HPLC法测定银杏芪血通胶囊中丹参酮ⅡA的含量

王文心 崔红彬

（1 河南省商丘市第一高级中学，商丘 476000；2河南省商丘市食品药品检验所，商丘 476000）

HPLC法测定银杏芪血通胶囊中丹参酮ⅡA的含量

王文心1崔红彬2

（1 河南省商丘市第一高级中学，商丘 476000；2河南省商丘市食品药品检验所，商丘 476000）

目的 建立HPLC法测定银杏芪血通胶囊中丹参酮ⅡA含量的方法。方法采用Eclipse XDB-C18色谱柱，甲醇—水（75∶25） 为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长270 nm。结果 丹参酮ⅡA在0.022~0.154μg范围内线性关系良好（r=0.9999），平均回收率为97.86%，RSD=1.02%（n=6）。结论 本方法简便、准确度高、重复性好可作为银杏芪血通胶囊的质量控制方法。

银杏芪血通胶囊；高效液相色谱法；含量测定

银杏芪血通胶囊是某医院长期使用的协定处方制剂，该制剂由丹参、香附、桂枝、川牛膝等多味药组成。具有活血行气，温经通络，消肿止痛之功效，用于骨质增生引起的关节疼痛肿胀，活动受限，椎间盘突出，近关节损伤后遗症。疗效显著，广泛应用于临床。该制剂服用方便、经济实惠，为众多患者所接受。为确保用药的安全有效，本实验根据处方中所含药物成分及其理化性质，采用HPLC法对处方中丹参所含的有效成分丹参酮ⅡA进行了含量测定，以对银杏芪血通胶囊的质量进行有效控制。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，AUW-220D电子分析天平，5210DT超声处理器。银杏芪血通胶囊 (由某医院提供，批号：A、B、C)。丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110766-200518）；甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：Eclipse XDB-C18色谱柱 (4.6×150 mm)。流动相：甲醇—水（75∶25） 为流动相；流速1.0 ml·min-1；检测波长270 nm；进样量10 μl；柱温：30℃；理论板数按丹参酮ⅡA计算不低于2000[1]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 丹参酮ⅡA对照品溶液的制备 精密称定丹参酮ⅡA对照品约10 mg，置100 ml量瓶中，加甲醇适量，振摇使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为丹参酮ⅡA对照品储备液，精密量取10 ml置另一100 ml量瓶中，加甲醇至刻度，作为丹参酮ⅡA对照品溶液。

2.2.2 银杏芪血通胶囊样品溶液的制备 取银杏芪血通胶囊约3.0 g，研细，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇35ml，超声处理30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液。

2.2.3 银杏芪血通胶囊阴性对照溶液的制备 取缺少丹参的其他味药按处方工艺制成的银杏芪血通胶囊阴性制剂3 g，置50 ml量瓶中，加甲醇35m l，超声处理30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为银杏芪血通胶囊阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察 取2.2.1项下丹参酮ⅡA对照品溶液，以甲醇—水 （75∶25） 为流动相；流速1.0ml·min-1；检测波长270 nm；分别进样2、4、6、8、10、14 μl，以丹参酮ⅡA峰面积（Y） 对对照品进样量（X）进行线性回归，得回归方程：Y=1.02×104X+9.63 r=0.9999。结果表明，丹参酮ⅡA对照品进样量在0.022~0.154μg范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

2.4 干扰试验 分别取2.2项下制备的3种溶液，按照2.1项下的色谱条件进样，得到3种溶液的色谱图，结果在该色谱条件下丹参酮ⅡA对照品溶液、银杏芪血通胶囊样品溶液在17分钟附近均出现了丹参酮ⅡA的色谱峰，而银杏芪血通胶囊阴性对照溶液在相同的时间无色谱图出现，说明制剂中的其他成分对丹参酮ⅡA的测定无干扰。见图1。

2.5 精密度试验 取上述丹参酮ⅡA对照品溶液，以甲醇—水 （75∶25） 为流动相；流速1.0m l·min-1；检测波长270nm；每次10μl，重复进样5次，测定丹参酮ⅡA的峰面积，计算5次峰面积值的RSD=0.96%(n=5)，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验 取上述银杏芪血通胶囊样品溶液，以甲醇—水 （75∶25） 为流动相；流速1.0 ml·min-1；检测波长270 nm；分别在0、1、2、3、4、5、6、8、10h进样测定，测定丹参酮ⅡA的峰面积，根据峰面积值，计算9次峰面积值的RSD=0.95%，说明在10 h内稳定。

