细胞凋亡抑制蛋白Livin和Survivin检测在胃癌诊断中的价值

杨少蓉，马国卫

(湖北省天门市第一人民医院普外科2区 431700)



·论 著·

细胞凋亡抑制蛋白Livin和Survivin检测在胃癌诊断中的价值

杨少蓉，马国卫

(湖北省天门市第一人民医院普外科2区 431700)

目的 探讨细胞凋亡抑制蛋白Livin和Survivin检测在胃癌诊断中的作用。方法 选择170例天门市第一人民医院手术或内镜病检标本作为研究对象，其中胃癌组织标本45例，萎缩性胃炎37例，浅表性胃炎29例，异型增生胃黏膜33例，26例正常胃部组织。比较各组组织中Livin、Survivin表达阳性率，并分析胃癌组织中Livin与Survivin表达的相关性。结果 胃癌组织Livin、Survivin阳性率显著高于其他组织，差异有统计学意义(P<0.05)，其中萎缩性胃炎、异型增生胃黏膜Livin阳性率显著高于正常组织，萎缩性胃炎、浅表性胃炎、异型增生胃黏膜Survivin阳性率显著高于正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。Livin阳性表达与组织分化程度和TNM分期有关(P<0.05)；Survivin阳性表达与组织浸润程度和TNM分期有关(P<0.05)。Livin阳性率为57.78%，Survivin阳性率为64.44%，二者均为阳性21例，二者表达无明显相关性(χ2=1.076,P>0.05)。结论 细胞凋亡抑制蛋白Livin和Survivin在胃癌组织中表达显著上升，两种蛋白因子检测可作为胃癌辅助诊断的指标之一。

细胞凋亡抑制蛋白； 胃癌； 诊断； Livin； Survivin

胃癌是常见消化道恶性肿瘤，调查显示，全球每年新发胃癌患者约50万人，其中我国占40%以上[1]。由于我国胃癌发病率高，且胃癌早期症状不明显，检出率较低，大多数患者一旦确诊即为中、晚期。现代细胞生物学和分子生物学证实，肿瘤的形成与细胞凋亡调控异常有关[2]。目前研究较多的Bax、Bcl-2等均为作用于上游级联反应的蛋白，而关于直接作用于级联反应的蛋白目前报道较少。Livin是最新发现的一种细胞凋亡抑制蛋白，在肿瘤组织中呈高表达，它可能是通过刺激Caspas蛋白来发挥抗凋亡作用。Survivin是已知作用较强的细胞凋亡抑制蛋白，与肿瘤的发生和发展有密切关系。本研究通过检测细胞凋亡抑制蛋白Caspas和Survivin在胃癌组织中的表达，探讨二者在胃癌诊断中的作用，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择170例来自2012年3月至2014年3月在本院手术或内镜病检标本，男97例，女73例，年龄22～67岁，平均(45.6±13.2)岁。其中胃癌组织标本45例，萎缩性胃炎37例，浅表性胃炎29例，异型增生胃黏膜33例，26例正常胃部组织。胃癌患者在病理检查前均未进行放射或化学治疗。

1.2 方法

1.2.1 试剂与仪器 采用免疫组化SP法对Livin、Survivin进行检测，Livin多克隆抗体购至美国Imgenex公司，鼠抗人Survivin单克隆抗体购至北京中山生物技术有限公司，免疫组化试剂盒由上海泽迈生物技术有限公司提供。

1.2.2 实验步骤[3](1)烤片，68 ℃ 20 min。(2)常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水。(3)灭活内源性过氧化物酶：3%H2O237 ℃孵育10 min，磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3×5 min。(4)抗原修复:在枸橼酸缓冲液(pH6.0)中煮沸(95 ℃，15～20 min)，自然冷却20 min 以上，再用冷水冲洗，加快冷却至室温，PBS冲洗3×5 min。(5)正常羊血清工作液封闭，37 ℃10 min。(6)滴加一抗4 ℃ 冰箱孵育过夜，PBS冲洗3×5 min(用PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照)。(7)滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37 ℃孵育30 min,PBS冲洗3×5 min。(8)DAB/H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。

