小兴安岭食药用真菌黄酮含量的测定

王洪刚，郭兴，高智涛，范冬茹

(黑龙江省伊春林业科学院，黑龙江 伊春 153000)

小兴安岭食药用真菌黄酮含量的测定

王洪刚，郭兴，高智涛，范冬茹

(黑龙江省伊春林业科学院，黑龙江 伊春 153000)

以小兴安岭林区常见多孔真菌、常种植的可食真菌为试验材料，对其黄酮类化合物含量进行检测，为黄酮类化合物在化妆品、医药、食品工业中的应用提供理论依据。试验结果表明，各品种中黄酮类化合物含量最高的是桦褐孔菌，其含量达到8.98mg/g，野生食药用真菌和可栽培食用菌6种及其菌糠中均含有黄酮类化合物。

食药用真菌；黄酮；含量

食药用菌(Mushroom)古称蕈菌或菌蕈，俗称蘑菇，是一类具有肉质、胶质、木质、革质子实体，并有食用与药用价值的大型菌物，通常是指肉眼可见、可以用手直接采摘、大小达到厘米级、单个子实体重量为50mg以上的大型菌物。

近几年，天然产物有效成分以其安全、有效性、功能性，广泛应用于医药、食品、化工原料、化妆品、饲料等多个领域，同时也为中药新药的研究和发展带来了新的契机，并取得了良好的效果和效益。刘火安等用大孔树脂法从葛根中分离出纯度较高的葛根黄酮[1]。毛杏飞等用不同的方法提取白花蛇舌草中总黄酮,并确定了最佳的提取条件[2]。应国清等通过用D201大孔强碱性离子交换树脂分离银杏叶中的黄酮类化合物的研究,确定了最佳的提取条件,并分离出纯度较高的黄酮类化合物[3]。赵瑞艳等从树葺叶提取出黄酮类化合物并对其的抗氧化性进行研究[4]。张妍从山碴果提取分离总黄酮并进行体外抗肿瘤活性的研究[5]。研究表明，天然黄酮物质具有抗脑缺血的作用、心肌缺血作用、抗心律失常作用、镇痛作用、保肝护肝作用、对消化性溃疡的保护作用、抗病毒、抗肿瘤作用等。此外，还有研究表明，天然黄酮类物质有降压、降血脂、抑制血小板聚集等多种药理作用，说明天然黄酮物质确有多种生物学活性，且该类天然产物种类繁多，在植物中广泛存在，毒性较低，应是今后新药开发研究中一个值得重视的资源，有很大的开发利用前景。

本研究以小兴安岭林区常见多孔真菌、常种植的可食真菌为试验材料，为食药用真菌的菌种及成品的销售推广提供了理论数据，为黄酮类化合物在化妆品、医药、食品工业中的应用提供理论依据；加速食用菌资源的有效开发利用，生产出具有预防和治疗多种疾病的药品和天然保健品。

1 材料

1.1 供试菌株

采集及分类野生食药用真菌12种；收集可栽培食用菌6种及其菌糠。

表1 供试食药真菌

1.2 实验仪器

BAO-35A精密鼓风干燥箱 施都凯仪器设备(上海)有限公司；AL-104高精度电子天平 梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司超声波；TU-1901双光束紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司；HH-2水浴锅 金坛市双捷实验仪器厂；超声波细胞破碎仪 上海之信仪器有限公司。

1.3 试验药品

乙醇(分析纯)；甲醇(分析纯)；氢氧化钠(分析纯)；盐酸(分析纯)；亚硝酸钠(分析纯)；硝酸铝(分析纯)；芦丁(≥98%)。

2 方法

2.1 食药用真菌黄酮类化合物的提取工艺流程

食药用真菌子实体→烘干→粉碎→准备称取→配成70%乙醇料液→超声波160W，30min→离心→反复提取3次→合并收集滤液→浓缩→真空干燥。

2.2 黄酮类化合物的含量检测

2.2.1 原理。黄酮类化学结构为2-苯基色原酮，分子中具有酚羟基， 可与Al3+在碱性溶液中显色，在一定浓度范围内，其浓度与吸光度符合比耳定律，可进行比色定量。

