新生儿病房分离金黄色葡萄球菌耐药性及耐消毒剂基因检测

雷新云，金正江

（湖北省妇幼保健院，湖北 武汉 430070）

金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，SA）分布广泛，毒力强，易引起新生儿各种感染。一旦发生感染，由于新生儿自身原因，多种抗菌药物使用受限，除β-内酰胺类，可选用药物不多。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcusaureus，MRSA）对β-内酰胺类、红霉素类等多种抗菌药物耐药，该菌的出现给临床治疗带来极大困难。因此，预防感染尤为重要，消毒剂的使用是有效的措施之一。近年来，不断有文献报道MRSA携带耐消毒剂基因，对多种消毒剂产生抗性，携带率各地区各有不同［1-2］。为了解本院新生儿病房SA的耐药性及耐消毒剂的情况，本研究对新生儿病房送检标本分离的SA耐药谱进行了分析，并对其是否携带耐消毒剂基因qacA/B进行了检测，现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 菌株来源 2013年1—12月新生儿科住院新生儿送检标本分离的225株SA，标本类型包括:痰、尿、胃液、粪便等，剔除同一患者重复菌株。

1.2 细菌鉴定及药敏试验 细菌鉴定及药敏试验采用法国生物梅里埃公司VITEK2 Compact全自动鉴定系统。试剂采用系统配套的GP卡和GP67卡。质控菌株为SA ATCC29213，频率为每周一次。

1.3qacA/B基因检测 采用聚合酶链反应（PCR）方法对耐消毒剂基因qacA/B进行检测，特异性引物 为 5’-GCAGAAAGTGCAGAGTTCG-3’和 5’-CCAGTCCAATCATGCCTG-3’，产物长度为361 bp，PCR体系参数设置为:25μL PCR反应体系包括10×PCR缓冲液2.5μL，DNTP2.0μL（2.5 mmol/L），引物 各 2.5 μL （10μmol/L），无 菌 去 离 子 水12.7μL，DNA模板2.5μL，0.3μL TaqDNA聚合酶。96℃预变性3 min，然后94℃20 s，53℃20 s，72℃20 s，循环25个周期，最后72℃5 min［3］。

2 结果

2.1 标本来源 225株SA标本来源以呼吸道分泌物为主，占72.44%；20株 MRSA中，呼吸道分泌物占65.00%。见表1。

表1 225株SA标本来源分布Table 1 Specimen distribution of 225 S.aureusisolates

2.2 药敏试验 225株SA中，MRSA20株（占8.89%），甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（methicillin-sensitiveStaphylococcusaureus，MSSA）205株（占91.11%）。耐药率见表2。

表2 225株SA对常用抗菌药物的耐药率（%）Table 2 Resistant rates of 225 S.aureus isolates to commonly used antimicrobial agents（%）

2.3qacA/B基因检测 225株SA中21株携带qacA/B基因，阳性率为9.33%。其中MRSA3株，阳性率为15.00%（3/20）；MSSA18株，阳性率为8.78%（18/205），两者比较差异有统计学意义（χ2＝148.84，P＜0.01）。PCR电泳图见图1。

图1 qacA/B基因检测电泳图Figure 1 Electrophoresis map of PCR product of qacA/B gene

3 讨论

革兰阳性球菌在新生儿细菌感染中占重要地位，其细菌谱分布中SA居首位［4］。SA是一种需氧或兼性厌氧革兰阳性球菌，可存在于外界环境及人体口腔、鼻咽等部位，是人类化脓性感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓性感染，也可引起肺炎、假膜性肠炎、心包炎等，甚至可引起败血症、脓毒症等全身感染。本研究中，从标本来源分析，呼吸道分泌物占72.44%，可见在SA引起的新生儿感染中，呼吸道感染占主要地位；其次为胃肠道感染，粪便标本占1.78%。在局部感染中，脐部、眼及其他部位的化脓性分泌物共占25.33%。新生儿抵抗力差，如消毒隔离措施不到位，护理不当，极易引起脐部等部位的化脓性感染，一旦感染需及时合理选用抗菌药物，采取有效护理措施，防止感染症状向全身蔓延。

