头孢喹肟与马立克病疫苗联用的试验观察

许秋阳，束陈宇，王义敏，张小荣，吴艳涛

（扬州大学农业部禽用生物制剂创制重点实验室，江苏 扬州225009）

鸡白痢沙门菌是导致雏鸡早期死亡的主要病原菌之一，可通过垂直传播和水平传播感染鸡群，造成严重的经济损失。研究资料表明，头孢菌素类抗生素可有效防治雏鸡的早期死亡[1]。20世纪90年代，国内外就已报道在马立克病疫苗中添加头孢噻呋不会影响疫苗的效价[2-4]。头孢喹肟[5-6]（Cefquinome）是第4代动物专用头孢菌素类抗生素，与头孢噻呋相比具有抗菌活性强、抗菌谱广、β-内酰胺酶稳定、吸收快和体内残留小等优点，已得到越来越广泛的应用。本试验将评价头孢喹肟加入到马立克病疫苗中对预防鸡白痢沙门菌感染的效果，以及对马立克病疫苗效价的影响，为头孢喹肟和马立克病疫苗在1日龄雏鸡联用的可行性提供依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料 头孢喹肟，由扬州大学兽医学院药理组提供；鸡白痢沙门菌标准菌株C79-13和马立克病疫苗（CVI988/Rispens株）由扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室保存；M199细胞培养基和小牛血清，购自Hyclone公司；营养肉汤培养基和S.S.琼脂，购自广东环凯微生物科技有限公司。

1.2 头孢喹肟对马立克病疫苗效价的影响 向9份稀释好的马立克病疫苗（3 500 PFU/0.2mL）中加入头孢喹肟至不同终浓度（0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mg/mL），混匀后置于25℃，在30 min、45min和60min 3个时间点对各组混合液进行取样，按照文献[9]，采用病毒蚀斑计数法进行疫苗效价测定。每个头孢喹肟浓度接种5个生长于35mm培养皿的鸡胚成纤维细胞，每个培养皿接种2μL。37℃吸附1 h后，每皿加入维持液3 mL。将培养皿置于5%CO2培养箱，37℃培养5 d后进行病毒蚀斑计数。

1.3 头孢喹肟对人工诱发鸡白痢的预防效果 将鸡白痢沙门菌标准菌株C79-13接种于营养肉汤中，于37℃培养12 h，4℃保存。以1mL/羽的量感染鸡，从病死鸡中分离并鉴定C79-13，重复两次，增强细菌致病力。将菌液稀释至108CFU/mL，测定LD50，确定接种剂量为0.3mL。

将120只1日龄雏鸡随机平均分为5组。设头孢喹肟高剂量组（1mg/mL）、中剂量组（0.5mg/mL）、低剂量组（0.25mg/mL）、阳性对照组和阴性对照组。3个给药组于1日龄注射相应浓度的头孢喹肟-马立克病疫苗混合液0.2 mL，阳性对照组和阴性对照组注射生理盐水0.2mL。免疫2 h后，3个给药组及阳性对照组按照预试验确定的剂量接种鸡白痢沙门菌标准菌株C79-13。鸡群继续饲养10 d，观察各组鸡的临床症状及死亡情况。临床症状观察主要包括精神状态、食欲和粪便等。对死亡鸡进行剖检，观察病理变化，并进行细菌分离。

1.4 数据处理与分析 应用SPSS 19.0软件进行数据显著性检验，各组间病毒蚀斑变化差异采用t检验；发病率和死亡率采用X2检验。

2 结果与分析

2.1 头孢喹肟对病毒蚀斑的影响 头孢喹肟添加到稀释好的马立克病疫苗中，对疫苗效价的影响结果见图1。利用统计软件分析，结果显示，在稀释好的疫苗病毒液中添加0.5mg/mL头孢喹肟，室温放置30min和45min对疫苗效价没有显著影响，但作用60min后疫苗效价与未添加药物组相比有所下降，且差异显著（P＜0.05）。随着添加药物浓度的提高，疫苗效价的下降程度越来越严重，且随着作用时间的延长，这种负面影响也越趋明显，当添加药物浓度达到4.0 mg/mL时，30 min之内即可导致疫苗病毒几乎完全失活。

