指为肾小管炎症细胞浸润、肾小球肿胀)。

图6 肾脏的病理切片观察结果

5.2 病原微生物分离与鉴定结果

5.2.1 在死亡林麝化脓病灶处及心、肝、脾、肺、肾组织中均分离到2种细菌，一种在血平板培养基上为白色针尖大小，β溶血，革兰氏染色呈阳性，形态呈棒状或杆状，单在或成丛存在;在巧克力培养基上不生长。另外一种细菌在S.S平板培养基和麦康凯平板培养基上不生长;在营养琼脂培养基中生长良好，在血平板上也可生长，菌落表面光滑、湿润、隆起。

5.2.2 通过细菌16S rRNA通用引物进行PCR扩增，得到的PCR产物经测序后在GenBank中比对结果表明，分离得到的2种细菌分别为化脓隐秘杆菌和葡萄球菌。

6 讨论

6.1 化脓性疾病是林麝的常见疾病，也是引起林麝死亡的最主要原因［5～7］。引起林麝化脓的病原较多，付文龙等［8］从林麝喉头后侧深部脓肿中分离出葡萄球菌。罗燕等［9］从化脓性病变的组织器官中分离到大肠埃希氏菌、沙门氏菌、绿脓杆菌和葡萄球菌等。赵克雷等［5］研究表明，28例林麝脓肿病原更为复杂，主要包括化脓隐秘杆菌、绿脓杆菌、蜡状芽孢杆菌、大肠杆菌等12种细菌。本研究在病变组织中检出化脓隐秘杆菌和葡萄球菌，病原的种类包括在上述研究结果中，说明化脓隐秘杆菌和葡萄球菌的分布较广，从华东到四川和重庆均有分布，它们作为条件性致病菌、化脓性疾病的原因常常是因为环境消毒不彻底，在林麝相互打斗或者其他因素(如树枝划伤)引起外伤或者抵抗力下降的情况下入侵林麝机体而发病。

6.2 林麝是尚未完全驯化的动物，其野性依然存在，雄性林麝之间常常为了争夺食物和配偶打斗，轻者造成外伤感染，重者死亡。刘春燕等［10］研究表明，上海某养麝场12只林麝死亡病例中，有7例因为打架发生外伤感染，最后造成死亡。在本研究中，母麝因争夺配偶而发生打斗，受伤瘫痪，最后形成化脓型窦道而死亡。因此，在配种期应加强对林麝的监控，建立健全值班制度，以防公、母麝之间打斗而引起不必要的损失。

7 小结

为了减少林麝化脓性疾病的危害，应建立定期消毒制度，尽量杀灭环境中的条件性致病菌。同时，及时处理林麝圈中可能给林麝带来伤害的尖锐物品，如折断的树枝、铁丝、铁钉等。最重要的是应加强林麝的驯化与管理，防止林麝因打斗造成损伤，一旦发生打斗，应马上将其隔离，并及时用药物对受伤林麝进行救治，防止林麝死亡事件的发生。

［1］ Goh C L，Kwok S F.A simple method of qualitative analysis for musk ambrette，musk ketone and musk xylene in cologne［J］.Contact Dermatitis，1986，14(1):53.

［2］ 国家药典委员会.中国药典［M］.北京:中国医药科技出版社，2010.361.

［3］ 李林海，黄祥云，刘刚，等.我国麝养殖种群现状及养殖业发展的分析［J］.四川动物，2012，31(3):492.

［4］ 付聪.圈养马麝社群冲突和等级地位［D］.北京:中央民族大学生态学，2010.

［5］ 赵克雷，李旭鑫，帕哈尔定·帕拉哈提，等.圈养林麝脓肿病病原菌分离鉴定及药敏分析［J］.四川动物，2011，30(4):522 ～526.

［6］ 徐正强，徐宏发，唐继荣.麝体表化脓症手术诊治［J］.畜牧兽医杂志，2000，19(2):39 ～40.

［7］ 刘洪义.林麝常见化脓性疾病的诊治［J］.西南科技大学学报，2004，(1):99 ～100.

［8］ 付文龙，付春梅，王建明，等.林麝喉头后侧深部脓肿的诊断与治疗［J］.经济动物学报，2010，14(4):222 ～224.

［9］ 罗燕，程建国，王建明，等.林麝肺炎及化脓性疾病的病理组织学观察［J］.动物医学进展，2009，30(11):122～123.

［10］ 刘春燕.林麝Moschus berezovsikii养殖种群死亡原因及其生命生理特征研究［D］.上海:华东师范大学生态学，2008.