果胶酶和纤维素酶对五龙鹅免疫性能和血清生化指标的影响

■李星晨 毛倩倩 王宝维 葛文华 张名爱 李文立

（1.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛 266109；2.青岛农业大学优质水禽研究所，山东青岛 266109）

果胶酶和纤维素酶分别是指能够分解果胶质和纤维素的一类酶的总称。王冬群研究表明，日粮中添加柑橘等含果胶高的饲料显著降低了肉鸡的生产性能和饲料中DM、OM、EE、淀粉及氨基酸的消化率[1]。Lin研究发现，饲料中添加果胶含量高的原料能显著降低雏鹅的生长速度，影响机体免疫性能[2]。果胶酶是一个复合酶系，能够裂解存在于植物细胞壁和细胞胞间质层的果胶，使植物细胞组织崩解，释放营养物质，使营养成分得到充分利用[3]。Choct研究发现，在玉米-豆粕型日粮中添加果胶酶和纤维素酶能有效消除其所含果胶等NSP的抗营养作用[4]，降低对免疫性能的负面影响。关于日粮中添加果胶酶和纤维素酶对五龙鹅免疫性能和血清生化指标的影响，国内外未见报道。本试验通过研究高纤维基础日粮中添加果胶酶和纤维素酶对五龙鹅免疫性能和血清生化指标的影响，为鹅高纤维基础日粮中果胶酶和纤维素酶的合理添加提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

果胶酶（5 000 U/g）和纤维素酶（20 000 U/g）由山东潍坊苏柯汉生物科技有限公司提供。

1.2 试验设计与饲粮配方

选216只1日龄健康五龙鹅随机分成6组，每组3个重复，每个重复12只，公母各半。第Ⅰ组为对照组，饲喂基础饲粮，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组在基础饲粮中分别添加5 000、10 000、15 000 U/kg的果胶酶，Ⅴ组在基础饲粮中添加5 000 U/kg的果胶酶和40 000 U/kg的纤维素酶，Ⅵ组添加10 000 U/kg的果胶酶和40 000 U/kg的纤维素酶(纤维素酶按厂家最佳效果推荐量添加)。基础饲粮参照美国NRC（1994）鹅饲养标准和中国饲料营养成分表配制，以玉米-豆粕为主要原料，玉米秸秆为纤维源，分（1～4周龄）和（5～16周龄）2个阶段，基础饲粮组成及营养水平见表1。

1.3 饲养管理

试验五龙鹅采用自由采食和饮水，全期舍饲，自配混合料，喂料采用少喂勤添。育雏期随时调节育雏温度，育雏前 3 周温度分别为 28～30、26～27、24～25℃，3周龄以后可逐渐降到常温。光照：第1～2周，23 h；第3周，18 h；第4～12周采用自然光照。平均相对湿度65%。按常规程序进行疫苗的免疫接种：1日龄小鹅瘟0.5 ml/只、12日龄鹅副黏二联灭活病毒疫苗 0.4 ml/只，36日龄禽流感（H5/H9）二价灭活油苗0.6 ml/只。每天记录各组采食量、死淘数等相关数据，并注意观察鹅的生长状况。

2 测定指标及方法

2.1 免疫指标的测定

2.1.1 免疫器官指数的测定

第4、16周龄时，从每个重复中抽取2只试验鹅，共36只，屠宰，取胸腺、脾脏、法氏囊，仔细剔除脂肪后，用吸水纸吸干表面水分和其他物质，准确称重，并记录数据，按下式计算胸腺、脾脏和法氏囊指数：

免疫器官指数（mg/g）=免疫器官重量/活体重。

表1 基础饲粮组成及营养水平(风干基础)

2.1.2 禽流感抗体效价的测定

按常规程序，对试验鹅群进行禽流感免疫接种，每隔7 d随即抽取各重复组试验鹅2只，翅静脉采血，分离血清，采用血凝和血凝抑制试验法（HA-HI）测定鹅禽流感抗体滴度。

2.2 血液生化指标的测定

第4、16周龄时，从每个重复中抽取2只试验鹅，共36只，翅静脉采血，离心制得血清样品，分装，-40℃冷冻保存。测定血糖、总胆固醇、甘油三酯、尿酸、尿素氮的水平和谷丙转氨酶活力。上述指标均用试剂盒测定，所用试剂盒购自南京建成生物研究所。

2.3 数据处理

采用SPSS 19.0软件中单因素方差分析(Oneway ANOVA)中的LSD法进行多重比较。试验数据以“平均值±标准差”表示。P＜0.05和P＜0.01分别为差异显著和极显著水平。

