硅酮凝胶喷雾剂对小型猪瘢痕模型胶原表达的影响*



硅酮凝胶喷雾剂对小型猪瘢痕模型胶原表达的影响*

**通讯作者， E-mail：labnong@hotmail.com

高彦晨，农晓琳**，李战

(广西医科大学附属口腔医院颌面外科，广西 南宁 530021)

摘要：目的 研究硅酮凝胶对小型猪猪背瘢痕模型中胶原的影响，探讨医用硅酮凝胶的作用机制。方法构建小型猪猪背增生性瘢痕模型， 在术后28d外用医用硅酮凝胶喷雾剂，术后56d处死动物，切取猪背瘢痕及正常皮肤，采用免疫组化的方法观察瘢痕中Ⅰ型胶原的变化情况。结果医用硅酮凝胶组较空白对照组瘢痕增生明显减轻，医用硅酮凝胶可以抑制瘢痕中Ⅰ型胶原的形成。结论医用硅酮凝胶可以显著抑制Ⅰ型胶原的形成，从而改变细胞外基质的构成，缓解瘢痕增生情况。

关键词：瘢痕；医用硅酮凝胶；Ⅰ型胶原蛋白

皮肤病理性瘢痕是创伤愈合过程中形成的一种皮肤纤维组织增生性疾病，而增生性瘢痕是皮肤病理性瘢痕中的一种，其主要特点是成纤维细胞异常增殖和细胞外基质的过度沉积[1,2]。目前防治增生性瘢痕的方法有很多，如药物治疗、细胞因子治疗、放射治疗和手术治疗等，但任何一种治疗病理性瘢痕的方法都不能达到良好的疗效。我们采用建立小型猪增生性瘢痕模型，探讨硅酮凝胶喷雾剂对增生性瘢痕作用机制及胶原表达的影响，为医用硅酮凝胶的应用提供理论依据。

1材料与方法

1.1实验对象雌性健康的小型猪2只(广西大学动物科学院提供)，4月龄，体质量为(12±0.3)kg。动物饲养于干燥、通风、安静的环境中，单只分笼适应性饲养3d。

1.2实验试剂医用硅酮凝胶喷雾剂(产品标准号：YZB/沪1761-64-2012)，Collagen Ⅰ鼠抗兔单克隆一抗(购买于武汉博士德公司)，通用型山羊抗鼠二抗、免疫组化试剂盒及DAB试剂盒(均购买于北京中杉金桥公司)，复合消化酶(购买于武汉博士德公司)。

1.3动物分组处理参照相关文献[3,4]于小型猪背部建立猪背增生性瘢痕模型，猪背两侧分别建立瘢痕创面6块，损伤面积大约为3cm×3cm，每组12个瘢痕模型，伤口止血后暴露，不做其他处理。术后分圈饲养，待其自然表皮化而瘢痕愈合。术后第28d随机将动物分为两组：空白对照组(不做任何处理)和医用硅酮凝胶组(喷涂于小型猪猪背，2次/d，喷涂于瘢痕表面)。用药期间实验动物未见异常现象。

1.4实验动物标本制备小猪连续用药28d后，静脉空气栓塞处死动物，切取小型猪瘢痕标本和正常小型猪猪背皮肤，4%多聚甲醛中固定24～72h后，石蜡包埋。

1.5SP法免疫组织化学染色将已包埋好的标本，以5μm的厚度连续切片。常规石蜡切片脱蜡复水，3%过氧化氢孵育5~10min，蒸馏水冲洗，PBS浸泡2次，每次2min，进行间接法抗原热修复，10%正常山羊血清封闭10min后，加入一抗(抗体浓度1∶100，阴性对照组以PBS代替一抗)，4℃过夜，PBS漂洗，每次2min，加入生物素标记的二抗，37℃孵育 10~15min，PBS漂洗，滴加辣根过氧化物酶标记，37℃温箱孵育10~15min，PBS漂洗2次，每次2min，DAB溶液显色，冲洗，再行苏木精复染，1%盐酸乙醇溶液分化10s，脱水，透明，中性树胶常规封片观察结果。

