农业大学学报

35个粳稻品种SSR指纹图谱的构建及遗传相似性分析

程保山，万志兵，洪德林

农业大学学报

35个粳稻品种SSR指纹图谱的构建及遗传相似性分析

程保山，万志兵，洪德林

用68对SSR引物扩增了35个粳稻品种（系）的基因组DNA，结果有46对引物在35个品种间具有稳定多态性.有6个品种可用单一特异的SSR标记加以识别，其余29个品种则需要不同的SSR指纹组合才能识别.用12对核心引物构建的SSR指纹图谱能将35个粳稻品种逐一区别开来.35个粳稻品种间遗传相似系数的变异范围为0.27～0.98.采用类平均法进行聚类分析，在相似系数0.82处，可将35个粳稻品种分为4类.聚类分析结果基本上反映了依据系谱分析的品种间亲缘关系.

粳稻；微卫星标记；指纹图谱；遗传相似性

来源出版物：南京农业大学学报，2007，30（3）：1-8入选年份：2012

底栖动物生物指数水质评价进展及在中国的应用前景

吴东浩，王备新，张咏，等

摘要：介绍了基于底柄动物的3类广泛应用的水质生物评价参数：Saprobic指数、BI指数、群落多样性指数，并结合它们在水质和水资源管理中的应用现状分析了各指数的优缺点.Saprobic指数和BI指数已是欧盟成员国及美国等国重要的水质生物评价指数，中国的水质生物监测技术规范中尚缺乏类似的生物指数.分析了中国开展BI指数水质生物评价研究的现状，探讨了中国建立BI指数评价标准与规范的研究基础、不足、应用前景和今后的研究建议.同时指出，目前的研究重点是底柄动物耐污值计算和 BI指数水质基准.

关键词：大型底栖无脊椎动物；生物指数；生物监测；生物评价

来源出版物：南京农业大学学报，2011，34（2）：129-134入选年份：2013

生物有机肥对盆栽烟草根际青枯病原菌和短短芽孢杆菌数量的影响

陈巧玲

摘要：目的：生物防治是植物病害防治的重要组成部分.本文通过盆栽试验研究施用生物有机肥条件下，种植土壤接种或不接种青枯病原菌后烟草的发病率、生物量变化，及其不同生育期的根际病原菌和拮抗菌的动态变化规律，并建立烟草青枯病原菌及其拮抗菌（短短芽孢杆菌）的荧光定量PCR检测方法.为微生物肥料防治烟草青枯病提供理论依据.

方法：试验通过开展温室内盆栽方法完成，每盆装7.5 kg健康土壤.生物有机肥是氨基酸有机肥中加入拮抗菌后经二次固体发酵而成.烟草的抗病品种选取“K326”，感病品种为“南江三号”.每个品种分别设5个处理，包括：只施用烟草专用复合肥的处理（CK）；移栽烟草前在CK的基础上加入100 g生物有机肥的处理（BIO）；移栽烟草前在CK的基础上加入青枯病原菌的处理（RS）；移栽烟草前在RS的基础上加入100 g生物有机肥的处理（RS+BIO）；移栽烟草前在BIO的基础上加入青枯病原菌的处理（BIO+RS）.各处理添加的烟草青枯病原菌fliC基因拷贝数均为107g-1.各处理在25℃条件下培育，待烟株进入旺长期后转至人工气候室，培育温度为25～34℃，培育湿度为75%.对烟草青枯病害进行调查与分级，待烟草出现发病症状后每5天监测一次并计算发病率，同时测定烟草植株成熟期的湿质量和干质量以观测植株的生物量变化.同时，采取烟草植株不同生育期的根际土壤，提取土壤总DNA，采用琼脂糖凝胶电泳检测，并用超微量分光光度计方法检测土壤总DNA浓度和纯度，建立烟草青枯病原菌和拮抗菌（短短芽孢杆菌）的荧光定量PCR测定方法检测根际微生物动态变化.

