茶条槭叶石油醚部位化学成分研究△

毕武，何春年*，彭勇，刘延泽，肖培根*

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室，北京 100193)

·基础研究·

茶条槭叶石油醚部位化学成分研究△

毕武1，2，何春年1，2*，彭勇1，2，刘延泽1，2，肖培根1，2*

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室，北京 100193)

目的：研究苦津茶来源植物茶条槭叶石油醚部位的化学成分。方法：应用多种色谱技术进行分离纯化，根据化合物的理化性质和波谱参数鉴定化合物的结构。结果：从茶条槭叶80%乙醇提取物的石油醚萃取部位中分离得到9个化合物，分别鉴定为蒲公英赛醇(1)，豆甾醇-β-D-葡萄糖苷(2)，胡萝卜苷(3)，L-2-O-chiro-肌醇(4)，杨梅萜二醇(5)，豆甾醇(6)，没食子酸乙酯(7)，羽扇豆醇(8)，β-谷甾醇(9)。结论：化合物1、2、5、8为首次从该属植物中分离得到，化合物1-3、5、6、8为首次从该植物中分离得到。

苦津茶；茶条槭；化学成分

茶条槭AcerginnalaMaxim为槭树科槭属植物，资源丰富，分布广泛，主要分布于华北、东北及陕西、甘肃、河南等地，其嫩叶在民间作为苦津茶饮用。苦津茶味微苦、微甘，性寒，归肝经，具有清肝明目的功效，主治风热头痛、肝热目赤、视物昏花等症[1]。

苦津茶作为茶饮使用已经有2000多年的历史，目前仍在民间广泛应用，安徽南部、河南、江苏和东北等地市场上现有流通。苦津茶的化学成分和药理活性研究报道相对较少，研究也不够深入。苦津茶主要含有多酚类成分，包括鞣质和黄酮等类化合物；主要有抗氧化、抗肿瘤、降血糖和抗菌作用。此外，在工业上它还是提取没食子酸的重要资源[1]。

本课题组基于大鼠正常腺上皮经畸变隐窝灶(ACF)模型，实验12周后发现，通过给予苦津茶能够显著减少结肠部位ACF的发生，包括显著减少变性隐窝总数(AC)和平均隐窝数/病灶，表明苦津茶对结直肠癌癌前病变有较好的干预作用，对结直肠癌的预防有潜在价值(数据尚未发表)。为了充分利用这一植物资源以及明确该茶饮发挥保健作用的物质基础，我们对苦津茶来源植物茶条槭叶的化学成分进行系统研究，从其80%乙醇提取物的石油醚萃取部位中分离并鉴定了9个化合物，报道如下。

1 仪器与材料

Bruker AV-600型核磁共振波谱仪；X6型显微熔点测定仪(北京泰克仪器有限公司)。柱色谱硅胶(200～300，300～400目)及薄层色谱硅胶GF254(青岛海洋化工厂)；Sephadex LH-20(瑞典Pharmacia公司)；所用试剂及溶剂均为分析纯。

茶条槭于2010年8月采自吉林省，经中国医学科学院药用植物研究所肖培根研究员鉴定为槭树科植物茶条槭AcerginnalaMaxim.的干燥叶。植物标本保存于中国医学科学院药用植物研究所亲缘学中心实验室(样品编号：2012-KJC-09)。

2 提取与分离

称取茶条槭的干燥叶2.4 kg，用5倍量80%乙醇水溶液冷浸提取4次，提取液减压浓缩至无醇味，加适量水使浸膏分散溶解，用石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，分别得到石油醚、三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水等部位，对各组分进行抗肿瘤活性筛选，结果显示石油醚部位具有较好的活性，因此，对石油醚部位进行了分离纯化。

