香术茯苓颗粒的镇痛和抗菌作用

王宇翎，吴文宁，林 杰，杨梦媛，朱 韬，罗欢

◇药学研究◇

香术茯苓颗粒的镇痛和抗菌作用

王宇翎，吴文宁，林 杰，杨梦媛，朱 韬，罗欢

目的通过观察香术茯苓颗粒的镇痛和抗菌作用，探讨其治疗腹泻的可能机制。方法通过小鼠热板法和扭体法，观察香术茯苓颗粒的镇痛作用。采用血清药理学和体外抗菌试验，观察香术茯苓颗粒的抗菌作用。结果香术茯苓颗粒3、6 g／kg给药3 d可延长小鼠疼痛潜伏期，减少冰醋酸引起的小鼠扭体次数，具有显著的镇痛作用；血清药理学实验显示，香术茯苓颗粒6 g／kg给药3 d血清可以增加大肠埃希菌抑菌圈直径，有明显的抑菌作用；但对伤寒杆菌和金黄色葡萄球菌无作用。体外抗菌实验显示，香术茯苓颗粒对大肠埃希菌的最低抑菌浓度（MIC）为20.0 mg／ml，最低杀菌浓度（MBC）为80.0 mg／ml；对伤寒杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC均为160.0 mg／ml，未测出MBC值。结论香术茯苓颗粒具有一定的镇痛和抗菌作用，可能是其治疗腹泻的部分机制。

香术茯苓颗粒；抗菌作用；镇痛作用

香术茯苓颗粒具有除湿、运脾、止泻之功效，其原汤剂临床上主要用于风寒或者寒湿所致的小儿泄泻、腹痛、呕吐及恶心，效果明确且无不良反应，现将其开发成标准规范且易携带的现代中药颗粒剂。先前的药理学试验［1］已经证明其对蓖麻油和番泻叶引起的小鼠腹泻模型具有一定的止泻作用。该研究进一步观察其镇痛和抗菌作用，以探讨其治疗腹泻的可能机制。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂 香术茯苓颗粒购自合肥七星医药科技有限公司（批号：130121），每袋10 g，每克含

1.6 g生药，临用前用蒸馏水配制成所需浓度；盐酸洛哌丁胺胶囊购自西安杨森制药有限公司（批号：120312291）；肠炎宁片购自江西天施康弋阳制药有限公司（批号：1211204）；消炎痛片购自临汾奇林药业有限公司（批号：130201）；大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌均由安徽医科大学基础医学院微生物教研室提供。

1.2 实验动物昆明种小鼠，雌性120只，雄性60只（热板法均为雌性），由安徽省实验动物中心提供。实验室饲养温度：20～24℃。

1.3 仪器RB-200智能热板仪购自成都泰盟科技有限公司。

1.4 方法

1.4.1 小鼠热板舔足反应实验［2-3］实验前将雌性小鼠置于55℃恒温水浴金属板上，以小鼠舔右后足为疼痛反应指标，记录小鼠舔足反应潜伏期为基础痛阈（剔除基础痛阈＜5 s，＞30 s的小鼠），将筛选合格的60只小鼠随机分为6组，即模型组，香术茯苓颗粒小、中、大3个剂量组（1.5、3、6 g／kg）、消炎痛组（2.5 mg／kg）、肠炎宁片组（0.42 g／kg），每组10只。模型组灌胃蒸馏水，其他组给予相应药物灌胃，每天1次，共3 d。各组小鼠于最后一次给药1 h后，按同法测定小鼠舔足反应潜伏期。

1.4.2 小鼠扭体反应实验［4］取60只小鼠，雌雄各半，随机分为6组，即模型组，香术茯苓颗粒小、中、大3个剂量组（1.5、3、6 g／kg）、消炎痛组（2.5 mg／kg）、肠炎宁片组（0.42 g／kg），每组10只。模型组灌胃蒸馏水，其他组给予相应药物灌胃，每天1次，共3 d。最后一次灌胃1 h后实验小鼠腹腔注射0.8%冰醋酸0.1 ml／10 g，记录15 min内每只小鼠扭体次数。

1.4.3 血清药理学实验［5-6］取小鼠60只，体重18～22 g，随机分为5组：对照组，香术茯苓颗粒小、中、大3个剂量组（1.5、3、6 g／kg）以及阳性药组（肠炎宁片0.42 g／kg），每组12只，雌雄各半。对照组灌胃蒸馏水，其他组给予相应药物灌胃，给药3 d，每天1次，最后一次给药后1 h，各小鼠眼眶取血并分