结果：试验结果表明，施用生物有机肥能显著降低抗病品种“K326”和感病品种“南江三号”烟草青枯病的发病率；施用生物有机肥后，烟草的生物量至少增加了14%.荧光定量PCR的结果显示，只接种病原菌处理（RS）的土壤中青枯病原菌的fliC基因拷贝数显著高于先接种病原菌再施用生物有机肥处理（RS+BIO）的土壤，也高于先施用生物有机肥后接种病原菌处理（BIO+RS）的土壤；并且，这一现象与烟草的生育期和品种无关.此外，旺盛生长期前，施用生物有机肥的各处理土壤中短短芽孢杆菌16S rDNA基因拷贝数也显著高于RS处理的土壤.

结论：通过抑制土壤青枯菌生长和促进烟草生长，生物有机肥能防治烟草青枯病.建立的草青枯病原菌和短短芽孢杆菌的荧光定量方法，可实时监测烟草根际微生物的动态变化.

来源出版物：南京农业大学学报，2012，35（1）：75-79入选年份：2013

鳢肠种子萌发及出苗条件的研究

罗小娟，吕波，李俊，等

摘要：通过萌发试验研究了温度、光照、pH、水势、盐分对鳢肠种子萌发以及埋土深度对其出苗的影响.结果表明：鳢肠种子萌发适宜温度为25～40℃，最适35℃；鳢肠为光敏感性种子，在光照条件下才能萌发，在黑暗中萌发受到抑制，但不同光照周期对种子萌发率没有明显影响；鳢肠种子对pH具有广泛的适应性，在pH为4～10范围内均可萌发；鳢肠种子对水势非常敏感，随着溶液水势从0下降至-0.5 MPa，萌发率从97.78%降低为4.44%；对盐分不敏感，当NaCl浓度为0.15 mol·L -时，萌发率为42.22%.表土层的鳢肠种子出苗率最高，当埋土深度大于0.5 cm时不能出苗.该研究表明：耕作将种子带入土层，可有效治理鳢肠的危害.

关键词：鳢肠；种子萌发；种子出苗；环境因子

来源出版物：南京农业大学学报，2012，35（2）：71-75入选年份：2013

我国红枣资源加工利用研究现状与展望

闫忠心，鲁周民，刘坤，等

摘要：目的：针对我国红枣加工利用研究现状，提出存在问题与发展建议，为红枣产业健康发展提供新的思路和参考.方法：综合分析有关研究文献，从红枣的加工利用现状和发展趋势进行阐述.结果：在红枣产品深加工、功能成分提取和加工副产物利用研究现状综述的基础上，提出目前红枣加工利用中存在的主要问题有：粗加工产品多、附加值低，缺乏生产和安全质量标准，保健产品开发相对滞后，科学研究与工厂化生产联系不紧密以及浪费较严重等.结论：应加大红枣新产品及功能保健产品的开发，利用现代科学与工程技术改善传统加工工艺，加强产品生产规范操作，建立卫生质量安全标准以及提高产品综合利用效率.

关键词：红枣；加工利用；问题与建议

来源出版物：西北农林科技大学学报（自然科学版），2010，38（6）：102-108入选年份：2013

近30年来中国农作物秸秆资源量的时空分布

朱建春，李荣华，杨香云，等

摘要：：目的：分析1978—2009年中国农作物秸秆产量的变化，并估算2009年中国农作物秸秆资源的数量和地理分布.方法：在已有研究的基础上，筛选出合适的秸秆系数，对中国田间秸秆产量进行全面、系统的估算，同时结合地理信息软件 ArcView，对其时空分布进行分析.结果：随着农业综合生产能力的提高，中国田间秸秆总量总体上呈不断增长的趋势；2009年全国作物秸秆总量达69841.92万t；从种植结构的角度进行分析发现，稻谷、小麦和玉米秸秆依然是中国主要的农作物秸秆类型；中国农作物秸秆的分布基本上以400 mm等降水量线为界，其产量由西北向东南呈逐渐增加的趋势.结论：中国的农作物秸秆分布具有一定的地域特征，且产量较大，具有可观的新能源开发利用前景.