3 结果与分析

3.1 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅免疫性能的影响

3.1.1 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅免疫器官指数的影响（见表2）

表2 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅免疫器官指数的影响(mg/g)

由表2可见，4周龄时，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ组胸腺指数均高于Ⅰ组，但差异不显著(P＞0.05)；Ⅳ和Ⅵ组脾脏指数高于Ⅰ组，Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ组脾脏指数低于Ⅰ组，但差异均不显著(P＞0.05)；Ⅵ组法氏囊指数高于Ⅰ组，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ组低于Ⅰ组，但差异均不显著(P＞0.05)

16周龄时，Ⅵ组胸腺指数高于Ⅰ组，其余组胸腺指数均低于Ⅰ组，但差异均不显著(P＞0.05)，Ⅵ组脾脏指数和法氏囊指数显著高于对照组（P＜0.05）。

3.1.2 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅禽流感抗体效价的影响（见表3）

表3 果胶酶和纤维素酶对鹅禽流感抗体效价的影响(log2)

由表3可见，免疫前和免疫后第7、14、21 d时，试验组鹅血清禽流感抗体效价与对照组相比差异均不显著(P＞0.05)。

3.2 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅血清生化指标的影响（见表4）

表4 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅血液生化指标的影响

由表4可见，4周龄时，血糖、总胆固醇、甘油三酯和谷丙转氨酶含量有增高的趋势，但差异不显著(P＞0.05)；尿酸和尿素氮有降低的趋势，但差异不显著(P＞0.05)；各组之间血清总蛋白无显著差异(P＞0.05)。

16周龄时，Ⅵ组血糖、尿酸和尿素氮与Ⅰ组相比，差异显著（P＜0.05），Ⅲ和Ⅳ组影响不显著（P＞0.05）；Ⅴ和Ⅵ组血清总蛋白显著高于Ⅰ组（P＜0.05）；其余各指标组间差异均不显著(P＞0.05)。

4 讨论

4.1 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅免疫性能的影响

4.1.1 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅免疫器官指数的影响

家禽的重要免疫器官主要有胸腺、脾脏和法氏囊，免疫器官指数是反映动物机体免疫器官的生长发育状况的指标，在一定范围内，免疫器官指数越高，说明禽类的免疫性能越好。单一酶制剂对家禽免疫性能影响的研究相对较少，高峰研究认为，NSP酶对家禽免疫功能的影响可能与其能提高养分利用率有关[5]。王芬等研究发现，东北白鹅日粮中添加复合纤维素酶能提高免疫器官指数和血清中IgG及IgA含量，增强鹅的免疫功能[6]。王宝维等认为，肉鸡日粮中添加果胶酶对免疫器官指数的影响不显著，但与纤维素酶配合使用则能够显著提高肉鸡的免疫器官指数[7]。本试验研究结果发现，添加果胶酶制剂对4周龄五龙鹅免疫器官指数无显著影响；10 000 U/kg果胶酶与40 000 U/kg纤维素酶配合使用能显著提高16周龄五龙鹅脾脏指数和法氏囊指数，表明果胶酶和纤维素酶配合使用对五龙鹅后期免疫器官的生长发育有积极的影响作用，与王宝维等[7]研究结果有一定一致性。

4.1.2 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅禽流感抗体效价的影响

禽流感抗体效价是反映机体禽流感免疫状态的指标。抗体效价水平的高低直接反映了机体体液免疫状态，同时也表明动物机体抵御疾病能力的强弱。目前，国内外关于NSP酶单酶制剂对禽流感抗体效价的影响研究相对较少，影响效果和作用机理尚不明确。朱忠珂认为，添加酶制剂对肉鸡血液新城疫抗体效价提高不显著[8]。王宝维认为，添加果胶酶对肉鸡新城疫抗体效价影响不显著，果胶酶和纤维素酶能显著提高肉鸡新城疫抗体效价[7]。本试验结果显示，添加果胶酶和纤维素酶制剂对五龙鹅流感抗体效价效果影响不显著。与上述研究结果不一致，可能与动物品种、动物日龄、饲粮中粗纤维含量、酶的组成和酶活等因素的差异存在一定关系，或是因为不同抗体之间相互影响，导致试验结果不一致。

4.2 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅血清生化指标的影响

4.2.1 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅血糖水平的影响

血清中许多生化指标可能受发育阶段、内分泌状态和营养水平的影响。血糖是动物机体主要能量来源，可参与机体的各种代谢[9]，为其提供能量，血糖水平反映了通过肠道吸收进入血液葡萄糖的量，黄燕华研究发现，其水平的高低与碳水化合物消化率有关[10]。姜晓霞研究发现，肉鸡日粮中添加果胶酶能显著改善血糖水平[11]。刘长忠研究发现，NSP酶制剂能显著提高血清中的葡萄糖浓度[12]。本试验结果表明，日粮中单独添加果胶酶和纤维素酶对4周龄五龙鹅血糖浓度无显著影响，10 000 U/kg果胶酶和40 000 U/kg纤维素酶配合使用可显著提高16周龄五龙鹅血糖浓度，试验结果与之前研究结果有一定一致性。