离血清。每组4只小鼠的血清混合，即一组3份混合血清，对照组、香术茯苓颗粒小、中、大剂量组、阳性药组共计15份混合血清备用。用新华1号定性滤纸制成无菌的直径为6 mm的小圆片分装于无菌瓶内，将生理盐水和各份混合血清分别加入装有纸片的无菌瓶内，制备空白纸片组、对照血清纸片组、香术茯苓颗粒小、中、大剂量血清纸片组、肠炎宁片血清纸片组。将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌3种菌株复活后，分别在LB琼脂固体培养基平板上培养16 h，用无菌的生理盐水洗取菌落并且将其浓度稀释到1.5×108cfu／ml，吸取5 μl均匀涂布与平板表面，待平板略干后，在标记位置上贴上制备好的各组纸片，37℃温箱培养24 h取出，测量抑菌圈直径。

1.4.4 体外抗菌实验［7-8］将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌接种普通固体的LB培养基平板表面，在37℃孵箱中倒置培养16 h后，用无菌的生理盐水洗取菌落并且将其浓度稀释到1×107cfu／ml，采用多点接种至不同浓度的药物平板上（药物浓度依次为160.0、80.0、40.0、20.0、10.0、5.0、2.5 mg／ml），接种量为104～105cfu／点，于37℃孵箱中倒置培养24 h观察结果，以完全无细菌生长的最低浓度作为药物对该菌的最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration，MBC），并记录MBC值。重复以上试验过程，再依次将未见细菌生长的各管培养液分别吸出0.1 ml，进行平板活菌计数，其中菌落数少于5个的平板所对应的最低药物浓度，即为该药的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC）。

1.5 统计学处理采用SPSS 11.0软件进行分析，实验结果以表示。多组间比较采用单因素方差分析，组间比较采用两两比较的LSD法检验。

2 结果

2.1 香术茯苓颗粒对小鼠热板舔足反应的影响

结果显示，香术茯苓颗粒3、6 g／kg给药3 d可明显延长小鼠疼痛潜伏期，对小鼠舔足反应有明显的抑制作用（F＝4.505，P＜0.01）。见表1。

2.2 香术茯苓颗粒对小鼠扭体反应的影响结果显示，香术茯苓颗粒3、6 g／kg给药3 d可减少冰醋酸引起的小鼠扭体数，对小鼠扭体反应有明显的抑制作用（F＝3.174，P＜0.05）。见表2。

2.3 香术茯苓颗粒对血清药理学的影响香术茯苓颗粒6 g／kg给药3 d的血清可以增加大肠埃希菌抑菌圈直径（F＝3.582，P＜0.05），但对伤寒杆菌和金黄色葡萄球菌无作用，见表3。

表1 香术茯苓颗粒对小鼠热板舔足反应的影响（s，n＝10，）

表1 香术茯苓颗粒对小鼠热板舔足反应的影响（s，n＝10，）

与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

组别舔足反应潜伏期给药前给药后模型14.15±3.5713.70±5.85香术茯苓颗粒小剂量13.65±4.0816.00±5.16中剂量14.60±4.3521.00±7.10*大剂量14.05±4.1922.20±7.16**肠炎宁片15.70±5.2320.60±5.89*消炎痛15.85±3.5725.40±6.69**

表2 香术茯苓颗粒对小鼠扭体反应的影响（次，n＝10，）

表2 香术茯苓颗粒对小鼠扭体反应的影响（次，n＝10，）

与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

组别15 min 内扭体次数模型26.50±8.58香术茯苓颗粒小剂量23.50±6.92中剂量19.10±6.85*大剂量17.80±5.57**肠炎宁片20.40±6.50*消炎痛16.50±4.85**

表3 香术茯苓颗粒对细菌抑菌圈的影响（mm，n＝3，）

表3 香术茯苓颗粒对细菌抑菌圈的影响（mm，n＝3，）

与对照血清纸片组比较：*P＜0.05

组别抑菌圈直径大肠埃希菌金黄色葡萄球菌伤寒杆菌空白纸片0.00±0.000.00±0.000.00±0.00对照血清纸片8.69±0.760.00±0.000.00±0.00香术茯苓颗粒小剂量血清纸片9.18±1.160.00±0.000.00±0.00中剂量血清纸片9.78±0.820.00±0.000.00±0.00大剂量血清纸片11.51±0.56*0.00±0.000.00±0.00肠炎宁片血清纸片11.13±1.83*0.00±0.000.00±0.00