石油醚浸膏(77.6 g)经硅胶柱色谱(200～300目)，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱(100∶0～1∶1)，流分经TLC检测后合并得到AF1～AF17等17个组分以及化合物1(200 mg)、2(20 mg)和3(30 mg)。AF17组分继续经硅胶柱色谱(300～400目)，石油醚-乙酸乙酯(8∶2～1∶1)梯度洗脱，所得亚组分经Sephadex LH-20凝胶柱色谱纯化，三氯甲烷-甲醇(5∶5)洗脱，得到化合物4(30 mg)。AF7组分经硅胶柱色谱(300～400目)，石油醚-乙酸乙酯(9∶1～1∶1)梯度洗脱，所得亚组分经乙酸乙酯反复洗涤和三氯甲烷重结晶得到化合物5(25 mg)、6(20 mg)、8(23 mg)。AF16组分继续经硅胶柱色谱(300～400目)，石油醚-乙酸乙酯(8∶2～1∶1)梯度洗脱，然后经Sephadex LH-20凝胶柱色谱纯化，甲醇洗脱，最后得到化合物7(50 mg)。AF12组分继续经硅胶柱色谱(300～400目)，石油醚-乙酸乙酯(9∶1～1∶1)梯度洗脱，乙酸乙酯重结晶，得到化合物9(21 mg)。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ：0.80(3H，s，H-23)，0.82(3H，s，H-24)，0.91(3H，s，H-30)，0.93(3H，s，H-28)，0.95(3H，s，H-29)，0.98(3H，s，H-26)，1.09(3H，s，H-25)，3.20(1H，dd，J=4.2，11.4 Hz，H-3)，5.53(1H，dd，J=3.0，8.4 Hz，H-15)；13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ：15.6(C-24)，15.6(C-25)，17.7(C-11)，19.0(C-6)，21.5(C-30)，26.1(C-27)，27.4(C-2)，28.2(C-23)，29.0(C-20)，30.0(C-28)，30.1(C-26)，33.3(C-22)，33.6(C-29)，33.9(C-21)，35.3(C-7)，36.0(C-12)，36.9(C-16)，37.8(C-10)，37.9(C-13)，38.0(C-17)，38.2(C-1)，39.0(C-8)，39.2(C-4)，41.6(C-19)，49.0(C-9)，49.5(C-18)，55.8(C-5)，79.3(C-3)，117.1(C-15)，158.3(C-14)。以上数据与文献[2]报道基本一致，因此鉴定化合物1为蒲公英赛醇(taraxerol)。

化合物2：白色粉末。1H-NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ：0.65(3H，s，H-18)，0.74～0.91(12H，m，H-21，26，27，29)，0.96(3H，s，H-19)，3.42(1H，m，H-3)，4.22(1H，d，J=7.2 Hz，Glc-H-1)，5.03(1H，dd，J=8.4，15 Hz，H-23)，5.15(1H，dd，J=8.4，15 Hz，H-22)，5.33(1H，d，J=4.8 Hz，H-6)；13C-NMR(DMSO-d6，150 MHz)δ：11.8(C-29)，12.1(C-18)，18.8(C-26)，19.1(C-19)，19.7(C-27)，20.9(C-21)，21.1(C-11)，23.8(C-15)，25.5(C-28)，28.7(C-16)，31.3(C-25)，31.3(C-8)，31.4(C-7)，36.2(C-10)，36.2(C-23)，36.8(C-1)，39.1(C-12)，40.1(C-20)，41.7(C-4)，41.8(C-13)，49.6(C-24)，50.5(C-9)，55.3(C-17)，55.4(C-23)，56.2(C-14)，61.1(Glc-C-6)，70.1(Glc-C-4)，73.4(Glc-C-2)，76.7(Glc-C-3)，76.7(Glc-C-5)，76.9(C-3)，100.8(Glc-C-1)，121.2(C-6)，128.8(C-23)，138.0(C-22)，140.4(C-5)。以上数据与文献[3]报道基本一致，因此鉴定化合物2为豆甾醇-β-D-吡喃葡萄糖苷(stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside)。

化合物3：白色粉末。1H-NMR(DMSO-d6，600 MHz)和13C-NMR(DMSO-d6，150 MHz)数据与文献[3]报道基本一致，因此鉴定化合物3为胡萝卜苷(daucosterol)。

化合物4：白色粉末。1H-NMR(D2O，600 MHz)δ：4.28(1H，t，J=3.6 Hz，H-1)，4.07(1H，t，J=3.6 Hz，H-6)，3.75(1H，dd，J=3，9.6Hz，H-5)；3.62(2H，m，H-3，4)，3.46(3H，s，H-OCH3)，3.41(1H，dd，J=3，9 Hz，H-2)；13C-NMR(D2O，150 MHz)δ：67.1(C-1)，80.1(C-2)，71.9(C-3)，72.8(C-4)，70.3(C-5)，71.3(C-6)，56.9(-CH3)。以上数据与文献[4]报道基本一致，因此鉴定化合物4为L-2-O-甲基-chiro-肌醇(L-2-O-methyl-chiro-inositol)。