1.3 判定标准[4]按照染色强度进行评分，0分无染色；1分轻微染色；2分中度染色；3分强染色。按照染色面积评分，0分无染色；1分细胞染色面积少于25%；2分细胞染色面积25%～50%；3分细胞染色面积大于50%。综合两种标准结果，采用两种判定结果的乘积，参考标准：0分为-；1～2分为+；3～4分为+ +；5～6分为+ + +。按照半定量判定，≥++作为阳性结果；-、+作为阴性结果。

1.4 统计学处理 所有研究数据均采用SPSS17.0统计学软件进行统计分析，组间率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组Livin、Survivin表达情况 见表1。胃癌组织Livin、Survivin阳性率显著高于其他组织，组间相比差异有统计学意义(P<0.05)；其中萎缩性胃炎、异型增生胃黏膜Livin阳性率显著高于正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)，萎缩性胃炎、浅表性胃炎、异型增生胃黏膜Survivin阳性率显著高于正常组织，差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 各组Livin、Survivin表达情况[n(%)]

注：与正常组织相比，*P<0.05；与萎缩性胃炎相比，△P<0.05；与浅表性胃炎相比，▲P<0.05；与异型增生胃黏膜相比，#P<0.05。

2.2 胃癌组织Livin、Survivin表达与临床指标的关系 见表2。Livin阳性表达与组织分化程度和TNM分期有关(P<0.05)，组织分化程度越高，Livin阳性表达率越高，Ⅲ～Ⅳ期胃癌Livin阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期。Survivin阳性表达与组织浸润程度和TNM分期有关(P<0.05)，T1～T2期胃癌Survivin阳性表达率显著高于T3～T4期，Ⅲ～Ⅳ期胃癌Survivin阳性表达率显著高于Ⅰ～Ⅱ期。

表2 胃癌组织Livin、Survivin表达与临床指标的关系[n(%)]

2.3 胃癌组织Livin与Survivin表达相关性分析 见表3。在胃癌检测样本中，Livin阳性率为57.78%，Survivin阳性率为64.44%，二者均为阳性为21例，二者表达无明显相关性(χ2=1.076,P>0.05)。

表3 胃癌组织Livin与Survivin表达相关性分析

3 讨 论

Survivin蛋白因子是20世纪末发现的细胞凋亡抑制因子，它主要在肿瘤组织和胚胎中表达。肿瘤细胞存在分化、增殖和凋亡异常，Survivin在肿瘤细胞呈高表达[5]。吕元景等[6]研究发现，Survivin在肿瘤组织中表达是一个渐进的过程，随着细胞的恶化，Survivin蛋白逐渐上升。Livin最初从人类胚胎中获得，属于IAP家族成员。研究发现，Livin抑制细胞凋亡的主要途径是通过拮抗死亡受体[7]。陈力等[8]研究发现，Livin抑制凋亡的作用要强于Survivin。因此也有学者认为，Livin是迄今为止发现作用最强的凋亡抑制因子。由于这两种因子主要存在于胚胎组织中，在其他组织表达明显下调甚至不表达；特别是两种蛋白均在肿瘤组织中高表达，因此有研究者提出，两种蛋白免疫组化检测可以作为肿瘤诊断的指标之一。黄玉钿等[9]研究发现，Livin与Survivin在乳腺癌组织中阳性表达率分别为57.8%和64.0%，而正常组织无表达，因此该研究认为凋亡抑制因子Livin和Survivin可能在乳腺癌的发生和发展中起重要作用。但是关于胃癌组织中两种因子的表达目前还少见相关报道，因此本研究通过分析胃癌组织中Livin和Survivin的阳性表达率，以探讨其在胃癌诊断中的作用。