关键词：田间作物秸秆；产量估算；空间分布；秸秆系数

来源出版物：西北农林科技大学学报（自然科学版），2012，40（4）：139-145入选年份：2013

生物质炭对红壤性质和黑麦草生长的影响

黄超，刘丽君，章明奎

摘要：为了解生物质炭施用对红壤性质的改良效果，采用盆栽试验研究不同生物质炭投入量对2种不同肥力水平红壤质量指标的影响，探讨生物质炭施用对黑麦草生长的影响.结果表明：红壤施用生物质炭不仅大大提高了土壤碳库，还可降低土壤酸度，增加土壤pH值和盐基饱和度，提高土壤水稳定性团聚体数量，增加土壤速效磷、速效钾和有效氮，增强土壤保肥能力，改善植物生长环境，促进黑麦草的生长；生物质炭施用量为10和50 g·kg-1时，经1年的培养试验后2个研究土壤的有机碳、速效P、速效K和盐基饱和度分别比对照增加31%～744%、14%～215%、6%～110%和17%～82%，pH值增加0.11～0.40个单位；生物质炭的改善作用在肥力水平较低的土壤上明显高于肥力水平较高的土壤，改善效果随生物质炭用量的增加而增加，而在肥力水平较高的土壤中，高量施用生物质炭（200 g·kg-1）可导致土壤微生物生物量下降，对黑麦草的生长产生轻微的抑制作用.

关键词：生物质炭；红壤；养分；结构；生物量

来源出版物：浙江大学学报（农业与生命科学版），2011，37（4）：439-445入选年份：2013

双分子荧光互补技术（BiFC）分析玉米SSⅠ与PPDK1之间的蛋白互作

崔喜艳，张继晓，窦瑶，等

摘要：目的：分析玉米胚乳可溶性淀粉合成酶（SSⅠ）与质体型糖酵解途径关键催化酶丙酮酸磷酸双激酶（PPDK1）的蛋白互作关系，揭示可能发生互作的亚细胞位置.方法：采用酶切连接的方法构建326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1双分子荧光互补表达载体，转化农杆菌EHA105，瞬时浸染烟草叶片组织，激光共聚焦显微镜下观察SSⅠ和PPDK1相互作用产生的荧光信号.结果：双酶切试验鉴定表明，326-CYCHA-ss1和326-CYNEE-ppdk1重组载体构建正确；PCR结果证实，植物表达载体成功转化到农杆菌EHA105中；双分子荧光互补试验中，可观测到SSⅠ和PP-DK1相互结合而产生的黄色荧光信号.结论：证实SSⅠ和PPDK1能够在植物活体细胞内发生真实的蛋白互作.

关键词：SSⅠ；PPDK1；双分子荧光互补技术（BiFC）；瞬时转化；蛋白质互作

来源出版物：西北农林科技大学学报（自然科学版），2013，41（7）：49-53，59入选年份：2013

太白山典型植被类型区药用植物的区系特征

张莹，董国华，杜焰玲，等

摘要：目的：通过对太白山不同植被区域中野生药用植物资源的调查，研究药用植物区系特征，探明不同植被类型下药用植物资源的分布规律.方法：采用样点调查法，并划分阔叶林区、针叶林区、针阔叶混交林区和高山灌草丛区4个植被类型区，在其中设立样方，研究太白山不同植被类型区药用植物的生长型、区系的基本组成及地理成分.结果：太白山典型植被群落中共有野生药用植物221种，隶属75科180属.参照Whittaker生长型系统，将植物生长型划分为草本、灌木、乔木和藤本4类，其中有草本类药用植物119种，灌木类药用植物62种，乔木类药用植物17种，藤本类药用植物23种.针叶林区和阔叶林区药用植物较为丰富，而针阔混交林区和高山灌草丛区药用植物相对比较贫乏.太白山自然保护区75科180属药用植物的科属均可划分为13个分布区类型，分布区类型多样，且与世界各地联系广泛，其中温带性科属占有主要优势.结论：药用植物物种多样性与海拔高度和一定的植被群落类型有关，不同森林群落乔木层植被的生长状况和生长特性，改变了林下光照和养分的循环，从而影响林下植物的生长.

