子宫内膜癌组织Cav-1 mRNA表达及意义

王惠清，李锦行，张萍(青岛大学医学院附属青岛市立医院，山东青岛266011)

子宫内膜癌组织Cav-1 mRNA表达及意义

王惠清，李锦行，张萍
(青岛大学医学院附属青岛市立医院，山东青岛266011)

摘要:目的探讨小窝蛋白(Cav-1)在子宫内膜癌发生、发展中的作用。方法采用实时荧光定量RT-PCR (FQ-PCR)法定量检测20例正常子宫内膜组织(正常组)，45例子宫内膜良性病变组织(良性组)和49例子宫内膜癌组织(内膜癌组) Cav-1 mRNA的表达量，分析Cav-1 mRNA表达量与子宫内膜癌临床病理参数的关系。结果正常组Cav-1 mRNA相对表达量为1.000±0.138，良性组为3.531±0.727，内膜癌组为8.534±1.502，Cav-1 mRNA相对表达量内膜癌组高于良性组，良性组高于正常组，P均＜0.05。内膜癌组Cav-1 mRNA表达与临床分期、分化程度和淋巴结转移有关(P均＜0.05)。结论Cav-1高表达可促进子宫内膜癌的发生及发展，Cav-1有望成为子宫内膜癌早期诊断的新指标及治疗的新靶点。

关键词:子宫内膜癌; Cav-1基因

近年来子宫内膜癌的发病率不断上升，且有年轻化趋势。目前对其确切病因仍不清楚，且早期诊断困难［1］。探讨子宫内膜癌的发病机制，寻找一种新型的标记物用于肿瘤的早期诊断是亟待解决的问题。小窝蛋白(Cav)是细胞脂质双分子层上的特异性微区，组成了细胞质膜上50～100 nm的烧瓶状囊泡性内折，在膜转运、脂质动态平衡、信号转导过程中发挥重要调节作用［2］。研究发现Cav-1在乳腺癌、肺癌、卵巢癌和肉瘤组织中表达下调，而在食管癌、肾癌、前列腺癌和膀胱癌中表达上调［3，4］;但其与子宫内膜癌关系的研究鲜见。2014年5～11月，我们采用FQ-PCR法定量检测子宫内膜癌组织中Cav-1 mRNA的表达，现分析结果，探讨其在子宫内膜癌发生发展中的作用。

1　资料与方法

1.1临床资料选择2012年10月～2014年7月青岛市立医院收治的49例子宫内膜癌患者的手术标本(内膜癌组)，均经病理检查确诊。患者年龄31 ～74岁，平均53.83岁，其中＜50岁21例(42.86%)，≥50岁28例(57.14%)。病理类型:腺癌35例、浆液性乳头状癌9例，透明细胞癌5例。按2009年国际妇产科联盟(FIGO)的病理分期标准Ⅰ期15例、Ⅱ期21例、Ⅲ期8例、Ⅳ期5例;组织分化程度为高分化24例、中分化17例、低分化8例;淋巴结转移阳性15例，阴性34例。选择14例子宫内膜单纯性增生、15例复杂性增生，16例复杂伴不典型增生的子宫内膜组织标本为良性对照组，年龄47～63岁，平均50.27岁，均由两位以上的病理科医生诊断确诊。选择同期20例因子宫肌瘤于我院行全子宫切除患者的正常子宫内膜组织为正常组，患者年龄30～57岁，平均47.96岁。所有入选病例手术前均未接受过性激素治疗及放化疗。组织标本离体后10 min内置于液氮中保存。

1.2Cav-1 mRNA表达检测采用实时荧光定量RT-PCR(FQ-PCR)法。取各组冰冻保存的子宫内膜组织30 mg置于去RNA酶的1.5 mL离心管中，添加1 mL的Trizol。按照Trizol试剂盒使用说明书从组织中提取总RNA。紫外分光光度计测定RNA提取液的D260吸光度值，计算纯度和浓度。严格按照逆转录试剂盒说明进行逆转录处理，合成cDNA，－20℃冻存备用。按照荧光定量反应试剂盒说明书建立反应体系，实施PCR循环。Cav-1 mRNA (140 bp)及β-actin(179 bp)引物由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.3统计学方法采用SPSS19.0统计软件。数据采用珋x±s表示。各组间Cav-1 mRNA表达量比较采用t检验; Cav-1 mRNA与子宫内膜癌临床病理参数的关系采用两独立样本t检验或单因素方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

正常组Cav-1 mRNA相对表达量为1.000± 0.138，良性组为3.531±0.727，子宫内膜癌组为8.534±1.502，Cav-1 mRNA相对表达量子宫内膜癌组高于良性组，良性组高于正常组，P均＜0.05。Cav-1 mRNA表达与子宫内膜癌的临床分期、分化程度和淋巴结转移均有关(P均＜0.05)，详见表1。