本研究胃癌组织中Livin和Survivin表达阳性率显著高于其他组织，萎缩性胃炎、浅表性胃炎、异型增生胃黏膜Survivin阳性率高于正常组织。由于Survivin的表达是一个渐进过程，因此推测非肿瘤性胃部疾病，如胃炎、增生性胃黏膜等可能是胃癌的癌前病变，这与王华和王志红[10]报道的结论一致。因此在临床中遇到诸如上述胃部疾病的患者应及时治疗，避免疾病进一步恶化导致肿瘤发生。Crnkovic-Mertens等[11]报道称Livin与肿瘤的预后呈正相关，本研究也发现Livin阳性表达与组织分化程度和TNM分期有关；Survivin阳性表达与组织浸润程度和TNM分期有关，这提示可以将Livin和Survivin检测作为患者疗效、预后的评估指标之一，这也是接下来研究的主要方向。

综上所述，胃癌组织中Livin和Survivin表达显著上升，因此通过两种蛋白检测可以对胃癌进行早期诊断，同时也为进一步研发胃癌治疗药物提供了新的作用靶点。

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[6]吕元景，苗素生，刘伟松，等．重组Survivin腺病毒的构建与鉴定[J]．中华肿瘤杂志，2011，33(1)：13-17．

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[9]黄玉钿，谭云山，曾海英．乳腺癌组织Livin和PTEN表达与肿瘤血管生成的相关性[J]．中国免疫学杂志，2012，28(10)：886-889．

[10]王华，王志红．Survivin表达在早期胃癌及癌前组织中的研究和临床意义[J]．中华全科医学，2011，9(6)：957-959．

[11]Crnkovic-Mertens I,Bulkescher J,Mensger C,et al.Isolation of peptides blocking the function of anti-apoptotic Livin protein[J].Cell Mol Life Sci,2010,67(11):1895-1905.

Diagnosis value of apoptosis inhibition protein Livin and Survivin in gastric cancer

YANGShao-rong，MAGuo-wei

(SecondDepartmentofGeneralSurgery,TianmenFirstPeople′sHospital,Tianmen,Hubei431700,China)

Objective To explore the diagnosis value of apoptosis inhibition protein Livin and Survivin in gastric cancer.Methods Totally 170 cases of operation or endoscopic biopsy specimens in our hospital were selected as the object,including 45 cases of gastric cancer tissues,37 cases of atrophic gastritis,29 cases of superficial gastritis,33 cases of gastric mucosa dysplasia,26 cases of normal gastric tissue.Compared the expression positive rate of Livin,Survivin of each group,and analysised the relationship between the Livin and Survivin in gastric cancer.Results The positive rate of Livin and Survivin of gastric carcinoma tissues was significantly higher than other groups (P<0.05);wherein the atrophic gastritis,gastric mucosa dysplasia,Livin positive rate was significantly higher than that of normal tissue,atrophic gastritis,superficial gastritis with dysplasia of gastric mucosa,positive rate of Survivin was significantly higher than that in normal tissue (P<0.05).The positive expression of Livin related with tissue differentiation,TNM stage (P<0.05);the positive expression of Survivin related with the degree of tissue infiltration,TNM stage (P<0.05).The positive rate of Livin was 57.78%,the positive rate of Survivin was 64.44%,both were positive in 21 cases,the expression had no obvious correlation (χ2=1.076,P<0.05).Conclusion Apoptosis inhibition protein Livin and Survivin expression in gastric cancer tissue increased significantly,two kinds of genetic testing can be used as one of indexes of gastric cancer screening.

apoptosis inhibition of protein; gastric neoplasm; diagnosis; Livin; Survivin

杨少蓉，女，本科，主管护师，主要从事普外科临床护理工作。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.03.027

A

1672-9455(2015)03-0355-03

2014-08-28

2014-10-05)