“消银解毒饮”对银屑病血热证外周血淋巴细胞调控作用研究

张凯辉 段行武

(1 北京中医药大学东直门医院东区皮肤科，北京，101100； 2 北京中医药大学东直门医院皮肤科，北京，100007)

“消银解毒饮”对银屑病血热证外周血淋巴细胞调控作用研究

张凯辉1段行武2

(1 北京中医药大学东直门医院东区皮肤科，北京，101100； 2 北京中医药大学东直门医院皮肤科，北京，100007)

目的：观察正常人及银屑病患者应用消银解毒饮治疗前后外周血T淋巴细胞及共刺激因子表达的变化，探讨“消银解毒饮”对银屑病血热证外周血淋巴细胞调控作用。方法：治疗组给予连续8周消银解毒饮治疗，用流式细胞术检测，与对照组相互比较外周血T细胞亚群及共同刺激分子CD28、CD80、CD86的表达情况。结果：治疗组治疗后皮损评分降低；治疗前后与正常人相比CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+降低，CD8+细胞升高；CD28疗前高于、疗后低于正常组；CD86治疗前后均明显高于正常组；CD80正常组与治疗前均无明显统计学意义，治疗后有下降的趋势。治疗组治疗前、后外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+和共刺激因子CD28、CD80、CD86均无明显的统计学意义。结论：消银解毒饮临床疗效肯定；银屑病患者外周血T细胞亚群及共刺激因子的表达存在异常；患者临床症状的好转与外周血T细胞亚群及共刺激因子表达的改变是否平行相关尚不确定。

消银解毒饮；银屑病血热证；T淋巴细胞；共刺激因子

银屑病中医属“白疕”“松皮癣”“干癣”等范畴，是一种常见的慢性炎症性增生性皮肤病。关于其病机，《诸病源候论》最早记录为：“此由风湿邪气，客于膝理，复值寒湿，与血气相搏，则血气否涩，发次疾也。”由此看出，对本病的认识反映出内因(血气)，外因(风、寒、湿)致病的学术思想。近现代医家多从“血热”“风燥”“热毒”等论治，认为本病以热为主，病位在血分，血热是发病的关键因素和主要根源。关于其治疗原则，中医多从清热凉血、祛风养血、滋阴润燥等论证。自20世纪90年代初以来，对银屑病发病机制的研究取得了重大突破，人们逐渐认识到银屑病是多基因遗传背景和环境等多因素作用下的T细胞介导的免疫异常性疾病[1]。一些针对T细胞的治疗，如应用抗CD4单克隆抗体、环孢素及白介素融合毒素直接清除活性T细胞或抑制其活性，以及阻断细胞因子产生及其作用的发挥，均可有效治疗银屑病[2]，也提示了T细胞是银屑病免疫发病环节的主要介导者。

东直门医院皮肤科金起凤教授为全国中医药专家，依据其创立的经验方“消银解毒汤”而研制的“消银解毒饮”，由水牛角、牡丹皮、赤芍、金银花、蚤休、生甘草、全蝎等组成，功效为凉血清热，解毒熄风，已在本科临床应用多年，对银屑病血热证患者疗效肯定。本研究采用流式细胞术方法，通过比较银屑病患者治疗前后与正常对照组外周血T细胞亚群及共同刺激分子CD28、CD80、CD86的表达情况，探讨“消银解毒饮”对银屑病血热证外周血淋巴细胞调控作用。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 鼠抗人FITC-CD4(No:555346)、鼠抗人PE-CD8(No:555367)、鼠抗人PE-Cy5-CD3(No:555334)、鼠抗人FITC-IgGI(No:555748)、鼠抗人FITC-CD28(No:555728)、鼠抗人FITC-CD80(No:557226)、鼠抗人FITC-CD86(No：555657)购于美国BD公司。流式细胞检测剂购于北京市晶美基因谷科技有限公司。FACS Calibur型流式细胞仪为美国BD公司产品。

1.2 分组及检测方法 治疗组为30例进行期寻常型银屑病患者(经临床和部分病理确诊)，根据《中药新药治疗白疕的临床研究指导原则》和顾伯康主编的《中医外科学》第1版，中医辨证符合寻常型银屑病血热证型[3-4]。对照组为20例健康人，2组在年龄、性别构成上无统计学意义。临床疗效评价以皮损情况的PASI评分为标准。治疗组给予消银解毒饮(东直门医院制剂室提供)100 mL/瓶，口服，每次50 mL，2次/d，连续用药4周为1个疗程，连续观察2个疗程。

流式细胞术检测治疗组治疗前、后以及20名健康自愿检查人员外周血中T细胞及共刺激因子的表达。治疗组治疗前、治疗组治疗后与对照组均抽取肘静脉血2 mL，置于肝素抗凝管，2 h内送检。测定T细胞亚群及淋巴细胞CD28、CD80、CD86的表达情况。

