添加不同量PAS-ⅢM对单采血小板质量的影响

侯亚平 沈莉 张金彩 张燕

添加不同量PAS-ⅢM对单采血小板质量的影响

侯亚平 沈莉 张金彩 张燕

目的 研究单采血小板添加不同浓度的PAS-ⅢM液后在保存期间对血小板功能的影响变化，探究更适合单采血小板保存的PAS-ⅢM液的浓度。方法 将40个治疗量的单采血小板分成4组，分别添加不同浓度PAS-ⅢM液的单采血小板，对各组在保存期的第1、3、5、7、10天分别进行pH值、HSR、凝血酶聚集率、CD62p阳性率的测定。结果 添加PAS-ⅢM液浓度为70%的单采血小板在单采血小板保存的第10天，pH值、HSR、凝血酶聚集率、CD62p阳性率等各项指标均优于添加PAS-ⅢM液浓度为90%、50%以及未添加PAS-ⅢM液的单采血小板。结论 添加PAS-ⅢM液浓度为70%的单采血小板有效的保存了血小板的功能，延长了单采血小板的保存期。

单采血小板;PAS-ⅢM;HSR;CD62p

通常单采血小板是用血浆作为悬浮介质保存的，保存时间为5 d左右，国外近年来研制了多种不同的血小板添加液，以延长血小板保存时间。不同的血小板保存液，不同的血浆浓度，对血小板的质量影响也不同。本实验是去除不等量的血浆，添加不等量的PAS-ⅢM单采血小板添加液，在22℃保存，以观察体外单采血小板的质量指标变化。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机抽取符合《献血者健康检查要求》的献血者捐献的单采血小板。

1.2 设备与试剂 MCS+血细胞分离机(美国血液技术公司)，血细胞计数仪(SYSMEX有限公司)，无菌导管接口机(日本制造)，血小板振荡仪(苏州)，FACS流式细胞仪(美国BD公司)，血小板凝聚仪(北京普利生集团)，血小板聚集诱导剂，PAS-ⅢM联袋(山东威高医用高分子生物制品有限公司)，995E耗材(美国血液技术公司)，离心机(德国JouanKR41)。

1.3 方法 根据《献血者健康检查要求》对单采成分献血者进行初筛检测，合格后随机抽取符合采集单采血小板要求的献血者40人，用MCS+血细胞分离机采集单采血小板1个治疗量，采集过程均顺利，献血者没有出现献血反应并且血细胞分离机未出现异常报警等情况。经质量检测，采集后每位献血者捐献的单采血小板产品质量(血小板含量，白细胞，红细胞残留量及容量)均符合《全血及成分血质量要求》。将40人份的单采血小板随机分成4组，每组10份，将其中1组单采血小板作为对照组，放入血小板振荡仪中22℃振荡保存。随机将另外3组经离心分别移除占单采血小板总量的90%、70%、50%的血浆后，通过无菌导管接口机连接PAS-ⅢM联袋，通过密闭管道分别加入与移除血浆容量相等的的 PAS-ⅢM液，分别制备成含90%、70%、50%浓度PAS-ⅢM的单采血小板，再将含不同浓度PAS-ⅢM的单采血小板各10份放入血小板振荡仪中振荡保存。将制备成不同PAS-ⅢM浓度的单采血小板和未移除血浆的单采血小板对照组分别进行以下实验:(1)用ISTAT CG4+血气仪在第1、3、5、7、10天分别测定pH值。(2)用分光光度计在第1、3、5、7、10天分别测定HSR。(3)用血小板聚集仪在第1、3、5、7、10 天分别测定凝血酶聚集率。(4)用流式细胞仪在第 1、3、5、7、10 天分别检测血小板 CD62p阳性率。

2 结果

2.1 pH值比较 正常单采血小板的pH值应在6.4～7.4，4组单采血小板在实验的第1～5天，pH值没有明显的差异。PAS-ⅢM浓度为70%和PAS-ⅢM浓度为90%的单采血小板，在第10天时pH值仍在血小板保存的正常范围内，但是PAS-ⅢM浓度为90%的单采血小板pH值低于PAS-ⅢM浓度为70%的单采血小板。PAS-ⅢM浓度为70%的单采血小板在第10天的pH值接近未添加PAS-ⅢM的单采血小板对照组在第5天pH值，PAS-ⅢM浓度为50%的单采血小板和未添加PAS-ⅢM的单采血小板对照组在10天pH值都低于正常值低限，并且未添加PAS-ⅢM的单采血小板对照组在7 d～10 d pH值下降非常快。见表1。

表1 pH值比较

2.2 HSR比较 在实验的第1天，4组单采血小板HSR实验均没有明显差异，在实验的第3天，PAS-ⅢM浓度为90%的单采血小板，和其他3组对比，有明显差异。PAS-ⅢM浓度为50%的单采血小板在第5天HSR值明显下降，未添加PAS-ⅢM的对照组在第7天-第10天HSR恢复率明显下降。PAS-ⅢM浓度为70%的单采血小板在第1、3、5、10天HSR值没有明显差异。其他3组在第10天HSR值和第1天相比显著减少。见表2。

