NMP22联合FISH技术在血尿患者膀胱癌筛查中的应用

江长琴 梁朝朝 施浩强 张翼飞 郝宗耀 周骏

膀胱癌是泌尿系最常见的恶性肿瘤，目前膀胱癌的诊断主要以膀胱镜和尿脱落细胞学检查为主。本研究主要探讨核基质蛋白22（nuclear matrix protein 22，NMP22）联合荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技术检测在血尿患者膀胱癌筛查中的应用价值。

对象与方法

一、病例资料

收集2008年1～10月间在我科住院有不同程度血尿的疑似膀胱癌患者100例，男78例，女22例；年龄22～86岁，平均60.5岁。全部病例均在手术前行FISH检测、NMP22检测、尿液脱落细胞学检查、膀胱镜检查、B超或CT平扫及增强扫描。因本研究是针对血尿患者膀胱癌的筛查，故经膀胱镜检和病理活检证实的膀胱癌患者，包括尿路上皮癌、腺癌及低度恶性潜能的尿路上皮乳头状肿瘤（具有恶性的潜能）共69例归为实验组，其他非膀胱癌患者31例归为对照组。

二、FISH方法学

留取患者晨尿200ml用于FISH检测。按照FISH操作方法进行制片、预处理、变性与杂交、洗涤，最后在荧光显微镜下观察荧光信号，计数、摄图并分析结果。

三、尿脱落细胞学检查

以LBP尿细胞学（巴氏染色）和传统尿细胞学（HE染色）联合检查定论，其中一项检查结果阳性即为尿脱落细胞学检查阳性，两项检查结果均阴性为尿脱落细胞学检查阴性。采用4级分级法分析结果，Ⅰ级：上皮细胞无异常；Ⅱ级：异形细胞；Ⅲ级：可疑癌细胞；Ⅳ级：查见癌细胞。统计分析时将Ⅰ级和Ⅱ级定为阴性，Ⅲ级和Ⅳ级定为阳性。

四、NMP22检测

收集患者新鲜尿液50ml，立即置于-80℃保存待测。按照ELISA试剂盒说明书操作，以目前较公认的Soloway等［1］提出的NMP22含量大于10U／ml为阳性判断标准。

五、统计学方法

采用SPSS 16.0软件进行数据分析，对计数资料采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

100例血尿患者中，经病理证实78例为膀胱肿瘤，2例膀胱肿瘤可疑，20例为非膀胱肿瘤。具体病理分类（按WHO2004分级）为膀胱尿路上皮癌47例、低度恶性潜能的尿路上皮乳头状肿瘤20例、内翻性乳头状瘤7例、尿路上皮乳头状瘤2例、膀胱腺癌2例、膀胱肿瘤可疑2例、非瘤炎性病变12例、良性前列腺增生症4例、前列腺癌1例、腺性膀胱炎2例、肾癌1例。实验组包括膀胱尿路上皮癌、低度恶性潜能的尿路上皮乳头状肿瘤和膀胱腺癌共69例；对照组为非膀胱癌患者31例。

FISH方法检测膀胱癌的敏感性和特异性分别为75.4%和83.9%；NMP22检测膀胱癌的敏感性和特异性分别为72.5%和74.2%；尿脱落细胞学检查的敏感性和特异性分别为31.9%和100%；FISH方法联合NMP22检测的敏感性和特异性分别为88.4%和87.1%；联合检测的敏感性明显优于任何一项单一检查（P＜0.05），特异性明显高于单独NMP22检测（P＜0.05）。

讨 论

尽管膀胱镜检查和尿细胞学检查目前仍是膀胱癌早期诊断的“金标准”，但由于膀胱镜检查具有创伤性，尿细胞学检查的敏感性较低，国内外学者正在探索新的肿瘤标志物用于膀胱癌的早期诊断。

FISH技术主要用于染色体数目和结构畸变的研究。分子细胞遗传学已发现多种染色体位点在膀胱癌中表达异常。FISH技术应用 GLP16／CSP17、CSP3／CSP7探针组检测这一遗传学改变。我课题组多年来一直将这项技术应用于膀胱癌检测，本研究发现FISH在血尿患者膀胱癌检测中的敏感性和特异性分别为75.4%和83.9%，其敏感性明显高于尿脱落细胞学检测，与国内相关报道一致［2］。

NMP22为核有丝分裂复合体蛋白的重要成分，与核骨架的组成、DNA复制、RNA合成、激素吸附及基因表达有关。正常人尿液中NMP22的含量极低，而膀胱肿瘤患者中，因瘤体组织坏死、脱落，可引起尿液中NMP22含量增高。本研究NMP22检测的敏感性为72.5%，特异性为74.2%。NMP22在膀胱癌诊断中的敏感性明显高于尿脱落细胞学检测。

尿脱落细胞检查可作为血尿患者的初步筛选手段，对细胞异型性明显的原位癌及浸润癌的癌细胞有很高的检出率。其特异性高，但敏感性低，尤其对低分级肿瘤的敏感性更低。研究报道其在膀胱癌筛查中也有一定的假阳性率［3］。本研究尿脱落细胞学检查的敏感性和特异性分别为31.9%和100%。其较低的敏感性也要求临床有更高价值的检测手段的发现。

本研究NMP22联合FISH检查的敏感性和特异性分别为88.4%和87.1%。联合检测的敏感性明显优于任何一项单一检查（P＜0.05），特异性明显高于单独NMP22检测（P＜0.05）。由此可见，NMP22联合FISH检查在血尿患者膀胱癌筛查应用中具有一定的临床应用价值。由于本组标本量有限，我们对各临床分期及病理分级的膀胱癌患者中检测敏感性和特异性未做分类比较，下一步我们将增加标本量进一步完善。

［1］ Soloway MS，Briggman V，Carpinito GA，et al.Use of a new tumor marker，urinary NMP22，in the detection of occult or rapidly recurring transitional cell carcinoma of the urinary tract following surgical treatment［J］.J Urol，1996，156（2Pt 1）：363-367.

［2］ 罗彬，李正明，李刚，等.荧光原位杂交在膀胱尿路上皮癌诊断中的应用［J］.现代泌尿生殖肿瘤杂志，2012，4（3）：144-147.

［3］ Matsumoto K，Ikeda M，Hirayama T，et al.Clinical value of dividing false positive urine cytology findings into three categories：atypical，indeterminate，andsuspicious of malignancy［J］.Asian Pac J Cancer Prev，2014，15（5）：2251-2255.