D2-40和FⅧ在结肠癌中的表达及意义①

王桂梅，刁为英，王彩霞，聂美楠，张立海

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

D2-40和FⅧ在结肠癌中的表达及意义①

王桂梅，刁为英，王彩霞，聂美楠，张立海

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

目的:探讨D2-40和FⅧ在结肠癌组织中的表达及其意义。方法:采用免疫组化方法检测60例结肠癌、20例结肠腺瘤和20例正常结肠组织中D2-40和FⅧ的表达情况，分别计数D2-40阳性的微淋巴管密度(Lymphaticmicrovesseldensity,LMVD)和FⅧ 阳性的微血管密度(microvesseldensity，MVD)。结果:D2-40表达的LMVD计数在正常结肠、结肠腺瘤及结肠癌逐渐增加，组间差异有显著性；FⅧ表达的MVD计数由高到低依次为结肠腺瘤、结肠癌及正常结肠，组间差异有显著性。结论:结肠癌组织中D2-40和FⅧ过表达，说明血管/淋巴管新生在结肠癌的发生、发展过程中起到重要作用，可为结肠癌的早期诊断提供参考依据。腺瘤组织中新生血管和淋巴管数量增多，提示腺瘤有发展成癌的风险，应该定期复查。

D2-40；FⅧ；结肠癌；微淋巴管密度；微血管密度

结肠癌是严重威胁人类健康的恶性肿瘤，血管和淋巴管新生在恶性肿瘤发生、发展、侵袭及转移过程中起到十分重要的作用。本研究采用免疫组化的方法检测D2-40和FⅧ在正常结肠、结肠腺瘤及结肠癌中的表达，探讨其在结肠癌发生、发展中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

收集佳木斯大学附属第一医院病理科 2010～2014年间结肠癌蜡块 60 例，结肠腺瘤20例，正常结肠组织20例。由两位以上高年资病理医师重新阅片并确认诊断。患者年龄35～78岁，男62例，女38例。

1.2 实验方法

鼠抗人D2-40 单克隆抗体 、兔抗人FⅧ多克隆抗体，均购于福州迈新生物技术开发有限公司。采用LSAB法进行免疫组化染色，按照试剂盒说明进行操作。在显微镜下观察并计数微血管密度(MVD)和微淋巴管密度(LMVD)。

1.2.1 结果判定

1.2.2 微血管计数

参照Weidner[2]的计数标准：首先在低倍镜(40×或100×)下寻找组织内血管最密集区，然后在高倍镜(200×)下选取5个视野计数，取平均数作为该例微血管数MVD值。微血管为孤立的内皮细胞或内皮细胞团，避开坏死和出血区，有肌层及管腔面积>8个红细胞直径的血管不计数。FⅧ阳性定位于微血管内皮胞浆中，呈棕黄色。

1.2.3 微淋巴管计数

与微血管计数相似，在低倍镜(40×或100×)下寻找组织内淋巴管最密集区，然后在高倍镜(200×)下计数阳性微淋巴管数目。结果以5个高倍镜视野下的微淋巴管均数表示。微淋巴管的形态为单个的内皮细胞或内皮细胞群，与周围脉管、肿瘤细胞及其他细胞分开。D2-40阳性定位于淋巴管内皮细胞胞浆中，呈棕黄色。淋巴管呈扩张状或闭塞条索状，管壁被覆单层扁平上皮，较薄，管腔中无红细胞。

1.3 统计学方法

2 结果

在正常结肠、腺瘤及结肠癌中D2-40阳性表达的LMVD呈现递增的趋势，组间比较有显著性差异(见表1及图1～3)。本实验中正常结肠黏膜固有层中未见明确微淋巴管，固有层底部及黏膜下层可见少量扩张的微淋巴管。结肠腺瘤的黏膜固有层内可见微淋巴管。结肠癌组织间淋巴管较少，癌旁间质内微淋巴管增多。

FⅧ阳性表达的MVD计数由高到低依次为结肠腺瘤、结肠癌和正常结肠，组间比较差异有显著性(见表1及图4～6)。正常结肠组黏膜固有层内可见裂隙样、囊泡状及单个细胞组成的微血管。结肠腺瘤组微血管数目明显增加，结肠癌组微血管相对减少，血管管腔变大。