化合物5：白色粉末。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ：5.56(1H，dd，J=3，8.4 Hz，H-15)，3.22(1H，dd，J=11.4，4.2 Hz，H-3)，1.12(3H，s)，1.01(3H，s)，0.98(3H，s)，0.96(3H，s)，0.94(3H，s)，0.90(3H，s)，0.83(3H，s)；13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ：158.3(C-14)，117.1(C-15)，79.3(C-3)，63.3(C-28)，55.7(C-5)，49.5(C-18)，48.9(C-9)，41.5(C-19)，40.5(C-4)，39.2(C-8)，39.0(C-17)，38.0(C-13)，37.9(C-1)，37.8(C-10)，36.0(C-7)，33.5(C-21)，33.3(C-29)，33.0(C-16)，30.1(C-12)，29.9(C-26)，29.0(C-20)，28.2(C-22)，27.3(C-2)，26.1(C-23)，25.9(C-27)，21.5(C-30)，19.0(C-6)，17.7(C-11)，15.6(C-25)，15.6(C-24)。以上数据与文献[5]报道基本一致，因此鉴定化合物5为杨梅萜二醇(myricadiol)。

化合物6：白色针晶。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ：5.38(1H，H-6)，5.18(1H，dd，J=15，8.4 Hz，H-22)，5.04(1H，dd，J=15，9 Hz，H-23)，3.55～3.56(1H，m，H-3)，0.71(1H，s，H-18)，1.06(1H，s，H-29)；13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ：141.0(C-5)，138.5(C-22)，129.5(C-23)，121.9(C-6)，72.0(C-3)，57.0(C-14)，56.3(C-17)，51.4(C-24)，50.3(C-9)，42.5(C-4)，42.4(C-13)，39.9(C-12)，37.5(C-1)，36.7(C-10)，36.3(C-20)，32.1(C-7，8)，31.9(C-2，25)，29.1(C-16)，28.4(C-28)，24.5(C-15)，23.3(C-27)，21.4(C-26)，21.3(C-11，21)，19.2(C-19)，12.2(C-18)，12.1(C-29)。以上数据与文献[6]报道基本一致，因此鉴定化合物6为豆甾醇(stigmasterol)。

化合物7：无色羽毛状结晶。1H-NMR(DMSO-d6，600 MHz)δ：9.24(2H，s，-OH)，8.93(1H，s，-OH)，6.94(2H，d，H-2，6)，4.20(2H，q，J=7.2 Hz，-CH2-)，1.27(3H，t，J=7.2 Hz，-CH3)；13C-NMR(DMSO-d6，150 MHz)δ：165.8(-COOH)，145.5(C-3，C-5)，138.3(C-4)，119.6(C-1)，108.4(C-2，C-6)，60.0(-CH2-)，14.2(-CH3)。以上数据与文献[7]报道基本一致，因此鉴定化合物7为没食子酸乙酯(ethyl gallate)。

化合物8：白色针晶。1H-NMR(CDCl3，600 MHz)δ：0.76(3H，s，H-24)，0.79(3H，s，H-28)，0.83(3H，s，H-25)，0.943(3H，s，H-27)，0.98(3H，s，H-23)，1.03(3H，s，H-26)，1.68(3H，s，H-30)，2.38(1H，td，J=10.8 Hz，6.0 Hz，H-19)，3.19(1H，dd，J=11.4，4.8 Hz，H-3)，4.57(1H，s，H-29a)，4.68(1H，s，H-29b)；13C-NMR(CDCl3，150 MHz)δ：151.2(C-20)，109.5(C-29)，79.2(C-3)，55.5(C-5)，50.7(C-9)，48.5(C-18)，48.2(C-19)，43.2(C-17)，43.0(C-14)，41.1(C-8)，40.2(C-22)，39.1(C-4)，38.9(C-1)，38.3(C-13)，37.4(C-10)，35.8(C-16)，34.5(C-7)，29.8(C-21)，28.2(C-23)，27.7(C-2)，27.6(C-15)，25.4(C-12)，21.1(C-11)，19.5(C-30)，18.5(C-6)，18.2(C-28)，16.3(C-25)，16.2(C-26)，15.6(C-24)，14.8(C-27)。以上数据与文献[8-9]报道基本一致，因此鉴定化合物8为羽扇豆醇(lupeol)。

