RP－HPLC 法测定马齿苋中木犀草素的含量

□郭晓宇

马齿苋为马齿苋科一年生草本植物。首载于《神农本草经》。《本草纲目》记载:“其叶并比如马齿，而性滑利似苋，故名。”因叶青、梗赤、花黄、根白、子黑又称为五行草、五方草或五行菜。它又称“长寿菜”或“长命菜”，含有非常丰富的人体必需营养物质，有助于保护健康，延长寿命。我国固有的马齿苋属植物共有6 种，即马齿苋、毛马齿苋、大花马齿苋、四瓣马齿苋、沙生马齿苋和小琉球马齿苋，其中马齿苋最为常见。马齿苋作为国家卫生部认定的既可药用又可食用的野生植物之一，在我国各地分布比较广泛。其有消炎、解暑、利湿、利尿等功能。

据研究，马齿苋药用、食用功能意义重大，使得应用前景较为广泛。目前，虽有文献报道研究其化学成分，但采用高效液相色谱的方法测定其中成分的鲜有报道。为提高该物应用的安全性，有必要对其进行质量控制。本研究采用RP －HPLC 法测定其木犀草素的含量，该方法简便、快捷、准确、可靠、重复性好，可为其的质量监测提供一定的理论依据。

一、仪器与试药

(一)仪器。高效液相色谱仪。

(二)试药。木犀草素对照品(批号:111520 －200201)，购于中国食品药品检定研究院;马齿苋(市售);甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，乙腈为色谱纯，水为重蒸水。

图1 对照品和样品HPLC 图

二、方法与结果

(一)标准品溶液的制备。准确称量恒重的木犀草素标准品10．12mg，放入50ml 容量瓶中，用甲醇作为溶剂进行稀释定容，浓度即为0．2024 mg/mL 的木犀草素标准品溶液。

(二)样品溶液的制备。称取经干燥粉碎的马齿苋约10g，精密称定，放于三角瓶中，加入100ml 甲醇，搅拌均匀，超声处理(250 W，50 kHz)提取30min，冷却至室温，加入甲醇补足量，过滤，留滤液。

(三)色谱条件与系统适应性试验。色谱柱:shim－pack VP－ODS C18(250 mm×4．6 mm，5 μm);流动相:乙腈－0．2%磷酸水溶液(60:40);进样量:10 μL;流速1．0 mL/min。各主成分与相邻峰之间的分离度大于1．5。

分别取对照品和供试品溶液注入高效液相色谱仪中进行测定。(见图1)

(四)线性关系。精密称取木犀草素11．54 mg、放入10ml容量瓶中，定容用甲醇，之后精确吸取0．1 mL、0．5 mL、1 mL、2 mL、5 mL、10 mL 置10 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。注入液相色谱仪分析，以峰面积对浓度做线性回归方程，结果见表1。

表1 回归方程、相关系数和线性范围表(n= 6)

(五)稳定性试验。按照上述条件，取样品每隔4h 进行测定，进样6 次，以测定其稳定性能，测得木犀草素峰面积的RSD为1．2%。结果表明供试品溶液在24 h 内稳定性良好。

(六)精密度试验。得出结果样品的稳定性能在24h 以内是良好的。

表2 加样回收率实验数据表

(七)重复性试验。取样品6 份，按样品溶液的制备方法制备溶液并依法测定，结果木犀草素含量的RSD 为0．6%(n =6)，结果表明重复性良好。

(八)回收率试验。准确量取样品适量，加入适量的标准品，按上述方法处理，计算回收率，得出本实验方具有较好的加样回收率，结果见表2。

(九)样品含量测定。按样品溶液项下制备方法和色谱条件对3 批样品中木犀草素进行分析，计算含量，结果见表3。

表3 样品中各成分含量测定结果

三、结果与讨论

(一)流动相的选择。本研究分别考察乙腈－水、甲醇－水以及乙腈－0．2%磷酸水溶液作为流动相，结果显示，乙腈－0．2%磷酸水溶液(60:40)作为流动相，色谱峰峰形对称，分离效果好，分离度大于1．5，理论塔板数高，木犀草素拖尾小且无杂峰干扰。

(二)检测波长的选择。本研究选用木犀草素成分的最大吸收波长为设定波长，采用该波长方法检测，分析简便、快捷。

(三)提取方法的选择。本实验对提取溶剂、提取溶剂的溶度、提取时间、提取方法等进行综合考察。结果表明，样品提取时，超声仪采用功率为250 W，频率为50 kHz，超声30 min 提取完全，效果好，操作时间短，故供试品溶液采用上述制备方法。

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