1.6图像分析将所拍摄的免疫组化图片依次输入IPP图像分析系统进行分析。随机选取每个样本中的10个视野，检测每一个视野中的I型胶原蛋白的平均光密度。

2结果

2.1两组瘢痕厚度比较空白对照组瘢痕较正常皮肤明显高起，色红，质地硬；医用硅酮凝胶组瘢痕变平滑，质地变软，颜色与周围皮肤相近。

2.2Ⅰ型胶原蛋白表达皮肤组织中Ⅰ型胶原主要存在于真皮层的细胞间质中。光镜下可见胶原蛋白染色后在真皮层中呈棕黄色，呈阳性表达。空白对照组与正常皮肤相比，Ⅰ型胶原蛋白增加明显；医用硅酮凝胶组Ⅰ型胶原蛋白含量接近正常皮肤。而以PBS代替一抗的阴性组中Ⅰ型胶原蛋白未见有阳性表达，见图1(封二)。医用硅酮凝胶组Ⅰ型胶原蛋白平均光密度(0.1465±0.111)与空白对照组(0.5591±0.499)相比较，明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)。

3讨论

皮肤瘢痕是在创伤或者手术等各种因素的作用下，组织损伤达到一定程度后修复的结果，病理性瘢痕主要有增生性瘢痕及瘢痕疙瘩(keloid)两种表现形式，是临床上常见的一种纤维增生性疾病。病理性瘢痕的形成过程复杂，其成因及发病机制目前仍不十分清楚，而目前的研究表明，病理性瘢痕是由皮肤成纤维细胞增殖及凋亡平衡失调导致细胞外基质尤其是胶原纤维异常沉积所致，其中又以Ⅰ型胶原纤维为主[5,6]。

目前临床上治疗增生性瘢痕方法有很多包括手术治疗、药物治疗和加压治疗等，但治疗效果都不甚理想。硅酮凝胶喷雾剂是治疗增生性瘢痕的药物之一，临床上用于体表愈合后的小创面保护，以及辅助用于增生性瘢痕的抑制，但其作用机制尚不完全清楚。本实验通过构建小型猪瘢痕模型，外涂医用硅酮凝胶喷雾剂，结果证明硅酮凝胶对增生性瘢痕有抑制作用，并可抑制Ⅰ型胶原蛋白的沉积，从而达到抑制瘢痕的作用，从而为更好的利用硅酮凝胶抗瘢痕提供了一定的依据。

参考文献：

[1]姚东刚,张选奋.Ⅳ、Ⅵ、Ⅻ、ⅩⅣ、ⅩⅥ型胶原与皮肤创伤修复及瘢痕增生的关系.中国美容医学，2014，23(6):507

[2]Lee WJ，YO Kim，IK Choi，et al.Adenovirus-relaxin gene therapy for keloids：implication for reversing pathological fibrosis.Br J Dermatol，2011，165(3):673

[3]Rapp SJ，A Rumberg，M Visscher，et al.Establishing a reproducible hypertrophic scar following thermal injury：a porcine model.Plast Reconstr Surg Glob Open，2015,3(2):309

[4]Zhu KQ，GJ Carrougher，OP Couture，et al.Expression of collagen genes in the cones of skin in the Duroc/Yorkshire porcine model of fibroproliferative scarring.J Burn Care Res，2008，29(5):815

[5]付晋凤.病理性瘢痕的发生机制与修复.中华损伤与修复杂志，2013,8(4):347

[6]DW Lee，Ku SK，Cho HJ，et al.Effects of Noscarna on hypertrophic scarring in the rabbit ear model：histopathological aspects.Arch Pharm Res，2012，35(11):1999

[7]宋溦，黄东，王玥莹，等.增生性瘢痕诊治的研究进展.现代医学，2015,15(5):16

[8]陈翔.硅酮凝胶对增生性瘢痕模型中胶原表达的影响.中西医结合研究，2013,5(1):21

Effect of Silicone Gel on the Expression of Collagen of

Scar Model in Miniature Swine

GAO Yan-chen，NONG Xiao-lin，LI Zhan

(DepartmentofOralandMaxillofacialSurgery，CollegeofStomatology，GuangxiMedicalUniversity，

NanningGuangxi530021，China)

ABSTRACT：Objective To study of the influence of silicone gel on collagen of scar model on the back of small Pig and itsmechanism. Methods Medical silicone gel spray was used 28 days after construction of hypertrophic scar model on the back of small pig.56 days later,the animals were sacrificedand the changes of collagen Ⅰin scar and normal skin was observed with immunohistochemistry staining.Results Compared with the control group，medical silicone scar gel significantly reduced the formation of collagenⅠscar.Conclusion Medical silicone gel can significantly inhibit the formation of collagenⅠ，change the composition of the extracellular matrix，and alleviate scar hyperplasia.

KEY WORDS：Scar；Silicone gel；CollagenⅠ

(收稿日期：2015-08-30)

DOI:10.16751/j.cnki.2095-4646.2015.06.0466

中图分类号：R965.2

文献标识码：A

文章编号：2095-4646(2015)06-0466-02

*基金项目：广西科学研究与技术开发计划课题(2014ED37035)