表2 HSR比较 %

2.3 凝血酶聚集率比较 PAS-ⅢM浓度为90%的单采血小板和对照组的凝血酶聚集率在第5天就出现明显下降，第7～10天略有下降;PAS-ⅢM浓度为70%的单采血小板凝血酶聚集率在1、3、5、7、10天均没有明显下降，经统计学分析，没有明显差异。PAS-ⅢM浓度为50%的单采血小板凝血酶聚集率在第7天出现明显下降。见表3。

表3 凝血酶聚集率比较 %

2.4 血小板CD62p阳性率的比较 PAS-ⅢM浓度为70%的单采血小板从第1天到第10天血小板CD62p阳性率有所升高，但经统计学分析没有明显差异。PAS-ⅢM浓度为90%的单采血小板血小板CD62p阳性率在第3天就明显升高，和第1天有明显差异;对照组血小板CD62p阳性率在第7天明显升高，和第1天有明显差异。见表4。

表4 血小板CD62p阳性率比较 %

3 讨论

3.1 PAS-ⅢM中的醋酸盐主要以三羧酸循环的方式代谢［1］，最终代谢产物CO2能够从保存袋内排出，减少了碳酸氢盐的消耗，保证了单采血小板pH值维持正常范围，PAS-ⅢM中的磷酸盐能维持血小板的中性pH值。未添加PAS-ⅢM的单采血小板对照组，是完全以血浆作为血小板的悬浮介质，血浆中的葡萄糖主要以糖酵解的方式代谢，而代谢终产物乳酸盐和氢离子不能排出，随着时间的延长，产生的乳酸盐和氢离子等代谢产物增多，pH值急剧下降，血小板的功能活性也减低，达不到正常范围。

3.2 血小板在低渗环境中使自身体积缩小的机制和其他动物细胞一样，通过产生一系列信息传导和生化反应，降低血小板内部离子的浓度以维持血小板内体积，血小板内的这个反应依靠ATP来完成，而ATP来源于PAS-ⅢM中醋酸盐的氧化［2］。HSR实验是检测单采血小板的抗低渗休克能力。即HSR恢复率越高，血小板的形态和体积越接近正常，血小板的功能就越好［3］。

3.3 凝血酶诱导的聚集反应即凝血酶聚集率，血小板CD62p是血小板活化的重要指标，PAS-ⅢM中含有镁离子和钾离子，镁离子通过改变膜流体性或通过形成环腺苷酸抑制血小板在受到刺激时发生聚集，钾离子和镁离子联合应用能够减少血小板的活化，由此表明，PAS-ⅢM能够减少血小板活化。但是CD62p的水平不能单独作为血小板生存力和输注效果的唯一指标。

3.4 实验表明，PAS-ⅢM和血浆混合保存单采血小板较好地保持了血小板膜的完整性和维护血小板正常体积所需要的能量代谢，较好地保持了血小板的功能。而PAS-ⅢM浓度为70%的单采血小板更有效的保持了血小板的特性［3，4］。国外有文献报道，PAS-ⅢM 保存血小板在体外维持血小板质量至少有30%的血浆［5］。BEST Collaborative剩余血浆被从30%降低到20%对血小板的功能有损害［6］。

3.5 温度对单采血小板的保存非常重要，本实验是在正常22℃条件下进行的，4℃和22℃添加PAS-ⅢM液的单采血小板在血小板的功能，形态上会有明显的差异。国外有报道表明，添加PAS-ⅢM液后冷藏和冷冻单采血小板可以提高血小板的功能，提高出血病人的止血效果，同时减少发热、脓毒血症、过敏等输血反应的风险［7］。对于添加不同浓度的PAS-ⅢM液的单采血小板也有不同的影响，由于条件限制，还应该进一步进行血小板功能方面的其他实验。

1 孙晓红，常缨，李雅静，等.血小板保养液洗涤血小板的低渗休克反应试验.河北医药，2008，30:1424-1425.

2 邬旭群，熊文，鲍自谦，等.血小板低渗休克反应检测方法的建立及应用.现代检验医学杂志 ，2006，21:6-8.

3 赵凤绵，孙晓红，张爱红，等.采用HSR方法测定手工汇集浓缩血小板在不同保存温度下的保存效果.中国输血杂志，2008，21:116-118.

3 Gulliksson H，Aubuchon JP，Vesterinen M，et al.Storage of platelets in additive solutions:a pilot in vitro study of the effects of potassium and magnesium.Vox Sang，2002，82:131-136.

4 Ringwald J，Walz S，Zimmermann R，et al.Hyperconcentrated platelets stored in additive solutions:aspects on productivity and in vitro quality.Vox Sang，2005，89:11-18.

5 Klinger MH，Josch M，Klter H.Platelets stored in a glucose-free additive solution or in autologous plasma-an ultrastructural and morphometric evaluation.Vox Sang，1996，71:13-20.

6 Gulliksson H，Aubuchon JP，Cardigan R，et al.Storage of platelets in additive solutions:a multicentre study of the in vitro effects of potassium and magnesium.Vox Sang，2003，85:199-205.

7 Capocelli KE，Dumont LJ.Novel platelet storage conditions:additive solutions，gas，and cold.Curr Opin Hematol，2014，21:491-496.

R 446.11

A

1002-7386(2015)21-3293-03

10．3969/j．issn．1002-7386．2015．21．032

050071 石家庄市，河北省血液中心

2015-04-12)