2 结果

2.1 治疗前后皮损PASI评分比较 经t检验可得，30例患者治疗前后皮损PASI评分显著下降，结果具有统计学意义(P<0.05)。结果见表1。

表1 患者治疗前后PASI评分比较

2.2 治疗前后外周血T细胞亚群及共刺激因子检测结果比较 30例患者外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值和共刺激因子CD28、CD80、CD86在治疗前后结果均无统计学意义(P>0.05)。结果见表2。

表2 患者治疗前后外周血T细胞亚群及共刺激因子检测结果比较±s)

2.3 治疗组治疗前与正常组外周血T细胞亚群及共刺激因子检测结果比较 30例患者治疗前与20例对照组相比，CD4+治疗前明显低于正常组(P<0.01)，CD8+治疗前明显高于正常组，CD4+/CD8+治疗前明显低于正常组，CD28治疗前明显低于正常组，CD86治疗前明显高于正常组，CD3+、CD8+正常组与治疗前均无明显统计学意义(P>0.05)。结果见表3。

表3 治疗组治疗前与对照组外周血T细胞亚群及共刺激因子检测结果比较±s)

2.4 治疗组治疗后与正常组外周血T细胞亚群及共刺激因子检测结果比较 30例患者治疗后与正常组对比，CD3+与CD4+治疗后低于正常组，CD8+治疗后高于正常组，CD4+/CD8+治疗后低于正常组，CD28治疗后低于正常组，CD86治疗后明显高于正常组，CD80正常组与治疗后无统计学意义。结果见表4。

表4 治疗组治疗后与对照组外周血T细胞亚群及共刺激因子检测结果比较±s)

3 讨论

本研究结果显示，消银解毒饮对寻常型银屑病血热型治疗后皮损评分降低；患者治疗前后与正常人相比T细胞亚群CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+比值降低，有统计学意义(P<0.O5)，而CD8+细胞升高，有统计学意义(P<0.05)。CD28治疗前高于正常组，而治疗后CD28低于正常组。CD86治疗前后均明显高于正常组(P<0.05)，CD80正常组与治疗前均无明显统计学意义(P>0.05)，但治疗后有下降的趋势(P<0.05)。30例银屑病患者外周血T细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+比值和共刺激因子CD28、CD80、CD86在治疗前后结果均无明显的统计学意义(P>0.05)。

免疫学发病机制一直都是银屑病的研究热点。银屑病动物模型的建立及T淋巴细胞在真皮和表皮的浸润都有力证明了银屑病是一个由T淋巴细胞介导的自体免疫性疾病[5]。现有研究证实，T细胞活化是银屑病关键的发病机制，T淋巴细胞通过信号刺激活化或通过非抗原依赖性方式活化,由活化后的T淋巴细胞通过特殊的方式或途径迁移至病变部位，活化的T淋巴细胞释放大量的细胞因子进而引发角质形成细胞的过度表达及异常分化。

关于银屑病外周血与皮损中的T细胞亚群的研究提示，银屑病的外周血T淋巴细胞处于活化状态，而抗原提呈细胞的活性增高可激活细胞免疫的发生，天然杀伤细胞与银屑病的发病也有一定关系。韩义香[6]等对银屑病患者外周血T细胞及其亚群的研究显示，银屑病患者外周血CD3+、CD4+细胞及CD4+/CD8+比值显著降低，而CD8+细胞升高，提示银屑病患者Th细胞明显减少，可能为循环中的T细胞浸润到银屑病皮损内或T细胞在干细胞水平即有损伤引起。Ferenczi[7]的研究也显示银屑病患者外周血中CD4+T细胞比例远低于正常人，而CD8+T细胞比例远高于正常人，T细胞亚群CD4+T细胞和CD8+T细胞的比例失衡、细胞免疫状态的改变影响着银屑病皮损的发生和发展，显示T淋巴细胞在银屑病的发病过程中确实起到重要的作用。

CD4+T细胞是最主要的免疫调节细胞，包括Thl和Th2，分别介导细胞免疫应答和体液免疫应答。本实验显示外周血CD4+细胞上CD80、CD86及T细胞CD28表达跟正常对照组相比明显上调，且与病情严重程度呈正相关。Nickoloff[8]研究显示，CD80、CD86在正常人表皮和真皮内不表达或少表达，在银屑病皮损中有较强的表达，相对正常皮肤均有明显的上调，CD28、CD80、CD86是免疫网络中主要的效应分子，CD28与APC表面的CD86结合产生的共刺激信号，诱导其他共刺激分子的表达，相互作用进一步上调T细胞活性，放大T细胞的免疫效应。Gottlieb[9]报道用单剂量IDEC_114(一种抗CD80单抗)治疗24例中、重度慢性斑块型银屑病,结果斑块变平，皮损内T细胞数目下降。