关键词：药用植物；植被类型区；典型植被群落；植物区系基本组成；地理成分

来源出版物：西北农林科技大学学报（自然科学版），2013，41（11）：51-57入选年份：2013

表达Harpin蛋白的芽孢杆菌工程菌的构建及其生防效果

乔俊卿

摘要：目的：Harpins是一类能够诱导非寄主植物过敏性反应和系统获得抗性的蛋白激发子.以解淀粉芽孢杆菌植物亚种为主要活性成分的生物肥料和生物农药制剂因其可以在植物根围定殖、促进植物生长和有效控制植物病害而逐渐成为代替化学农药的潜在选择之一.本研究利用同源重组原理将融合了P43强启动子序列的，来源于水稻细条斑菌的HpaGXooc编码基因hpa1分别插入解淀粉芽孢杆菌FZB42的蛋白水解酶编码基因aprE和nprE位点，并评估了该工程菌的生防、促生功能，以其创制出具有更显著活性和多样性的生防制剂.

方法：利用同源重组原理将HpaGXooc编码基因hpa1分别插入到解淀粉芽孢杆菌FZB42的蛋白水解酶编码基因aprE和nprE位点，构建双拷贝Harpin表达工程菌株FZBHarpin.通过反转录PCR、烟草过敏性反应分析了工程菌中hpa1基因的转录情况及外泌Harpin蛋白的生物活性.同时，采用方形塑料培养皿烟草促生和温室实验评估了工程菌的促生能力和生防效果.

结果：（1）利用限制性酶切、PCR及DNA连接等分子技术分别成功构建了含有hpa1编码基因的同源重组表达载体pGAprEHS、pUNprEKHS及aprE和nprE基因的突变载体pGAprES、pUNprEK（图1、图2）.同源重组表达载体pGAprEHS、pUNprEKHS含有强启动子P43序列，并含有nprB信号肽序列，这有利于Harpin蛋白的持续表达和外泌胞外.（2）采用化学转化法，将突变载体和整合表达载体转入FZB42，分别得到FZB42含有2个拷贝hpa1基因的工程菌FZBHarpin和aprE、nprE同时被破坏的双突变体FZBAN.利用PCR检测转化子基因组的抗生素（Km，Spec）和hpa1片段（图3），将正确转化子于15%甘油中-70℃保存.（3）反转录PCR结果显示，工程菌FZBHarpin中hap1能够正常转录.（4）工程菌FZBHarpin在Landy培养基中培养72 h的发酵菌液，具有和大肠杆菌所表达的Harpin蛋白一样的功能，在烟草叶片上可以激发过敏反应（HR）（图5）.（5）烟草根系促生结果表明：与无菌水和Landy培养基浸种处理相比，FZB42及其衍生菌株都具有促进烟草根系生长的作用.但是工程菌FZBHarpin的效果最好，其处理后烟草根长为64.05 mm，促生效果达30%.此外，aprE、nprE双突变菌株FZBAN的促生能力也比出发菌株FZB42有所提高，但比FZB42Harpin略低（图6）.（6）温室水稻促生和白叶枯病防治实验结果显示，工程菌FZBHarpin和双突变体FZBAN的促生作用和防效均比FZB42显著增强.其中FZBHarpin防治水稻白叶枯病的效果最好，达51.9%，其平均株高为82.58 cm；双突变菌株FZBAN防效为34.5%，其平均株高与工程菌处理无显著差异，为80.33 cm（表3）.

结论：本研究利用同源重组原理成功构建了可持续稳定表达 Harpin激发蛋白的基因工程菌 FZBHarpin，同时，将重组酶Cre/lox系统的lox序列位点引入到相应的抗生素筛选基因两侧，这为切除抗生素标记提供了可能性.该工程菌株的成功构建，有效降低了芽孢杆菌表达载体丢失和基因漂移的危害，使有促生防病效果的Harpin蛋白和生防芽孢杆菌真正结合起来，创制出功能多样的生防制剂.

