鸭病毒性肝炎的诊断及防制措施

王治秀

(黑龙江省穆棱市畜牧兽医局,黑龙江穆棱 157500)

鸭病毒性肝炎的诊断及防制措施

王治秀

(黑龙江省穆棱市畜牧兽医局,黑龙江穆棱 157500)

鸭病毒性肝炎是由鸭肝炎病毒所引起的雏鸭的一种急性、高度致死性的传染病。其特征是发病急,传播迅速,病程短和死亡率高。其临诊症状特点为角弓反张,病理变化特征为肝脏肿大和出血性斑点。

鸭病毒性肝炎;诊断;防制措施

1 流行病学

本病主要侵害5周龄以内，尤其是2周龄以内的雏鸭，常突然发病，传播迅速，病程短而病死率高，一般为10～60%，在新疫区高达90%以上。本病一年四季都有发生，但多数在冬季和早春爆发。在自然情况下，雏鸭是本病毒天然易感动物，成年鸭是本病毒的带毒者，鸡和火鸡在自然情况下一般不被感染。雏鸭病毒性肝炎的传播，主要是通过与病鸭的直接接触，粪便、食具、垫料和车辆等都可能传播此病，甚至人也有可能成为病毒携带者，但不能通过鸭蛋垂直传播。在饲养中由于管理不良、维生素和矿物质缺乏、鸭舍潮湿、鸭群拥挤等，均可促进本病的发生。

2 临诊症状

本病的潜伏期短（一般为2～4d），发病突然，病程进展迅速。起初病鸭呈现呆滞、厌食、缩颈、垂翅、离群、眼半闭呈昏迷状态，有时出现腹泻，发病半日至一日即出现特异性神经症状。病鸭全身抽搐，身体倾向一侧，仰脖，头弯向背部。死时大多头向背仰，呈角弓反张姿态，故本病俗亏“背脖病”，这是本病死亡时的典型特征。

3 病理变化

主要病变在肝脏和胆囊。肝肿大、质脆，表面有大小不等的出血斑点，肝脏颜色变淡，表面斑驳；胆囊肿胀并充满胆汁，胆汁呈褐色、淡茶色或淡绿色；脾肿大呈斑驳状；多数病例可见肾脏肿大并充血，呈灰红色，血管明显呈暗紫色树枝状。有的病鸭出现脂肪肾综合征和胰腺局部坏死的。

4 实验室检验

鸭病毒性肝炎检疫的检验方法有鸡（鸭）胚中和试验、微量血清中和试验。微量血清中和试验是应用固定病毒稀释血清的方法，在单层鸭肝细胞上进行中和试验，用于鸭病毒性肝炎中和抗体测定。

（1）器材准备：用具为24孔或96孔平底带盖塑料培养板。剪刀、镊子、平皿、烧杯、注射器等经120℃高压灭菌后烘干备用。抗原是鸭病毒性肝炎病毒（弱毒），标准阴、阳性血清由指定单位提供。选用14～16日龄鸭胚。平衡盐溶液：按常规方法配制。胰酶消化液：用无钙无镁平衡盐溶液配制成0.0625%胰酶溶液，滤菌后分装，存放于－20℃备用。细胞培养液：199培养液加入20%犊牛血清和1%抗菌素溶液。细胞维持液：以199培养液加入1%抗菌素溶液配成。抗菌素溶液：选用庆大霉素，用灭菌的双蒸水配制成1万单位/ml，4℃保存。

（2）实验方法：①鸭胚肝细胞的制备。用碘酒和酒精消毒蛋壳表面，打开气室，取出鸭胚肝脏（除去胆囊），放在烧杯里，用平衡盐溶液冲洗三次，剪碎，再用该液冲洗三次（除去血液）。加入5～10倍于组织碎块量的胰酶消化液，37℃水浴消化20min，吸去胰酶消化液。加入细胞培养液清洗2次，轻轻吹打，直到肉眼看不见组织碎块为止。移入刻度离心管，以500转/min离心1min，取沉淀物，用细胞培养液按1：400～600的比例稀释，加入培养板内，每孔0.8～1ml，加盖后置含有5%二氧化碳培养箱37℃培养。48h后在倒置显微镜下观察，培养板内长成细胞单层，可供试验。②鸭病毒性肝炎病毒毒价的测定。用维持液将病毒进行10－3～10－7的10倍系列稀释（每一个稀释度换一支吸管）。吸去长有单层细胞的培养板内细胞培养液。培养板纵向每4孔为一列，每列分别加入1个稀释度的病毒液0.1ml/孔，每孔补加细胞维持液0.9ml。设正常细胞对照。置含有5%二氧化碳培养箱37℃培养，48～72h记录细胞病变（CPE）情况。根据Reed-Muench的方法计算病毒的组织细胞培养半数感染量，配制每0.1ml含100个组织组胞培养半数感染量的病毒液。③中和试验。先在第一板（不含有细胞的培养板）上，加维持液0.1ml/孔。于每排第一孔分别加入被检血清0.1ml/孔（每份血清做2排），混合后吸0.1ml加入第二孔，如此依次由左至右进行1：2～1：32倍连续稀释至第六孔（每一个稀释度换一支吸管）；弃去最后1孔混合液0.1ml。每个血清稀释孔加入0.1ml病毒液（100个组织细胞培养半数感染量/ml），加盖后置37℃培养箱中30～60min。再用第二板（长有单层细胞的培养板），吸去培养液后将前一板各孔的血清病毒中和液全部移入第二板相应各孔，然后每孔补加维持液0.8ml。同时设置病毒回归试验。加盖后置5%二氧化碳培养箱中37℃培养，48～72h后在倒置显微镜下观察，判定结果。④病毒回归试验。将配好的100个组织细胞培养半数感染量的病毒液作10倍梯度稀释至10－1～10－3；于第二板上每一列（4孔）加入1个稀释度的病毒液0.1ml/孔，每孔补加维持液0.9ml。

（3）结果判定：当细胞对照正常；阴性血清对照在1：2以上的各孔细胞都出现细胞病变；阳性血清对照误差在原效价±1个对数值以内；病毒回归的毒价应再现原有的毒价，或误差在原效价±0.5的对数值以内，本试验有效。阳性反应：被检血清稀释度在1：4及以上的两个细胞孔都没有出现细胞病变；可疑反应：被检血清稀释度在1：4有一个孔的细胞出现细胞病变；阴性反应：被检血清稀释度在1：2以上的各孔细胞都出现细胞病变。

5 防制措施

目前尚未证实本病可以经蛋传播。本病的爆发多系从疫区购进带毒雏鸭而致其他敏感雏鸭发病，也有的是由于孵化房污染所致，因此不从疫区购进雏鸭，孵化房坚持经常消毒是控制本病的前提条件。免疫预防目前主要采用鸡胚化弱毒苗或鸭瘟-鸭病毒性肝炎二联弱毒疫苗接种，雏鸭出壳后每羽0.3～0.5ml肌肉或皮下注射。一旦发病可采用高免血清（或卵黄）或康复血清作紧急预防，平时采取严格的综合防制措施是必要的。

[1] 陈建红，辛朝安，张洛培，等.鸭病毒性肝炎诊断与防制要点[J].中国家禽，2000，（11）：37-39.

王治秀（1977—），女，大学本科，副高级兽医师，研究方向为动物常见病临床诊治。