西藏绵羊胚胎移植引进试验

德庆卓嘎 西藏自治区农科院畜牧兽医研究所 850009

1 材料和方法

1.1 试验羊只

本试验采用内蒙古无角多塞特羊冷冻胚胎、林周半细毛羊以及当地羊作为试验材料。共选择64 只供、受体母羊，供体羊和受体羊选择无繁殖机能疾病、非疫区并无传染疾病史、健康、膘情在7 成以上、年龄在2.5~5 岁之间的经产澎波半细毛羊和当地母羊；从林周半细毛羊种羊场借用2 只澎波半细毛羊种公羊，为供、受体羊试情与供体羊人工授精、采胚用。

1.2 试验药物

CIDR（孕酮栓）、FSH（促卵泡生长激素）、PMSG（孕马血清）、LH(促黄体生成激素)、PBS（杜氏磷酸缓冲液）、PG(氯前列烯醇)、75%酒精、5%碘酊、新洁尔灭、生理盐水、双蒸水、青霉素、链霉素、消炎粉、冲卵液和培养液。

1.3 供受体羊同期发情处理

对选出的64 只供受体羊进行阴道埋置海绵栓同期化发情处理。将海绵栓送入阴道中，使细绳暴露在阴门外，10 天后拉住细绳将海绵栓取出，并注射PMSG（孕马血清）2.5mL/只，同时打不同的耳标，做好记录。

1.4 供体羊超数排卵处理

供体羊的超数排卵处理在情期的第8～13 天进行，对选出的10 只供体羊进行CIDR（孕酮栓）阴道埋置，注射FSH（促卵泡生长激素），每天肌注2次，连续注射4 天。第一次肌注2mL，以后每天上、下午各注射1.5mL。注射后观察发情，采用试情公羊发情确认，观察时间为每天早、晚各1 次。

1.5 胚胎的采集与移植

在供体羊输精的第3 天，采取腹部手术法采集胚胎，胚胎采集与移植在配种后第3 天进行，胚胎发育至桑葚胚至囊胚阶段进行。当确认所有胚胎已进入子宫角内，子宫角基部用止血钳穿孔，然后插入冲胚管。根据子宫角的粗细，由充气管注入5~10mL 空气，使气囊封阻子宫腔。然后由进液孔注入冲胚液30~50mL，再由此孔导出。也可对子宫角进行上行或下行法冲洗，两侧子宫角冲卵完成后从气球放出一部分空气，拔出冲卵管。在子宫角基部扎孔，将冲卵管插入，用注射器注入气体5~10mL，使气囊在子宫角基部固定。然后在子宫角尖端插入套管针。将冲卵液由套管针注入，从冲卵管中流出，用平皿接收冲卵液，每侧冲卵液用量20~30mL。冲完后气囊放气，冲卵管插入另一侧，用同样方法冲卵。

2 结果

2.1 超数排卵结果

同期化发情处理母羊64 只，其中供体羊10只，注射FSH 进行超数排卵处理。发情的4 只供体羊通过腹腔镜人工输精后采用输卵管采胚和子宫采胚两种方法采集胚胎，共采集胚胎23 枚，其中受精卵14 枚，受胎率60.87%。

2.2 受体羊发情结果

同期化发情处理的54 只受体羊中，冻胚移植34 只，鲜胚移植20 只；冻胚移植34 只中发情母羊有27 只，鲜胚移植20 只中发情母羊有7 只，共计34 只受体羊发情，发情率达到62.96%。

2.3 人工授精和自然配种结果

本次试验采取腹腔内窥镜子宫角输精法，采用微创的外科手术，将母畜进行仰卧保定，不给以麻醉剂，在嵌部插入镜头，通过向腹腔内充气观察空间，借助于腹腔镜将精液直接送入母羊排卵一侧子宫角，从而大大提高了人工授精的受胎率。

2.4 胚胎移植结果

同期化发情处理的54 只受体羊中，冻胚34只，鲜胚20 只；受体羊共产羔11 只，其中产鲜胚移植羔羊3 只、产冻胚移植羔羊8 只，冻胚移植母羊中1 只所产双羔因难产死亡。鲜胚和冻胚移植的受胎率分别达到42.86%和33.33%

（1）冻胚移植结果。冷冻胚胎的采集、冷冻与保存工作在内蒙古农牧业科学院畜牧所进行。采集无角多塞特肉用绵羊胚胎60 枚，并为本试验冷冻保存了60 枚胚胎，其中A 级40 枚、B 级20 枚。冻胚移植34 只，产羔8 只，受胎率为33.33%，接近冻胚移植受胎率35%的目标。双胚受胎母羊1 只，双胚率为2.94%。

（2）鲜胚移植结果。鲜胚移植20 只，产羔3 只，受胎率为42.86%，接近鲜胚移植受胎率45%的目标。

3 讨论

本试验证明，在西藏地区对藏系绵羊进行胚胎移植是可行的，对供体采用同期发情配种和超数排卵技术,受胎率达到42.86%，略低于国内报道45%的水平。这可能与供体羊冲卵时机、海拔高度等有关,也可能与胚胎移植技术操作性强、难度大、技术人员尚未熟练掌握有关，尚待进一步研究。

[1]王金文,张果平,等.杜泊绵羊超数排卵与胚胎移植试验〔J〕.中国草食动物,2006,1:14～15.

[2]全国高等农业院校教材《家畜繁殖学》第四版.中国农业出版社.

[3]郭鹏程.羊胚胎移植同期发情和超数排卵应用技术的研究[D].东北农业大学,2007.