来源出版物：南京农业大学学报，2013，36（6）：37-44入选年份：2013

菊花B病毒外壳蛋白互作蛋白的筛选

楼望淮，蒋甲福，陈素梅，等

摘要：采用PCR扩增菊花B病毒（CVB）外壳蛋白基因的开放阅读框，构建酵母双杂交系统所需的诱饵表达载体pGBKT7-CVBCP，测序验证后转化 Y2HGold酵母菌.将酵母菌 Y187/pGADT7-cDNA与酵母菌 Y2HGold/pGBKT7-CVBCP进行交配转化，在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade/X-α-Gal平板上筛选蓝色阳性克隆并测序pGADT7-cDNA的插入片段.结果表明：诱饵载体表达产物对酵母无毒性作用，且对报告基因无自激活作用.筛选菊花 cDNA文库初步得到了与 CVB外壳蛋白相互作用的 E3泛素连接酶ARIADNE-like蛋白和ATP结合蛋白，为进一步研究CVB外壳蛋白与寄主的互作机制奠定了基础.

关键词：菊花；菊花B病毒；外壳蛋白；E3泛素连接酶；酵母双杂交

来源出版物：南京农业大学学报，2013，36（4）：43-48入选年份：2013

荷叶总生物碱降脂减肥作用的体内外试验

范婷婷，法鲁克，方芳，等

摘要：通过体内、体外试验探究荷叶总生物碱的降脂减肥作用.给予高脂血症大鼠模型组不同剂量荷叶总生物碱和降脂药物辛伐他汀（阳性药物对照组），观察荷叶总生物碱对高脂血症大鼠体质量、体脂以及血清脂质相关指标的影响；用对硝基苯酚法检测不同质量浓度荷叶总生物碱处理对大鼠胰脂肪酶活性的影响.结果显示：荷叶总生物碱能显著降低高脂血症大鼠的体质量，显著降低血清总胆固醇、血清甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇含量，显著降低谷草转氨酶、谷丙转氨酶活性以及动脉粥样系数，升高高密度脂蛋白胆固醇/血清总胆固醇比值；荷叶总生物碱能抑制脂肪酶活性，抑制类型为非竞争性抑制；在荷叶总生物碱质量浓度为12.5～600μg/ml范围内，对脂肪酶的抑制效果随其质量浓度的增加而增强，在600μg/ml时达到最大抑制率，为25.6%，当荷叶总生物碱质量浓度继续增加时，抑制率趋于平缓，保持在最大值附近.体内、体外试验结果均表明，荷叶总生物碱类物质具有降脂减肥作用，提示其可能具有预防肥胖、调节脂代谢紊乱的功效.

关键词：荷叶总生物碱；肥胖；高脂血症；胰脂肪酶

来源出版物：浙江大学学报（农业与生命科学版），2013，39（2）：141-148入选年份：2013

GC-MS结合化学计量学对茶叶品质的判别研究

陈美丽，唐德松，张颖彬，等

摘要：采用化学计量学（chemometrics）方法分析茶叶香气气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrum，GC-MS）信号，结合感官审评对茶叶品质进行预测判断研究.结果表明：主成分分析（principal component analysis，PCA）对大佛龙井、西湖龙井、茉莉花茶、滇红和祁红的判别效果良好，建立的判别函数经10倍交叉验证正确率达100%，回判率达100%.以茶叶等级（价格）为目标函数，利用偏最小二乘回归（partial least squares regression，PLSR）对GC-MS出峰信号进行回归分析，对大佛龙井、茉莉花茶、滇红和祁红的等级（价格）进行预测，预测值与实际值的相关性依次为0.98、0.94、0.99、0.98，表明利用PLSR分析结合GC-MS对茶叶等级（价格）判别有较好的预测效果.

关键词：GC-MS；化学计量学；茶叶品质；香气；判别

来源出版物：浙江大学学报（农业与生命科学版），2013，39（1）：84-91入选年份：2013