东直门医院皮肤科对消银解毒饮治疗银屑病的前期研究显示，瞿幸[10]等用消银解毒饮治疗银屑病血热证，对照组则服用复方青黛胶囊，治疗8周后的结果显示皮损PASI积分治疗组显著低于对照组，综合疗效、总显效率治疗组明显高于对照组，有统计学意义。段行武[11]的实验研究表明，消银解毒饮除通过免疫调节而发挥其治疗作用外，还可通过对角质形成细胞过度增殖的直接抑制及诱导其凋亡，抑制真皮微血管的异常增生而发挥治疗作用。

研究表明，消银解毒饮治疗银屑病血热证，使患者皮损症状减轻，临床疗效显著；银屑病患者与正常人比较，外周血T细胞亚群及共刺激因子的表达存在异常，提示银屑病有可能是一种T细胞介导的疾病，银屑病患者存在细胞免疫的异常。本次实验银屑病患者服用消银解毒饮治疗8周后外周血T细胞亚群及共刺激因子的表达未出现明显变化，故未表明银屑病患者治疗8周后临床症状的好转与外周血T细胞亚群及共刺激因子表达情况的改善是否存在平行相关性。消银解毒饮对银屑病患者外周血T细胞亚群及共刺激因子表达的调节作用有待于更进一步的研究。

[1]Lowes MA,Lew W,Krueger JG.Current concepts in the immunopathogenesis of psoriasis[J].Dermatol Clin，2004,22(4):34-369.

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[3]顾伯康.中医外科学[M].上海：上海科学技术出版社,1986:149.

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[5]Braddock M.Editorial：bio-markers as tools for discovery of new psoriasis therapies[J].Curr Drug Discov Techno1，2012 Mar，9(1):1.

[6]韩义香,杨毅，章圣辉,等.银屑病患者外周血T细胞亚群及B7/CD28的表达.中国麻风皮肤病杂志,2007,23(10):908-909.

[7]Ferenczi K，Burack L，Pope M，et al.CD69，HLA- DR and the IL-2R identify persistently activated T cells in psoriasis vulgaris lesional skin：blood and skin comparisons by flow cytometry[J].J Autoimmun，2000 Feb，14(1):63-78.

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[10]瞿幸,张晓红.消银解毒饮治疗银屑病血热证85例临床研究[J].中医杂志,2001，42(2):103-104.

[11]段行武.消银解毒饮治疗寻常型银屑病的细胞生物学研究[D].北京：北京中医药大学,2007.

(2014-11-04收稿 责任编辑：徐颖)

Study on Regulation Role of Xiaoyinjiedu Drink on Peripheral Blood T-lymphocytes in Blood-heat Syndrome of Psoriasis Patients

Zhang Kaihui1, Duan Xingwu2

(1DermatologyofDongzhimenHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing101100,China； 2DermatologyofDongzhimenHospitalAffiliatedtoBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100007,China)

Objective: To explore the regulation role of Xiaoyinjiedu drink on peripheral blood T-lymphocytes in blood-heat syndrome of Ps(Psoriasis) patients by observing peripheral blood T lymphocytes and the expression of co-stimulatory factor changes of normal and Psoriasis patients, who received Xiaoyinjiedu Drink.Methods:Treatment group was given 8 weeks of medication, using flow cytometry, while comparison was made to the control group in terms of Peripheral Blood T-lymphocytes and Co-stimulatory factor CD28, CD80, CD86.Results:The treatment group's lesion scores decreased after treatment; CD3+, CD4+and CD4+/CD8+is reduced when compared with normal group before and after treatment; CD28 was higher than the normal group before treatment, but lower than normal group after treatment; CD86 was significantly higher than the normal group before and after treatment; There was no significant difference between the normal group and treatment before, but after treatment there was a downward trend in CD80. There was no significant difference in the peripheral T-lymphocytes CD3+, CD4+, CD8+, CD4+/CD8+and Co-stimulatory factor CD28, CD80, CD86 before and after treatment in the treatment group.Conclusion:Xiaoyinjiedu Drink has positive clinical effect. Psoriasis patients' peripheral blood T-lymphocytes and Co-stimulatory factor have abnormal expression. It is uncertain whether the improvement of clinical symptoms of patients and the expression of T-lymphocytes and Co-stimulatory factor are parallel related.

Xiaoyinjiedu Drink; Blood-heat Syndrome of Ps; T-lymphocytes; Co-stimulatory factor

国家自然科学基金项目(编号：81273755)——新型T辅助细胞亚群Th17、Th22及效应因子IL-22与银屑病辨证论治关系的研究

段行武(1965.7—)，男，博士研究生，主任医师，科主任，研究方向：中医药治疗银屑病硬皮病，E-mail：xwduan@sina.com

R243;R758.63

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.06.015