表1　Cav-1 mRNA表达与子宫内膜癌临床病理参数的关系(±s)

临床病理参数　n　Cav-1 mRNA相对表达量临床分期Ⅰ期　15　1.000±0.045Ⅱ期　21　2.003±0.114Ⅲ期　8　4.224±0.436Ⅳ期　5　12.606±1.434分化程度高24　1.000±0.054 中17　2.078±0.276 低8 7.155±0.453淋巴结转移无34　0.331±0.045 有15　1.000±0.110

3　讨论

子宫内膜癌是女性生殖器官最常见的恶性肿瘤之一，其发病率高居妇科疾病恶性肿瘤之首［5］。子宫内膜癌的发生是多基因、多步骤的复杂过程，细胞周期进程紊乱、细胞增殖异常、癌基因激活或抑癌基因失活均可能导致正常子宫内膜恶性转化及子宫内膜癌的发生发展［6］。近年来国内外认为子宫内膜癌的发生主要与雌激素升高有关，亦与子宫内膜生长过度、肥胖、高血压、糖尿病、不育、月经延迟、相关家族史有关。

Cav家族有3个亚型，即Cav-1、Cav-2和Cav-3。Cav-1蛋白是细胞质膜中不可缺少的一部分，位于特殊的脂质筏中，而该脂质筏存在于包括癌细胞在内的多种细胞中［3］。Cav-1共有α和β两个亚型，由于选择性剪切或启动作用，在氨基末端CAV-1β 较CAV-1α存在31个氨基酸残基缺失。由于Cav-1能直接与受体、激酶、黏附分子和G蛋白等信号分子交互作用，因此能通过调节细胞增殖、分化、凋亡、黏附和侵入起到调节肿瘤的作用。Cav-1在肿瘤细胞分化、增殖、凋亡和转移中起重要调控作用，已成为肿瘤研究的热点之一，但在肿瘤发生发展中的具体作用仍存有争议。Cav-1基因位于人7q31.1染色体上，该位点在部分肿瘤(如乳腺肿瘤和肾脏肿瘤)类型中表现为杂合性缺失，表明Cav-1基因可能作为候选肿瘤抑制基因［7，8］，但另有研究表明Cav-1在食管胃底癌、泌尿系肿瘤等多种肿瘤中的表达上调，并与预后不良密切相关［9，10］。由此可见Cav-1在肿瘤发生发展中作用复杂，其生物学功能具有不确定性。相关假说和证据表明这种差异与细胞和细胞接触蛋白E钙黏着素有关。一项最新评估致癌性转化的研究证实，Cav-1与E钙黏着素存在相关性［11，12］;在含环氧合酶-2(COX-2)和前列腺素(E2)的人结肠癌和鼠黑色素瘤细胞实验中发现，Cav-1可能只有在E钙黏着素经β-连环蛋白-Tcf/Lef通路存在的情况下才能抑制抗凋亡蛋白生存素的表达［12］。

郑亚民等［13］报道，Cav-1对Hs578T耐药细胞株成瘤性、侵袭和转移能力具有明显的促进作用。Kato等［14］证实，在食管鳞癌中，Cav-1过表达与肿瘤分级和淋巴结转移有关，认为Cav-1的高表达是食管鳞癌淋巴结转移的促进因素。以上结果提示，Cav-1的过表达与人类一些肿瘤的发生、侵袭、转移密切相关。本研究各组Cav-1 mRNA均有不同程度表达，表达量随恶性程度上升而升高，表明Cav-1在子宫内膜癌中发挥癌基因样作用。内膜癌组有淋巴结转移者Cav-1表达量高于无淋巴结转移者，表明Cav-1表达量与子宫内膜癌的侵袭转移有一定关系，但仍需扩大研究样本量进一步研究。

综上所述，尽管Cav-1在不同肿瘤中的作用仍存在争议，其作用机制也不甚明了，但其与肿瘤发生的相关性不容置疑。子宫内膜癌作为女性最常见的恶性肿瘤之一，其早期诊断仍是一大难题，Cav-1可作为肿瘤标志物对高危人群进行检测、筛查。此外，进一步阐明Cav-1在子宫内膜癌发生、发展中的分子机制，通过靶向抑制Cav-1的表达，有望对子宫内膜癌的治疗起到积极作用。

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(收稿日期:2015-01-18)

通信作者:张萍

文章编号:1002-266X(2015)22-0051-03

文献标志码:B

中图分类号:R711.74

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.22.019