4.2.2 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅血清总胆固醇、甘油三酯和谷丙转氨酶活性的影响

Hemier等研究发现，家禽体内脂肪沉积的程度主要取决于血液中甘油三脂和胆固醇水平，当动物机体对脂类的消化吸收不良时，总胆固醇和甘油三酯的浓度就会明显下降[13-14]。闻治国研究发现，在北京填鸭日粮中添加复合酶制剂能显著血清中的甘油三酯，对总胆固醇含量影响不显著[9]。姜晓霞研究发现，肉鸡日粮中添加果胶酶对血清中总胆固醇、甘油三酯的水平和谷丙转氨酶的活力无显著影响；与纤维素酶协同作用，能显著改善或提高上述指标的水平与活力[11]。张兴认为，在玉米-豆粕型日粮中添加复合NSP酶可显著提高肉鸡血清中的甘油三脂[15]。Daly等研究发现谷丙转氨酶是一种重要的转氨酶，能催化氨基的转移，其活性代表肝脏合成蛋白质的能力[16]。

张芹认为，添加酶制剂能提高谷丙转氨酶的活性[17]。王金伟研究发现，断奶仔猪中添加酶制剂对谷丙转氨酶活性影响不显著[18]。本试验研究结果表明，日粮中添加果胶酶和纤维素酶对五龙鹅血清总胆固醇、甘油三酯和谷丙转氨酶活性影响不显著。导致这种差异的原因，可能与动物品种、动物日龄、饲粮中粗纤维含量、酶的组成和酶活等因素的差异存在一定关系。

4.2.3 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅血清蛋白水平的影响

王金伟研究发现，血清蛋白参与营养物质的转运，其含量的高低变化，可反映机体蛋白质合成代谢的强弱[19]。张兴研究表明，肉鸡玉米-豆粕型日粮中添加NSP酶对血清总蛋白有提高的趋势[16]。本试验结果表明，单独添加果胶酶对五龙鹅血清总蛋白含量影响不显著；10 000 U/kg果胶酶和40 000 U/kg纤维素酶配合使用能提高16周龄五龙鹅血清蛋白含量，与张芹的研究结果基本一致，这可能是由于添加果胶酶和纤维素酶后能增加日粮中NSP的分解，增加肠道对蛋白质的消化吸收，使血液中总蛋白含量升高[18]。

4.2.4 果胶酶和纤维素酶对五龙鹅血清尿酸、尿素氮水平的影响

姜晓霞研究发现，肉鸡日粮中添加果胶酶能显著改善血清中尿酸、尿素氮水平[11]。血清中尿酸和尿素氮可反映家禽对蛋白质在体内代谢利用情况[20]，血液尿素氮含量可以准确的反映体内氨基酸代谢的平衡状态，血液尿素氮浓度低，氨基酸代谢平衡良好[21]，尿酸排出量低[22]。张芹研究发现，添加酶制剂能极显著降低21、42日龄肉鸡血液中尿酸含量[17]。安娇阳研究发现，肉鸡饲粮中添加纤维素酶可显著降低前期肉鸡血液尿素氮的浓度，对后期肉鸡血液尿素氮浓度无显著影响[23]。本试验结果显示，日粮中单独添加果胶酶对五龙鹅血清尿酸和尿素氮影响不显著，10 000 U/kg果胶酶与40 000 U/kg纤维素酶配合使用能显著降低16周龄五龙鹅血清中尿酸和尿素氮的含量，与之前的研究结果基本一致。同时也存在一定的差异，可能与动物品种、动物日龄等因素的差异有关，还有待于进一步研究。

5 结论

①日粮中单独添加果胶酶对4周龄和16周龄五龙鹅免疫性能和血清生化指标无显著影响。

②日粮中10 000 U/kg果胶酶与40 000 U/kg纤维素酶配合使用的效果明显，可显著提高16周龄五龙鹅脾脏指数、法氏囊指数、血糖和血清总蛋白浓度，显著降低16周龄五龙鹅血清尿酸和尿素氮浓度。

③日粮中10 000 U/kg果胶酶与40 000 U/kg纤维素酶配合使用仅能显著提高16周龄五龙鹅的相关指标，对4周龄五龙鹅免疫性能和血清生化指标无显著影响。