日本血吸虫Sj14 编码基因转染对树突状细胞功能的影响*

罗金萍，王若愚，许培培，戴 波，余军林，沈定文

(湖北科技学院基础医学院，湖北 咸宁 437100)

树突状细胞(DC)是目前已知的体内功能最强的一种专职抗原提呈细胞(APC)，能在体内、外直接活化初始T 淋巴细胞［1］。目前基因转染DC已经广泛应用于抗感染、抗肿瘤、移植免疫和自身免疫性疾病等方面。过去的研究证实，多种肿瘤抗原、细胞因子，以及血吸虫疫苗候选抗原，如Sj26 和Sj23 等靶抗原编码基因转染DC 后均能促进DC 成熟，同时增强DC 的生物学活性［2～7］。本实验利用流式细胞术(FCM)和混合淋巴细胞反应(MLR)检测日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14)编码基因转染对DC 功能的影响，为探讨利用DC 混合多价核酸疫苗诱导抗血吸虫感染保护性免疫作用打下基础，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 DC 细胞株 DC 细胞株MTSC4 由北京大学医学部免疫学系陈慰峰教授惠赠，常规方法传代培养。

1.2 Sj14 编码基因转染DC 按照LipofectamineTM2000 试剂盒(美国Invitrogen 公司)使用说明书，参照沈定文的方法［6］分别将重组质粒pcDNA3-Sj14、空载质粒pcDNA3 转染至DC。基因转染后以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印渍(Western blot)和间接荧光抗体试验(IFA)检测Sj14 在DC 中的表达。

1.3 FCM 检测DC 摄取抗原能力 参照沈定文的方法［6］采用FCM 分别检测pcDNA3-Sj14 基因转染的DC、pcDNA3 转染的DC 和未转染的DC 摄取异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗鼠IgG(北京中山生物技术有限公司)的荧光强度。

1.4 MLR 检测DC 对同种异体T 淋巴细胞的刺激作用 以正常BALB/c 小鼠脾脏淋巴细胞作为反应细胞，参照沈定文的方法［6］采用MLR 分别检测pcDNA3-Sj14 基因转染的DC、pcDNA3 转染的DC 和未转染的DC 对同种异体T 淋巴细胞的A492 值，按下面的公式计算刺激指数(SI)。SI=实验组A492 值/对照组A492 值。

2 结果

2.1 DC 摄取抗原能力 pcDNA3-Sj14 编码基因转染的DC 摄取FITC 标记羊抗鼠IgG 的荧光强度显著低于pcDNA3 转染的DC 和未转染的DC(P＜0.01)，pcDNA3-Sj14 编码基因转染的DC 摄取抗原的能力明显降低，表明Sj14 编码基因转染能促进DC 成熟，见图1。

图1 Sj14 编码基因转染的DC 摄取抗原的能力

2.2 DC 对同种异体T 淋巴细胞的刺激作用pcDNA3-Sj14 编码基因转染的DC 对同种异体T淋巴细胞的刺激指数明显高于pcDNA3 转染的DC 和未转染的DC(P ＜0.01)，表明pcDNA3-Sj14编码基因转染可增强DC 的生物学活性，见图2。

图2 Sj14 编码基因转染的DC 对同种异体T 淋巴细胞的刺激作用

3 讨论

研究证实，DC 未成熟时具有极强的抗原内吞和加工处理能力，当DC 摄取抗原或受到某些因素的刺激后，便可以分化成熟，成熟DC 摄取抗原的能力降低，其抗原提呈能力增强［8］。本实验结果Sj14 编码基因转染的DC 摄取FITC 标记羊抗鼠IgG 的荧光强度显著低于空质粒转染的DC 和未转染的DC，表明Sj14 编码基因转染DC 后促进了DC 的成熟。

DC 在免疫应答中具有独特作用，能在体内外激发T 细胞增殖，促进初始CD4+T 细胞向Th1 细胞分化［1］。其可能的机制:活化的DC 一方面形态发生变化，另一方面高表达丰富的协同刺激分子和黏附分子如CD1a、CD40、CD80、CD86、MHCⅠ、Ⅱ类分子，有利于DC 与T 淋巴细胞的接触，增强DC 对T 细胞的促增殖作用［8］。本实验结果Sj14 编码基因转染的DC 对T 淋巴细胞的刺激指数明显高于空质粒转染的DC 和未转染的DC，表明Sj14 编码基因转染增强了DC 的生物学活性。

本研究及我们以前的相关研究结果表明，血吸虫疫苗候选抗原Sj14、Sj26、Sj23 的编码基因转染DC 后均能活化DC，并且增强DC 的生物学活性，下一步我们将探讨利用DC 混合多价核酸疫苗诱导抗日本血吸虫感染保护性免疫作用，为血吸虫疫苗研究打下坚实的基础。

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［7］沈定文，罗金萍，李雍龙，等.血吸虫Sj23 基因转染对树突状细胞功能影响［J］.中国公共卫生，2008，24(9):1098

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