结核分枝杆菌特异性抗原检测在临床诊断中的意义

【摘要】目的　探讨结核菌特异性抗原ESAT-6及CFP-10在肺结核及肺炎患者中诊断与鉴别诊断的意义。方法　就我院肺炎患者20例，肺结核患者40例，通过ELISA实验及PPD实验，对2组人群进行比较，研究结核菌特异性抗原在肺结核及肺炎患者中诊断与鉴别诊断的意义。结果　通过ELISA法对二组人群进行结核菌检测的阳性率的比较，肺结核组与肺炎组相比，P＜0.01。通过皮试法（TST法）进行结核菌素实验对二组人群结核菌阳性率的比较，肺结核组与肺炎组相比，P＞0.05，无统计学意义。结论　ELISA实验法在两组人群的对照中灵敏度特异度均普遍高于PPD实验方法，并且在肺结核和肺炎的鉴别诊断中有统计学意义，说明该实验在临床中对肺结核的鉴别诊断是有价值的。

doi:10.3969/j.issn.1674-9316.2015.01.030

作者单位：110044 沈阳市胸科医院结核内科　　　　　　　　　　通讯作者：张放，E-mail：zh_zhangfang@163.com

Significance of Mycobacterium Tuberculosis-Specific Antigens Detection in the Clinical Diagnosis

ZHAO Hongmei　ZHANG Fang　Department of Internal Medicine – Tuberculosis，China Shenyang Chest Hospital，Shenyang 110044，China

【Abstract】

Objective　To explore the clinical significance of mycobacterium tuberculosis-specific antigens ESAT-6 and CFP-10 in the diagnosis and identification of tuberculosis and pneumonia. Methods　A total of 20 pneumonia patients and 40 tuberculosis patients were selected，and compared between these two groups through ELISA and PPD methods，in order to study the clinical significance of mycobacterium tuberculosis-specific antigens in the diagnosis and identification of tuberculosis and pneumonia. Results　The comparison of the positive rate of mycobacterium tuberculosis detection with ELISA method showed that P＜0.01 in the tuberculosis group and pneumonia group. PPD method was used to conduct the tuberculin test，and the comparison of the positive rate between twogroups showed there was no significant difference between tuberculosis group and pneumonia group （P＞0.05）. Conclusion　ELISA method has the higher sensitivity and specificity than PPD method in comparison between two grups，and has statistical significance in the diagnosis and identification of tuberculosis and pneumonia，indicating that it has the significance in the clinical diagnosis and identification of tuberculosis.

【Key words】Tuberculosis Infection T Cells spot test，Tuberculous meningitis，PPD

近年来结核病疫情呈现上升趋势，是目前感染率和死亡率最高的传染性疾病，结核病的快速诊断是全球控制结核病的重要措施。目前对结核病的诊断主要依据细菌学检查与结核菌素试验，由于结核分枝杆菌本身生长特点以及卡介苗接种在我国的广泛使用，使得这些方法对结核病诊断极为有限。本文通过ELISA实验在血清中检测CFP-10和ESAT-6这两种结核分枝杆菌特异性抗原在确诊肺结核病患者、肺炎患者的表达，与结核菌素实验在上述人群中的检测及这两种实验方法在特异度和灵敏度的比较，研究及评价该实验在临床诊断中的意义，现报告如下。

1　一般资料与方法

1.1　病例资料

选取我院60例住院患者，其中20例为确诊肺炎患者，其中40例为肺结核确诊病例，男性33例，女性27例，年龄16～69岁。所有患者满足以下标准：（1）初治患者尚未开始用结核药；（2）复治患者未用结核药一年以上。

1.2　标本处理

采集所有受试对象（结核病患者在接受抗结核治疗前）空腹静脉血2 ml，3000转/min离心3分钟，分离血清，-20℃保存。

1.3　实验方法测定

1.3.1　ELISA实验 （1）取100 μl不同浓度的标准品及血清加入反应在孔中，25℃放置1小时。（2）冲洗3次后，加入酶标记的抗体，25℃放置1小时。（3）冲洗3次后，加入显色液，20分钟后，在所有孔内都加入100 μl终止液，混匀后即用酶标仪在450 nm处测定各孔溶液的吸光度值。

1.3.2　结核菌素实验（PPD实验）实验方法　TST法选择左侧前臂曲侧中上三分之一处，0.1 ml（5 IU）皮内注射，用26号10 mm长的一次性短斜面的针头和1 ml注射器，注射后应能产生凸起的皮丘，边界清楚，上面可以看见明显的小凹。实验后48～72小时看结果。

2　实验结果

2.1　通过ELISA法对两组人群进行结核菌检测的阳性率的比较，结果肺结核组与肺炎组的P值＜0.01，有统计学意义。两组比较的特异度和灵敏度分别为92.5%和80%。

2.2　通过皮试法（TST法）进行结核菌素实验对两组人群结核菌阳性率的比较得出的结果。肺结核组与肺炎组的P值＞0.05，无统计学意义，灵敏度为95%，特异度仅为5%。

3　讨论

随着全球结核病的迅速增加结核病的诊断和鉴别诊断显得尤为重要。目前结核病的诊断主要依靠痰涂片镜检、结核菌培养、结核菌素实验和影像学等相关实验进行检测。ESAT-6（early secretory antigrntic target-6，ESAT-6）是一种特异性低分子质量分泌性蛋白，仅存在于致病性结核杆菌中。ESAT-6能刺激机体产生特异性免疫球蛋白，因此利用其结合特性，采用ELISA方法检测患者血清抗原和抗体含量，就可以区分MTB感染还是接种了BCG。CFP-10（culture filtrate protein-10）是1998年鉴定出来的低分子质量蛋白，能被特异性识别并释放γ干扰素（interfe ron-γ，IFN-γ），CFP-10 可作为T细胞诊断抗原。CFP-10和ESAT-6联合可使敏感性提高到90%，特异性提高到97%。

本次实验选择了ELISA法检测ESAT-6和 CFP-10在两组人群中的存在情况并与目前一直在沿用的PPD实验进行比较，最终由统计学分析结果评价ELISA在临床应用的可行性。

本研究用ELISA法检测的两组人群进行比较，可以看到肺结核组与肺炎组的比较是有统计学意义，P<0.01，特异度和灵敏度分别为92.5%和80%，说明该方法在区别肺结核与肺炎是可以考虑作为鉴别诊断的依据。我们对TST法进行了统计学分析，在肺结核组与炎症组的比较中没有统计意义，P>0.05，灵敏度和特意度分别为95%和5%，影响该结果的原因也在很大程度上受卡介苗的影响，这也是一直以来不能用PPD实验作为结核病诊断依据的主要原因。实验结果表明ELISA实验法在两组人群的对照中灵敏度特异度均普遍高于PPD实验方法，并且在肺结核和肺炎的鉴别诊断中有统计学意义，说明该实验在临床中对肺结核的鉴别诊断是有价值的。