化合物9：白色针晶，10%硫酸乙醇溶液显紫色。其TLC与β-谷甾醇对照品的Rf值一致，且混合后熔点不下降。13C-NMR(CDCl3，150 MHz)数据与文献[10]报道基本一致，因此鉴定化合物9为β-谷甾醇(β-sitosterol)。

4 结果与讨论

鉴定的9个化合物中，1、2、5、8为首次从该属植物中分离得到，化合物1-3、5、6、8为首次从该植物中分离得到。

近年来研究表明，一些五环三萜类化合物具有较好的抗肿瘤活性[11-12]。本文从茶条槭叶中分离得到的两个蒲公英赛烷类五环三萜化合物蒲公英赛醇(1)和杨梅萜二醇(5)的抗肿瘤活性研究仅有初步报道：蒲公英赛醇对由对苯二甲酸(TPA)所致EB病毒早期抗原(EBV-EA)肿瘤细胞系显示出很强的细胞毒活性[13]；对胃癌AGS细胞增殖具有显著的抑制活性[14]。杨梅萜二醇对肺癌A549细胞增殖具有一定的抑制活性[15]。因此，为了进一步明确茶条槭叶及其所含化合物的抗肿瘤活性，我们对化合物1和5进行了初步的抗肿瘤活性筛选。化合物1在浓度为50 μmol·L-1时，对肺癌A549细胞和乳腺癌BT20细胞增殖的抑制率分别为-9.8%和29.6%，浓度为100 μmol·L-1时，抑制率分别为-1.1%和39.5%；化合物5在浓度为50 μmol·L-1时，对这两种细胞增殖的抑制率分别为5.3%和37.1%，浓度为100 μmol·L-1时，抑制率分别为11.8%和45.1%。结果表明，化合物1和5对A549细胞增殖抑制作用较弱，对BT20细胞增殖均具有较好的抑制作用。

此外，在分离过程中，我们发现茶条槭叶中化合物1的含量较高，可作为提取该化合物的重要资源。对茶条槭叶其他萃取部位(三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇和水)的化学成分分离鉴定也正在进行中。

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ChemicalConstituentsfromPetroleumEtherFractionofAcerginnalaLeaves

BIWu1，2，HEChunnian1，2*，PENGYong1，2，LIUYanze1，2，XIAOPeigen1，2*

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience，PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；2.KeyLaboratoryofBioactiveSubstancesandResourcesUtilizationofChineseHerbalMedicine，Beijing100193，China)

Objective：To investigate the chemical constituents of the petroleum ether fraction ofAcerginnala.Methods：The chemical constituents were isolated by silica gel and Sephadex LH-20 chromatography，and the structure were identified by NMR and physicochemical properties.Results：Nigh compounds were isolated from the petroleum ether fraction of 80% ethanol extracts of theAcerginnalaleaves and identified as follows：taraxerol(1)，stigmasterol-3-O-β-D-glucopyranoside(2)，daucosterol (3)，L-2-O-methyl-chiro-inositol (4)，myricadiol (5)，stigmasterol (6)，ethyl gallate (7)，lupeol (8)，β-sitosterol (9).Conclusion：Compounds1，2，5and8were obtained from the genus of this plant for the first time；compounds1-3，5，6and8were obtained from this plant for the first time.

Ku jin Tea；Acerginnala；chemical constituents.

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.6.006

2014-11-25)

“十二五”科技部项目支撑计划(2012BAI28B002)；“协和青年基金”和“中央高校基本科研业务费专项资金”(3332013077)

*

肖培根，院士，博士生导师，研究方向：中药资源与药用植物亲缘学；Tel：(010)57833166，E-mail：pgxiao@implad.ac.cn；何春年，副研究员，研究方向：药用植物亲缘学及天然产物化学；Tel：(010)57833165，E-mail：cnhe@implad.ac.cn