2.2.2 标准曲线的制作。精密吸取标准芦丁对照品使用液(200μg/mL)0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于10mL比色管中，各加60%乙醇至5mL，加5%NaNO2溶液0.5mL，摇匀放置6min，再加10%A1(NO3)3溶液0.5mL，摇匀，再放置6min，加4%NaOH溶液4mL，摇匀放置10～20min。在510nm波长处，以第一管溶液作空白分别测定吸光度，以吸光度对浓度进行回归，绘制标准曲线。

2.2.3 样品的测定。精密吸取黄酮提取液1.0mL于10mL比色管中，按各加60%乙醇至5mL进行操作，加5% NaNO2溶液0.5mL，摇匀放置6min；再加10%Al(NO3)3溶液0.5mL，摇匀放置6min；加4%NaOH溶液4mL，摇匀放置10～20min。在510nm波长处，以第一管溶液作空白分别测定吸光度，以吸光度对浓度进行回归，绘制标准曲线。

2.2.4 计算

式中：X为样品中总黄酮的含量(以芦丁计)，%；A为样品提取液中黄酮的量，μg；m为样品的质量，g。

3 结果与分析

3.1 食药用真菌黄酮类化合物标准曲线的建立

图1 黄酮类化合物的标准曲线

经紫外可见光分光光度计检测，将所得的数据进行回归处理，得到回归方程Y=0.01085X+0.01437(R2=0.9978)。

3.2 高含黄酮类化合物食药用真菌的筛选

表2 食药用真菌中黄酮类化合物的含量

对采集的野生食药用真菌12种、可栽培食用菌6种及其菌糠进行高含黄酮类化合物食药用真菌的筛选，各品种中黄酮类化合物的含量见表2。

由表2中可以看出，各品种中黄酮类化合物含量最高的是桦褐孔菌，其含量达到8.98 mg/g，野生食药用真菌和可栽培食用菌6种及其菌糠中均含有黄酮类化合物。

4 结论

对采集的野生食药用真菌12种、可栽培食用菌6种及其菌糠进行高含黄酮类化合物食药用真菌的筛选，各品种中黄酮类化合物含量最高的是桦褐孔菌，其含量达到8.98 mg/g，野生食药用真菌和可栽培食用菌6种及其菌糠中均含有黄酮类化合物。桦褐孔菌中富含黄酮类化合物，对其精深加工具有较好的市场前景。

[1]刘火安,贾云，戴传云,等.葛根总黄酮分离纯化的研究[J].生物技术通讯,2005,6(5):522-524.

[2]毛杏飞, 罗佳波.白花蛇舌草中总黄酮提取分离工艺的研究[J].中药材,2002,25(7):499-500.

[3]应国清.银杏叶黄酮类化合物的分离纯化[J].中国生化药物杂志,2006,27(1):43-45.

[4]赵瑞艳,徐雅琴.树毒叶片中黄酮类物质提取及抗氧化性研究[J].食品科学,2006,22(2):104-106.

[5]张妍.山碴果总黄酮的提取分离及体外抗肿瘤活性[J].中草药,2004,35(7):787-789.

Determination of Xiaoxing’an of Mushroom Flavonoids Content

Wang Honggang，Guo Xing，Gao Zhitao，Fan Dongru

(Yichun Academy of Heilongjiang Province Forestry science, Yichun,Heilongjiang 153000)

In this study, in the lesser Xiaoxing’an mountains of common porous fungi, often cultivated edible fungi as tested materials, To detect the content of flavonoid compounds, To provide a theoretical basis for the application of flavonoid in the cosmetics, pharmaceutical, food industry; The experiment indicates that the, The flavonoids content in each breed is the highest of Inonotus obliquus, its content reached 8.98 mg/g, wild edible fungus and cultivation of edible fungi 6 and fungus bran contains flavonoids.

Mushroom;Flavonoids; Content

2015-09-07

黑龙江省森林工业总局基金项目(sgzjQ2012014)

王洪刚(1984-)，男，工程师，从事林业研究，E-mail:whg00119@163.com。

R927.2

A

DOI.:10.13268/j.cnki.fbsic.2015.06.005