2.4 香术茯苓颗粒的体外抗菌作用香术茯苓颗粒对大肠埃希菌的MIC值为20.0 mg／ml，MBC值为80.0 mg／ml；对伤寒杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC值均为160.0 mg／ml，未测出MBC值，见表4。

表4 香术茯苓颗粒体外MIC和MBC值（mg／ml，n＝3，）

表4 香术茯苓颗粒体外MIC和MBC值（mg／ml，n＝3，）

细菌名称MICMBC大肠埃希菌20.0±0.0080.0±0.00伤寒杆菌160.0±0.00未测出金黄色葡萄球菌160.0±0.00未测出

3 讨论

香术茯苓颗粒由藿香、苍术、薏苡仁、茯苓、车前子、泽泻、马齿苋、石榴皮、山楂、木香十味中药组成。方中藿香归脾、胃、肺经，具有芳香化浊、和中止呕之功效；苍术归脾、胃、肝经，具有燥湿健脾、祛风散寒之功效，两药共为君药。薏苡仁归脾、胃、肺经，具有利水渗湿、健脾止泻之功效；茯苓归心、肺、脾、肾经，具有渗湿利水，健脾和胃之功效；车前子归肝、肾、肺、小肠经，具有清热利尿、渗湿止泻之功效；泽泻归肾、膀胱经，具有利水渗湿之功效，以上四味共为臣药。马齿苋归肝、大肠经，具有清热解毒，凉血止痢之功效；石榴皮归大肠经，具有涩肠止泻之功效；山楂归脾、胃、肝经，具消积化滞、收敛止痢之功效；木香归脾、胃、大肠、三焦、胆经，具有行气止痛，健脾消食之功效，此四药为佐使药。全方具有除湿运脾止泻的作用，对儿童腹泻疗效明显。

腹泻时有大量化学物质的产生，可刺激肠道痉挛，引起腹部疼痛。本试验采用小鼠热板法和扭体法，观察香术茯苓颗粒的镇痛作用。结果显示，香术茯苓颗粒3、6 g／kg给药3 d对小鼠热板黏足反应和扭体反应均有明显的抑制作用，镇痛作用显著。试验结果表明，香术茯苓颗粒在止泻的同时，对于腹痛有一定的缓解作用。

此外，采用血清药理学和体外抗菌实验，观察香术茯苓颗粒的抗菌作用。血清药理学实验显示，香术茯苓颗粒6 g／kg给药3 d血清可以增加大肠埃希菌抑菌圈直径，有明显的抑菌作用；但对伤寒杆菌和金黄色葡萄球菌无作用。体外抗菌实验显示，香术茯苓颗粒对大肠埃希菌的MIC值为20.0 mg／ml，MBC值为80.0 mg／ml；对伤寒杆菌和金黄色葡萄球菌的MIC值均为160.0 mg／ml，未测出MBC值。提示香术茯苓颗粒止泻机制可能与抗菌作用有关。

综上所述，香术茯苓颗粒具有一定的镇痛和抗菌作用，可能是其治疗腹泻的部分机制。

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Analgesic and antibacteria effects of Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules

Wang Yuling，Wu Wenning，Lin Jie，et al
（Dept of Pharmacology，Anhui Medical University，Hefei 230032）

ObjectiveTo study analgesic and antibacteria effects of Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules（ARTG）.MethodsHot-plate test and writhing test were used to study the analgesic effects of ARTG.Serum pharmacology and the antibacterial activity in vitro were used to study antibacteria effects of ARTG.ResultsARTG（3，6 g／kg）administrated three days could increase the pain threshold in mice，decrease twist times induced by acetic acid.The serum pharmacology showed the serum of three days by ARTG（6 g／kg）had significally bacteriostatic effects against Escherichia coli.，but no effect on Typhoid bacillus and Staphylococcus aureus.In vitro，ARTG had certain bacteriostatic and bactericidal effects against Escherichia coli.，but no bactericidal effects against Typhoid bacillus and Staphylococcus aureus.ConclusionARTG has analgesic and antibacteria effects in animal models，and they might be the part mechanism in treating diarrhea.

Ageratum rhizoma Atractylodis Tuckahoe granules；analgesic effect；antibacteria effect

R 965.2

A

1000-1492（2015）12-1770-03

时间：2015-11-18 10：12：34

http：／／www.cnki.net／KCMS／detail／34.1065.R.20151118.1012.028.html

2015-07-23接收

安徽高等学校省级自然科学研究项目（编号：KJ2013A146）

安徽医科大学基础医学院药理学教研室，合肥 230032

王宇翎，女，副教授，责任作者，E-mail：wangyuling1973＠126.com