水中高浓度亚硝酸盐氮的稀释及其质量控制探讨

陈爽　庞雨樵

摘要：目的 了解高浓度水样，样品稀释对检测结果产生的影响情况。方法 以水中高浓度亚硝酸盐氮能力验证考核样为例，水样经不同倍数稀释后进行检测分析。结果 样品经50倍与100倍稀释后测得结果相对偏差仅为0.5%，经75倍稀释后测得结果与50倍稀释相比，相对偏差达到6%。采用环境标样和加标回收两种质控手段进行质控，回收率在98%～102%。结论 对于浓度高的样品，稀释倍数对检测结果有较为明显的影响。在检测时，进行合适倍数稀释测定，可以得到准确可靠的结果。

关键词：亚硝酸盐氮；分光光度；质量控制

能力验证是评价实验室技术能力的重要依据之一，满意的能力验证结果可作为实验室持续保持其技术能力的证据[1]。通常能力验证和样品复测都是以具有参考值的盲样为判断标准进行确认的[2]，在做能力验证样品时，通常主要控制的是实验时间、实验温度、标准曲线、样品精密度及质量控制等方面的实验条件。然而，对于浓度高的样品，样品的高倍数稀释往往会对检测结果产生较大的影响，而这一方面的影响往往会被检测人员所忽视，导致测定结果准确度下降，可能不能达到满意甚至不合格。

本文以参加全国实验室认可委的水中亚硝酸盐氮能力考核项目为例，水样经不同倍数稀释，进行检测分析，对检测活动中盲样测试工作具有一定的指导和借鉴意义。

1 实验部分

1.1对象与方法 方法依据：GB/T 5750.5-2006重氮偶合分光光度法；样品：水样考核样品，编号为IERM T13-04-052a；水质：亚硝酸盐环境标样GSBZ50006-88。

1.2仪器和试剂 VIS-723N可见分光光度计；水中亚硝酸盐氮溶液标准物质GBW（E）080223；对氨基苯磺酰胺（AR）；盐酸N-（1-萘）-乙二胺（AR）。

1.3操作步骤

1.3.1标准曲线的制备移取10.00ml100μg/ml亚硝酸盐氮标准溶液定容至100ml，从中吸取1.00ml，定容至100ml，得到标准使用液浓度为0.10μg/ml，分别吸取0.00、0.50、1.00、2.50、5.00、7.50、10.00、12.50ml标准使用液于50.0ml比色管中，加纯水至刻度。测定标准系列吸光度。

1.3.2样品预实验 按考核样的作业指导书，移取10.00ml水样定容至250ml，比色测定。扣除空白吸光度A=8.625，此吸光度值超出标准曲线上1.250μg所对应吸光值0.275，样品需要进行稀释。假设标准曲线为一条直线，将8.625带入曲线，计算得出，水样应稀释75倍。

1.3.3水样样品的测定 对水样进行75倍稀释：量取1.3.2水样6.67ml定容至500ml，测定。为验证水样经75倍稀释后结果的准确性，同时对水样进行50倍稀释，移取1.3.2水样10.00ml定容至500 ml，测定。

1.3.4质控样的测定

1.3.4.1环境标样的测定 按亚硝酸盐氮环境标样证书，移取10.00ml于250ml容量瓶，用纯水定容。环境标样的浓度标准值为0.0816mg/L。现移取环境标样50.0ml于250ml容量瓶，定容，制备成浓度为0.01632mg/L，即经5倍稀释的环境标样溶液。量取75.0ml于500ml容量瓶，定容，制备成浓度为0.01223mg/L，即经6.67倍稀释的环境标样溶液。分别测定吸光度。

1.3.4.2加标回收的测定 移取经5倍稀释的环境标样溶液和经50倍稀释水样各25.00ml于50.0ml比色管中，混匀后测定。移取经6.67倍稀释的环境标样溶液和经75倍稀释水样各25.00ml于50.0ml比色管中，混匀后测定。

2 结果

2.1标准曲线 亚硝酸盐氮准系列测定数据：空白吸光度为0.003，0.003，空白吸光度值很低，接近于0.000。a=0.0004，b=0.2208，r=0.9998，见表1。

2.2样品的稀释与测定 经计算，样品经50倍和75倍稀释后检测结果所得浓度值的相对偏差为6%，见表2。

2.3质控样品的测定

2.3.1环境标样样品的测定 环境标样的检测值都在理论值的标准偏差范围之内，见表3。

2.3.2加标回收的测定 样品制备液经50倍与75倍稀释后水样的加标回收率都很不错，见表4。

3 讨论

3.1样品经50倍和75倍稀释后检测结果所得浓度值差别较大。而从表3和表4可以看出，环境标样和加标回收结果都在允许范围之内。从质控方面不能体现出样品经50倍与75倍稀释测定结果哪个更为准确。因此，为了能够确定样品的准确值，将样品稀释100倍后进行测定，水样经100倍稀释后浓度值与50倍稀释后浓度值很接近，相对偏差为0.5%，见表5。

3.2质控样品 控制样品中被测组分的含量应与被测样品中被测组分的含量相近[3]。本文以水样经50倍与75倍稀释后水样浓度为参照水平，质控样品浓度与稀释后水样浓度尽量相一致。

3.2.1环境标准样品 根据证书，GSBZ50006-88的理论值为81.6μg/L，即0.0816mg/L。据计算，环标稀释5倍的理论值为0.01632mg/L，与样品稀释50倍值（0.0144mg/L）相近。环标稀释6.67倍的理论值为0.01223mg/L，与样品稀释75倍值（0.0101mg/L）相近。因此，环标选则稀释倍数为5倍、6.67倍。

3.2.2加标回收 添加物浓度水平应接近分析物浓度，加入的添加物总量不应显著改变样品基体[4]。加环境标样的浓度采用分别与水样经50倍稀释后和样经75倍稀释后的浓度相近的浓度，加入体积与水样稀释后溶液体积相等。既考虑基体效应对样品浓度的干扰影响，又没有体积的变化，还体现了实验各个因素对同等浓度亚硝酸盐氮的影响。

4 结论

4.1IERMT13-04-052a最终结果报样品经50倍和100倍稀释后测得的结果的平均值0.718mg/L（以N计），换算为以NO2-计为2.36mg/L，样品中位值为2.33mg/L，结果满意。

4.2采取好的质量控制方法和方式，能体现出检测结果是否有系统误差，得出比较合理可靠的测定结果。本文采用环境标样样品和加标回收两种质控手段进行质控，如实验室没有环境标样用来质控，也可以用标准溶液，配制与样品值相近的浓度来做质控，也能得到很好的质控效果。

4.3在做能力验证样时，当水样样品浓度过高，需要稀释倍数较大时，进行不同倍数的稀释、测定，可以得到更可靠的结果。

4.4从理论上来说，样品稀释不同的倍数，所得最终结果应一致，但实际操作时，发现对于浓度高的样品，稀释倍数对检测结果有较为明显的影响，产生这种现象的原因，可能是由于不同倍数稀释，对应在标准曲线上的位置不同造成的。

参考文献：

[1]吴月仙.从实验室质量控制谈如何提高能力比对结果的满意度[J].现代测定与实验室管理，2013，6：42.

[2]李赵相，魏国威，赵跃.浅谈实验室认可中甲醛盲样的测定[J].质量论坛，2013，10. [3]GB/T27404-2008，实验室质量控制规范 食品理化检测[S].

[4]CNAS-CL10，检测和校准实验室能力认可准则在化学检测领域的应用说明[S].

编辑/成森