本研究中，MRSA检出率为8.89%，低于相关文献［5-6］报道，可能存在地区及人群之间的差异。MRSA的耐药性与青霉素结合蛋白2a（penicillin-binding protein 2a，PBP2a）有关［7］。PBP2a由 mecA 基因编码，具有高度保守性，mecA基因检测阳性即为MRSA。但近年来有文献［8］报道，MRSA菌株中并非均携带mecA基因，说明可能还存在其他耐药机制，值得关注。本研究中，SA对红霉素、克林霉素、四环素、庆大霉素、环丙沙星及复方磺胺甲口恶唑的耐药率高低不等，但MRSA的耐药率普遍高于MSSA。左氧氟沙星、莫西沙星、替加环素、万古霉素、利奈唑胺及呋喃妥因对所有SA均显示出良好的抗菌活性，敏感率均为100%。因此，在MRSA感染危重患儿中，万古霉素可作为经验治疗的首选。但随着万古霉素的应用越来越多，近年来不断有万古霉素中介SA和异质性万古霉素耐药SA的报道，本研究中虽尚未发现，但也应引起警惕，注意合理用药，严防该类菌株的出现。

SA由于其毒力强，感染广泛及耐药严重而一直受到人们的关注。近年来，由于各种消毒剂在临床被广泛使用，SA对消毒剂的抗性及耐消毒剂机制的研究也日益受到各界的重视。SA对消毒剂的抗性主要与外排泵系统有关，由质粒或染色体上的相关蛋白基因编码，种类繁多，作用机制均为借助质子泵的动力将胞内抗菌物质排出胞外，使其达不到有效抗菌浓度而产生耐药。季胺类消毒剂基因（qac）在SA耐消毒剂机制中发挥重要作用，qac基因由于在亲脂性消毒剂外排机制中发挥重要作用而得名，编码蛋白型的外排系统。目前qac基因家族已发现有10余种，其中qacA/B基因存在于葡萄球菌的质粒中。qacA基因与qacB基因虽然作用底物不同，但结构十分相似，相差仅为几个核苷酸，普通PCR方法无法区分［9］。因此，本研究中参考有关文献设计通用引物对其进行检测。结果显示，225株SA中检出qacA/B基因21株，阳性率为9.33%，其中MRSA菌株3株，阳性率为15.00%，MSSA菌株18株，阳性率为8.78%，结果与有关报道［10］相似。研究表明，MRSA菌株的耐消毒剂机制可能与其耐药机制协同发挥作用，本研究中是否存在该现象有待进一步研究。

总之，新生儿SA感染中，在关注耐药性的同时应关注其对消毒剂的抗性。在医院感染控制中应以预防为主，加强消毒管理，提高手卫生依从性，加强新生儿基础疾病护理，合理使用抗菌药物和消毒剂，切实有效做好预防感染的发生或流行，保障新生儿生命健康安全。

［1］姜爱英，应俊，管瑜，等.临床分离的金黄色葡萄球菌mecA和qacA/B基因检测［J］.中华医院感染学杂志，2010，20（9）:1212-1215.

［2］陈迎晓，刘俊，李小四，等.金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因及抗生素耐药相关基因检测［J］.中国微生态学杂志，2012，24（12）:1103-1105.

［3］Noguchi N，Suwa J，Narui K，et al.Susceptibilities to antiseptic agents and distribution of antiseptic-resistance genes qacA/B and smr of methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolated in Asia during 1998 and 1999［J］.J Med Microbiol，2005，54（Pt6）:557-565.

［4］王维鹏，金正江.新生儿葡萄球菌属感染及防治对策［J］.中华医院感染学杂志，2006，16（11）:1250-1251.

［5］吴旭琴，冯薇，乔美珍，等.2007—2010年金黄色葡萄球菌临床分离与耐药变迁［J］.中国感染控制杂志，2012，11（1）:55-58.

［6］贾云霞，刘兴莉，彭旭华，等.儿科重症监护室病原菌分布及其耐药性［J］.中国感染控制杂志，2012，11（3）:211-213，216.

［7］王辉，陈宏斌.甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌的实验室诊断［J］.中国感染与化疗杂志，2011，11（6）:420-422.

［8］李晓芳，范昕建，过孝静.金黄色葡萄球菌耐药机制的研究［J］.四川大学学报（医学版），2006，37（3）:365-368.

［9］卢中一，陈勇，陈伟，等.金黄色葡萄球菌对消毒剂的抗性及其流行病学研究进展［J］.中国感染控制杂志，2014，13（7）:442-446.

［10］周庭权，黄文祥，贾蓓，等.金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因qacA的流行病学研究［J］，中国感染与化疗杂志，2009，9（4）:283-285.