UPLC-PDA法动态测定白花延龄草中二种化学成分

王玉方，赵卉，金春爱，罗婧，刘继永

(中国农业科学院特产研究所，长春 130112)

延龄草为百合科(Liliaceae)延龄草属(Trillium)植物延龄草(TrilliumtschonoskiiMaxim.)的干燥根、根茎及果实，又名头顶一颗珠、芋儿七、狮儿七等，为土家族七药之一。延龄草属植物全世界共有约50种，我国有3种，即延龄草(T.tschonoskiiMaxim.)、白花延龄草(T.kamtschaticumPall.)和西藏延龄草(T.govanianumWall.)[1，2]。延龄草以干燥根和根茎、果实入药，具有降压、阵痛、抗肿瘤功效。延龄草属植物中次生代谢产物以皂苷为主[3，4]，化学成分研究多针对根、根茎。为科学评价延龄草不同部位药用价值，本试验采用重楼皂苷Ⅵ(Polyphyllin Ⅵ)和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷为标准性成分，采用超高效液相色谱-光电二极管阵列检测器(HPLC-PDA)法对不同采收期白花延龄草根及茎叶中2种化合物含量进行测定，以确定白花延龄草最佳采收期。

1 仪器、材料与试剂

1.1 仪器

Acquity UPLC H-Class(美国Waters公司)；XS205电子天平(瑞士Mettler toledo公司)；Milli-Q Advantage A10超纯水器(美国Millipore公司)；YQ1001C超声波清洗机(上海易净超声波仪器有限公司)。

1.2 材料与试剂

1.2.1材料白花延龄草全株采自吉林省左家延龄草驯化栽培试验田。采收时期：样品1：7月24日；样品2：8月4日；样品3：8月14日。

1.2.2试剂重楼皂苷Ⅵ(纯度≥98%)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷(纯度≥98%，农业部特种经济动植物及产品质量监督检验测试中心制，以下简称为“YLC”)；乙腈、甲醇(HPLC级，Fisher公司)；甲醇(AR，北京化工厂)。

2 方法

2.1 色谱条件

色谱柱：Waters Acquity UPLC BEH C18(2.1mm×100mm，1.7μm)；检测器：PDA；流动相：乙腈(A)-水(B)；流速：0.4mL/min；线性梯度洗脱：0min～5min，40%A～47%A；柱温：35℃；检测波长203nm；进样量：2μL。

2.2 对照品溶液的制备

称取重楼皂苷Ⅵ 10.02mg、YLC 10.04mg，以HPLC级甲醇分别溶解并定容至50mL容量瓶中，配制成含2种目标物、浓度各为0.2mg/mL的对照品溶液。

2.3 供试样品溶液的制备

根茎粉末0.1000g，以分析纯甲醇25mL浸泡过夜后超声提取1h，以0.2μm有机系滤膜超滤后待测；称取茎叶粉末2.000g，以分析纯甲醇25mL浸泡过夜后超声提取1h，以0.2μm有机系滤膜超滤后待测。

2.4 线性关系

2.5 精密度

取0.1mg/mL混合标准溶液进样6次，重楼皂苷Ⅵ和YLC峰高RSD值分别为0.56%和0.47%，表明精密度良好。

2.6 重复性

根茎、茎叶粉末各6份，按“2.3”项处理后测定，重楼皂苷Ⅵ和YLC峰高RSD值分别为0.91%和1.02%，表明重复性良好。

2.7 稳定性

按“2.3”项制备的根茎和茎叶的样品溶液间隔4h测定，测定7次，重楼皂苷Ⅵ和YLC峰高RSD值分别为1.26%和1.06%，表明4h之内稳定性良好。

2.8 回收率

根茎和茎叶按“2.3”方法各称样3份，根茎各加入0.1mg/mL混合标准溶液10mL，各加甲醇15mL；茎叶各加0.05mg/mL混合标准溶液1mL，各加甲醇24mL，按“2.3”项处理，根茎和茎叶的重楼皂苷Ⅵ、YLC平均回收率见表1。

表1不同部位2种成分加标回收率测定结果

Table 1 The recovery of two components from different positions (%)

续表1

成 分Component部 位Position样 品Sample添加量Addition测得值Measuredvalue回收率Recoveryrate平均回收率Averagerecovery相对标准偏差RSDYLC根 茎Rhizome1.1201.0002.130101.11.1201.0002.10098.01.1201.0002.120100.099.71.5茎 叶Stemleaves0.0490.0500.100101.00.0490.0500.09899.00.0490.0500.099100.0100.01.0

由表1可知，该方法具有较好的回收率。

2.9 样品测定

3个采收期白花延龄草样品根茎和茎叶的重楼皂苷Ⅵ、YLC含量测定结果见表2。标准品和样品的UPLC色谱图分别见图1、图2、图3。根茎和茎叶中2种成分动态变化趋势见图4和图5。

表2不同采收期的根茎和茎叶中2种成分的含量

Table 2 The content of two components from rhizome and stem leaves at different harvest time

1.YLC；2.重楼皂苷Ⅵ 1.YLC;2.Polyphyllin Ⅵ

3 结论

由表2、图4和图5可知，不同时期采集的3个样品中，根茎中2种成分含量随采收期的延后呈上升趋势，其含量分别为重楼皂苷Ⅵ：1.16%、1.19%、1.35%；YLC：0.910%、0.970%、1.120。茎叶中2种成分含量呈下降趋势，分别为重楼皂苷Ⅵ：0.013%、0.019%、0.002%；YLC：0.064%、0.049%、0.012%。因此，白花延龄草栽培过程中若以重楼皂苷Ⅵ和偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷为主要评价指标，则其适宜采收期为8月中旬。

1.YLC；2.重楼皂苷Ⅵ 1.YLC;2.Polyphyllin Ⅵ

1.YLC；2.重楼皂苷Ⅵ 1.YLC;2.Polyphyllin Ⅵ

1.YLC；2.重楼皂苷Ⅵ 1.YLC;2.Polyphyllin Ⅵ

Fig.4ContentdynamiccurvesofpolyphyllinⅥandYLCintherhizome

1.YLC；2.重楼皂苷Ⅵ 1.YLC;2.polyphyllin Ⅵ

Fig.5ContentdynamiccurvesofpolyphyllinⅥandYLCinthestemleaves

[1]谢万宗.全国中草药汇编:上册[M].第2版.北京:人民卫生出版社,2000:225-226.

[2]宋立人,洪恂,丁绪亮,等.现代中药学大词典[M].第2版.北京:人民卫生出版社,2001:787-788．

[3]张忠立,左月明,熊师华,等.延龄草根及根茎的化学成分研究[J].中草药,2011,9(42):1689-1691．

[4]Nohara T,Miyahara K,KawasakiT.Steroid saponins and sapogenins of underground parts of trillium kamtschaticum PALL.Ⅱ.Pennogenin-and Kryptogenin 3-O-Glycosides and related compounds[J].Chem Pharm Bull,1975,23(4):872-885.