图1 头孢喹肟对马立克病疫苗效价的影响

2.2 头孢喹肟对鸡白痢的预防效果 阳性对照组在感染后的第1天出现临床症状，第3天开始大量死亡，第7天后逐渐停止。低剂量组的发病时间与阳性对照组同步，但发病率和死亡率较低。高剂量组和中剂量组的发病和死亡出现的都较晚，与低剂量组相比发病率和死亡率均存在极显著差异（P＜0.01），但高剂量组与中剂量组之间不存在统计学差异。结果见表1。结合头孢喹肟对疫苗效价影响试验的结果，0.5mg/mL为头孢喹肟的最适添加量，在不降低疫苗效价的同时能有效的预防鸡白痢。高于该剂量时，虽然能有效预防鸡白痢，但疫苗效价降低明显；低于该剂量时，对疫苗效价虽无影响，但不能预防鸡白痢。

表1 头孢喹肟对人工诱发鸡白痢的预防效果

3 讨论

头孢喹肟作为第4代动物专用头孢菌素类抗生素，已广泛应用于养殖业[8]。Deshpande等比较了头孢喹肟和头孢噻呋对临床分离的埃希大肠杆菌、克雷伯氏杆菌的抗菌活性。结果显示，头孢喹肟比头孢噻呋具有更强的抗菌活性[6]。鸡白痢是一种常见传染病，发病率和死亡率都较高，给养鸡业造成巨大损失。目前，头孢菌素类抗生素是预防和治疗该病主要药物。为了控制成本、减少应激，养殖者通常将头孢菌素与马立克病疫苗联合使用。有研究表明，在马立克病疫苗中适量添加头孢噻呋不会造成疫苗效价的下降，但超过了推荐使用量后，则会导致疫苗效价的显著降低[9]。本试验结果显示，按照0.5mg/mL（0.1mg/羽），存放时限不超过45min的条件使用，头孢喹肟不会降低疫苗的效价，而且能有效预防鸡白痢。这与刘颖、庄景新等对头孢噻呋与马立克病疫苗联用的研究结果相似；与王付民等对头孢噻呋预防鸡白痢的试验结果相比，相同剂量下头孢喹肟对鸡白痢的预防效果好于头孢噻呋。我们建议净化达标、安全措施完善的规模养殖场，尽量不要在马立克病疫苗中添加任何药物。对于条件有限的养殖者，头孢喹肟与马立克病疫苗联用显得更有意义。这不仅可以减少劳动量，而且能够有效地保证雏鸡的存活率，减少损失。

[1]王付民，胡功政.头孢噻呋对实验性感染鸡白痢沙门氏菌病的药效学研究[J].中国兽药杂志，2007（04）：46-48.

[2]程海兵，梁志勇，董文权.对1日龄雏鸡进行速解灵与液氮马立克疫苗混合注射[J].中国家禽，2006（09）：20-21.

[3] Eidson，C S，Kleven SH，Anderson D P.Effect of antibiotics on turkey herpesvirus vaccine[J].Poult Sci，1973，52（2）：755-760.

[4]吴长新，甘军纪，高以明.抗菌药对马立克氏病活疫苗毒性的作用[J].中国兽医学报，1999（03）：10-12.

[5]Murphy SP，Erwin M E，Jones RN.Cefquinome（HR111V）.In vitro evaluation of a broad-spectrum cephalosporin indicated for infections in animals[J].Diagn Microbiol Infect Dis，1994.20（1）：49-55.

[6]Deshpande L，Pfaller M A，Jones R N.In vitro activity of ceftiofur tested against clinical isolates of Escherichia coli and Klebsiella pneumoniae including extended spectrum beta-lactamase producing strains[J].Int JAntimicrob Agents，2000，15（4）：271-275.

[7] 中国兽药典委员会.中华人民共和国兽药典.三部[M].2010版.北京：中国农业出版社，2010.

[8] Tell，L L.Harrenstien S.Wetzlich，et al.Pharmacokinetics of ceftiofur sodium in exotic and domestic avian species[J].JVet Pharmacol Ther，1998.21（2）：85-91.

[9]张小荣，许秋阳，王义敏.超量添加头孢噻呋对马立克氏病疫苗的危害性评估[J].中国家禽，2012（24）：63-64.