组别n LMVD MVD正常组205．33±1．8049．8±6．36结肠腺瘤2018．17±10．88※86．0±16．71▲结肠癌6031．39±10．60△56．7±12．95△

与正常组比较，※P<0.05，▲、△P<0.001；与结肠癌组比较，※、▲P<0.001。

图1D2-40在正常结肠黏膜下层表达(200×) 图2D2-40在腺瘤中表达(200×) 图3D2-40在结肠癌组织中的表达(200×)

图4 FⅧ在正常结肠黏膜中表达(200×) 图5 FⅧ在腺瘤中表达(200×) 图6 FⅧ在结肠癌组织中的表达(200×)

3 讨论

结肠癌的发生是多因素、多步骤共同作用的结果，近年来血管、淋巴管新生在肿瘤发生发展中的作用备受关注。毛细淋巴管基底膜不完整，管壁很薄，内皮细胞连接疏松，间隙较大，通透性强，可允许大分子通过，有利于肿瘤细胞的进入。计数LMVD可较好地反映淋巴管生成状况[2]。D2-40是癌胚抗原M2A的单克隆抗体，仅表达于淋巴管内皮细胞，不表达于血管内皮细胞，被认为是标记淋巴管的特异而敏感性指标[3]。本实验中正常结肠中微淋巴管较少,主要在黏膜下层可见。发生腺瘤时黏膜固有层出现微淋巴管，提示当腺体出现异型增生时，组织内微淋巴管密度增加，故应定期随访腺瘤的患者，预防恶变。结肠癌组织中微淋巴管明显增加，部分淋巴管内可见癌栓，提示微淋巴管数目的增多加大了肿瘤细胞进入淋巴管的机会。肿瘤发生、发展需要依赖新生血管(angiogenesis)[4]，实体瘤的发生、发展可分为无血管期和血管期，一旦进入血管期即可为肿瘤的生长提供营养，加速肿瘤细胞增殖。血管增生在一定程度上决定着肿瘤的生物学行为，反应了肿瘤诱导血管生成的能力。肿瘤组织的微血管密度不仅可定量地反映出肿瘤血管生长情况，而且可预示肿瘤生长、转移和复发的趋势[5]。本研究中结肠组织内的微血管数量明显多于微淋巴管数量。结肠腺瘤组微血管数量最多，结肠癌组微血管相对减少，血管管腔变大，推测在结肠腺瘤阶段肿瘤诱导血管生成的能力最强。本实验对正常结肠、结肠腺瘤和结肠癌组织中新生血管、淋巴管分布的特点进行了分析，探讨了不同阶段结肠组织中血管和淋巴管密度的变化，为结肠癌前病变及结肠癌中血管/淋巴管新生提供了理论依据，为结肠癌的早期诊断和抗肿瘤治疗提供了线索。

[1]WeidnerN,SempleJP,WeichWR,etal.Tumorangiogenesisandmetastasiscorrelationininvasivebreastcareinoma[J].NEnglJMed,1991，324(1):1-8

[2]ShidaA,FujiokaS,IshibashiY,etal.PrognosticsignificanceofvascularendothelialgrowthfactorDingastriccarcinoma[J].WorldJSurg,2005,29(12)∶1600

[3]吴巨钢,俞继卫,姜波健.胃癌淋巴管浸润及淋巴管生成的检测及其意义[J].中国普通外科杂志,2008,17(3)∶280

[4]FolkmanJ.Angiogenesis[J].AnnuRevMed,2006，57:1-18

[5]CoxG,WalkerRA,AndiA,etal.Prognosticsignificanceofplateletandmicrovesselcountsinoperablenon-smallcelllungcancer[J].Lungcancer,2000,29 (3):169-177

黑龙江省卫生计生委科研课题，编号：2014-238。

王桂梅(1980～)女,黑龙江佳木斯人,硕士，主治医师。

R735.35

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1008-0104(2015)04-0027-02

2015-03-25)