影响糖化血红蛋白检测的因素

李桂英

近年来由于全球糖尿病患病率在逐年增高，每年约有1/3的糖尿病患者被漏诊，超过25%的新诊断糖尿病患者，已经患有糖尿病的视网膜病或微量白蛋白尿症，还有很多患者是因为并发症出现后才发现糖尿病的，许多糖尿病患者因不能得到及时诊断而延误对疾病的控制，糖尿病已成为世界性的公共卫生问题。因此早期诊断糖尿病及其高风险者，并对他们进行及时的干预和规范治疗，可减少糖尿病发患者数，延缓糖尿病并发症的发生和发展，已成为当务之急。

对糖化血红蛋白（HbA1c）检测来说，室内质控、室间质评都是取得稳定结果的前提、日常维护是保证仪器处于正常的必要措施；我们要认识到糖化血红蛋白（HbA1c）的检测项目、方法学的局限性，了解其影响因素，才能在日常检测中时刻把握住检测结果的质量。

在糖化血红蛋白（HbA1c）检测中有多种因素均可造成糖化血红蛋白（HbA1c）检测值的假性升高或降低，这不仅与实验室的检测方法有关，也与患者状况和标本处理方式等有关。因此，实验室应建立标准操作规程并要求操作人员严格遵守，提高工作人员的质量意识，加强质量控制，增强责任心，对工作人员进行培训指导，减少不必要的影响因素，把检测误差减少到最小。下面笔者将糖化血红蛋白（HbA1c）检测的影响因素总结了一下。

1标本处理方式的影响

1.1抗凝剂的种类 临床上以EDTA-K2作为测定糖化血红蛋白（HbA1c）的标准用管。肝素锂抗凝的全血使检测结果略有偏高。

1.2标本储存条件 若全血标本不能及时测定，应需将标本于 4℃～8℃保存并最好在7 d内进行测定。此时，糖化血红蛋白（HbA1c）的检测结果变异率<3%。在37℃ 条件下，未经任何处理的全血样本有效保存时间均<1 d。

2患者自身因素的影响

2.1贫血患者，影响红细胞寿命的疾病均可对糖化血红蛋白（HbA1c）的测定结果产生影响。如溶血性贫血、缺铁性贫血、大量失血等。溶血性贫血患者的标本因其红细胞寿命缩短使其糖化血红蛋白（HbA1c）的测定值会"降低"，这将取决于溶血的程度。镰刀红细胞症和脾切除后患者的标本因其红细胞生存时间较长其糖化血红蛋白（HbA1c）的测定值可能会"过高"。

2.2部分进展迅速的1型糖尿病患者， 糖化血红蛋白（HbA1c）的水平往往正常或轻度升高，因此，糖化血红蛋白（HbA1c）的测定值并不能完全反应急速增高的血糖水平。

2.3饮食和药物，如抗氧化剂（VC和VE）能抑制血红蛋白（Hb）的糖基化，可造成糖化血红蛋白（HbA1c）的测定结果偏低，服用阿司匹林可使糖化血红蛋白（HbA1c）的测定结果轻微升高等。

2.4某些血红蛋白亚型，如HbS、HbC、HbF和HbE等血红蛋白病的存在，会影响糖化血红蛋白（HbA1c）的检测结果。

2.5高原地区居民，由于慢性缺氧造成血红蛋白（Hb）量的改变，继而可导致糖化血红蛋白（HbA1c）的基础水平与平原地区存在差异。

2.6年龄和种族 因空腹血糖水平随年龄增长略有增高，所以糖化血红蛋白（HbA1c）的测定结果也与年龄呈正相关，有研究认为，30岁后，年龄每增长10岁， 糖化血红蛋白（HbA1c）的测定结果会增长0.1%；白种人的糖化血红蛋白（HbA1c）的测定结果较其他种族都低。

3方法学的影响

糖化血红蛋白（HbA1c）的检测方法主要有以下几种。

3.1电荷差异 如离子交换高效液相色谱法（HPLC）和电泳方法等。离子交换HPLC法（如D10）具有检测通量高、准确度高、重复性良好的优点，但易受血红蛋白变异体（HbG，HbH，Hb Wayne）的影响 ，对这些异常血红蛋白的确定需要使用另外的检测方法。而亲和层析法特异性强，不受异常血红蛋白的干扰。但亲和层析的测定结果偏低，尤其当 HbF>20%时，可导致HbA1c值下降1%，甚至更多，可能与HbF的糖发化速率较HbA更慢有关。

3.2结构差异 如亲和层析色谱法、免疫化学方法以及酶法等。酶法反应灵敏、特异，可使用全自动生化仪来检测，不需昂贵的仪器。其与常规离子交换HPLC法和免疫法有很好的相关性。但酶法虽有较好的重复性和准确度，其在标本处理上却相当繁琐，要吸取下层红细胞进行溶血处理，手工操作既不能批量进行，又相当缓慢；溶血液中高浓度的血红蛋白对生化仪的沾染不易被清除，易造成对后续其它项目检测的干扰。仪器生产商不建议在生化仪上进行糖化血红蛋白（HbA1c）的检测。免疫比浊法适用于自动生化分析仪糖化血红蛋白（HbA1c）的批量检测，但糖化血红蛋白（HbA1c）的检测结果易受高浓度葡萄糖、甘油三酯和胆红素的干扰，以及变异血红蛋白的影响。

3.3 POCT 如亲和层析或免疫比浊等方法。目前，离子交换高效液相色谱法（HPLC）法已被美国国家糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）推荐为参考方法。美国临床化学协会、GHb标准化分会和IFCC HbA1C标准化工作组建议，以糖尿病控制与并发症试验（diabetes control and complications trial，DCCT）研究中所"指定的方法"--HPLC方法作为糖化血红蛋白（HbA1c）检测的金标准。

采用ADA 推荐的以DCCT研究中采用的高效液相色谱法（HPLC）为检测糖化血红蛋白（HbA1c）测定的金标准，高效液相色谱法（HPLC）一直以来其良好的准确性和稳定性在临床上得到广泛的认可和应用，减少了各实验室之间的结果差异，其糖化血红蛋白（HbA1c）测定的结果在全球范围内也具有可比性，这更有助于糖尿病诊治的国际交流与合作。

糖化血红蛋白（HbA1c）的检测由于不同实验室采用不同的方法，因检测原理的不同以及各种仪器的分离能力高低的不同，导致检查结果差异较大。因此，开展糖化血红蛋白（HbA1c）检测的标准化工作极为重要，这将直接影响到糖化血红蛋白（HbA1c）评估患者平均血糖浓度的准确性。2011年10月由国家卫生部临检中心发布的《糖化血红蛋白实验室检测指南》中使实验室检测规范化有"法"可依，这将对提高糖化血红蛋白（HbA1c）测定的质量有一定的推动作用。

参考文献：

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编辑/张燕