2.7 样品含量测定 分别称取不同批号的3批银杏芪血通胶囊约3.0 g，研细，精密称定，分别置50 ml量瓶中，加甲醇35ml，超声处理30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液。以甲醇—水 （75∶25） 为流动相；流速1.0m l·min-1；检测波长270 nm；各进样10μl，按外标法计算丹参酮ⅡA的含量，结果见表1。

表1 3批银杏芪血通胶囊中丹参酮ⅡA的含量

2.8 重复性实验 称取同一批号（A）的银杏芪血通胶囊6份，按照样品含量测定方法测定丹参酮ⅡA的含量为0.1377mg/g，RSD=0.98%（n=6）

2.9 加样回收率试验 分别取6份已知含量为0.1377 mg/g的银杏芪血通胶囊约1.5 g，精密称定，各置50 ml量瓶中，分别精密加入对照品储备液2.00 ml，加甲醇35 m l，超声处理30分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为样品溶液。以甲醇—水 （75∶25） 为流动相；流速1.0 ml·min-1；检测波长270 nm；进样量10 ul；分别进样测定，结果见表2。从表2可以看出：6分加样回收结果良好，平均回收率达到97.86%，且6分加样回收率的RSD为1.02%。

表2 加样回收率试验结果

3 讨论

银杏芪血通胶囊质量标准[2]中只有对部分成分的理化及纤维鉴别，没有对有效成分含量的测定，不利于控制该制剂的质量，为了更进一步地控制银杏芪血通胶囊的质量稳定保证临床疗效，本方法选定了其中一味主药丹参所含的有效成分丹参酮ⅡA作为检测目标，参考有关文献[3-6]，针对银杏芪血通胶囊的制备工艺特性，以及丹参酮ⅡA在甲醇中有较好的溶解性的特点，为了确定可靠的提取方法，通过试验比较了回流、超声、索式提取等提取方法，结果测得三种方法结果基本一致，因为超声处理30分钟提取过程简便、快速、准确可靠，所以最终选定了超声处理30分钟为本文提取方法，本文建立的高效液相色谱法测定丹参酮ⅡA含量的方法操作简便，准确度高，杂质对测定无干扰，重复性好，对控制银杏芪血通胶囊的内在质量具有重要意义。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典.2010年版.一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010：70-71.

[2]河南省医疗机构制剂标准.

[3]王湛.HPLC测定调经活血片中丹参的含量[J].中外医学研究，2010，8（22）：68-69.

[4]严红，高杨，郭伟，等.不同产地丹参药材中丹参酮ⅡA及丹参素的含量比较[J].天津药学，2003，15（3）：10-12.

[5]郭志鹏，郭迎霞.HPLC法测定通神复脑丸中丹参酮ⅡA的含量[J].中国药师，2009，12（11）：1666-1667.

[6]于百青，杨敏，孙鹏云.高效液相色谱法测定心舒丸中丹参酮Ⅱ_A含量[J].中国药业，2012，21（13）：36-37.

Con ten t Determ ination of TanshinoneⅡA in Yinxing Qixuetong Capsu les by HPLC

WANGWenxin1,CUIHongbin2
(1.Shangqiu FirstSeniorHigh School,Henan Province,Shangqiu476000,China;2.Shangqiu InstituteforDrugControl,HenanProvince,Shangqiu476000,China)

Objective To establish a HPLCmethod to determine the content of Tanshinone Ⅱ A in Yinxing Qixuetong capsules.M ethods The chromatographic system consisted of C18 column,usingmethanol,waters(75∶25)asmobile phase.The contentwas detected at a wavelength of 270 nm,the flow rate was 1.0mlmin-1.Results The Tanshinone Ⅱ A had a good linearity in the range of 0.022～0.154 μg（r=0.9999） ,and the average recovery was 97.86%and RSD=1.02%（n=6）.Conolusion The established method was accuracy,sensitive and simple.It can be used for quality control of Yinxing Qixuetong capsules.

Yinxing Qixuetong capsules;HPLC;content determination

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.21.079

1672-2779（2015）-21-0152-02

张文娟 本文校对：张文娟

2015-08-26）