奥林巴斯AU5400检测血清抗链球菌溶血素O的测量范围评价

张淑琼，王 凡（.云南省昆明市第三人民医院检验科 65004；.云南省第一人民医院检验科，昆明 65003）

抗链球菌溶血素O（ASO）是化脓性链球菌细胞外产物的特异性抗体。ASO主要用于链球菌感染引起的扁桃体炎、急性肾小球肾炎、活动性风湿热、风湿性心肌炎、皮肤及软组织等的感染诊断和监控［1］。评价分析测量范围有助于发现方法学原理、仪器、校准品、试剂、操作程序、质量控制计划等很多方面的误差来源，是一个很重要的仪器性能指标［2］。作者参照美国临床和实验室标准化协会（CLSI）的EP6-A文件指南，用奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪对血清ASO检测系统的测量范围进行评价。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪；试剂：德赛诊断系统（上海）试剂盒，批号为17648校准品批号为16693；质控品为美国BIO-RAD，批号为54551、54553。

1.2 样本根据EP6-A指南推荐选择高值和低值样本各一份。

1.3 方法收集高值（H）和低值（L）的患者样本血清，要求高值样本超过厂家提供的线性范围。按1L+0H、0.8L+0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、0L+1H配制方法，制成6个不同浓度的系列评价标本，在奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪上测定ASO，每个样本按随机方式重复测定3次，在1d内完成。将ASO浓度为841IU／mL的血清分别作2～160倍稀释，检测结果与稀释后的预期值比较，计算回收率，确定最大稀释度。

2 结 果

2.1 ASO测量值与预期值结果将配制好的不同浓度系列样本进行检测，结果见表1。

表1 ASO测量值与预期值结果（IU／mL）

将预期值为X，测量均值为Y，作散点图，目测呈一条直线关系，在Microsoft Excel 2000作直线回归，预期值与测量均值的散点图见图1。

图1 ASO预期值与测量均值散点图

从上述直线回归结果得知，r2=0.998 7，说明组成回归线的所有数据点紧密贴近回归线，预期值与测量值之间相关性极好；斜率b1=0.984，在0.97～1.03，从经验上判断，斜率与1之间无差异；截距b0=7.45，与分析测量范围的上限1 200IU／mL相比值很小，作截距与0差异的t检验，差异有统计学意义（P＜0.05），说明截距是由统计引入的，实际的标准曲线能通过原点。从上述结果说明，该方法在实验所涉及的浓度范围7～1 094IU／mL呈线性。

表2 ASO稀释回收率测定结果（IU／mL）

2.2 ASO临床可报告范围验证将ASO浓度为841IU／mL的样本分别进行2、10、20、40、80、160倍稀释，每个稀释样本重复测定2次，计算稀释回收率。按仪器说明书要求，回收率在90.0%～110.0%结果时为可接受。稀释回收率=（测定值／预期值）×100%。见表2。从表2结果可看出，随着标本稀释倍数的增加，回收率逐渐增高，当稀释倍数大于或等于1∶80时，标本回收率大于110.0%，超过可接受范围。因此，当患者样本超过线性范围时，必须稀释重做，但最大稀释度不宜超过40倍，标本稀释后的测定值必须大于21IU／mL，否则结果不可靠。即AMR（分析测量范围）上限乘以最大稀释度即为CRR（临床可报告范围）上限（1 094.1IU／mL×40=43 764IU／mL），结合试剂说明书灵敏度为7IU／mL，故本检测系统测定ASO的临床可报告范围为7～43 764IU／mL。

3 讨 论

分析测量范围即定量检测项目的线性检测范围，是反映分析方法性能的重要指标，也是保证临床检测结果准确性的重要砝码。分析测量范围的建立有助于获得准确可靠的检测结果，在日常检测过程中，标本真实浓度只有在分析测量范围内才能保证其检测结果的可靠性，否则可能会造成检测结果的假性偏高或偏低［3］。对于CRR大于AMR的检验项目，需进行最大稀释度验证实验，并结合临床决定水平和功能灵敏度来共同确定该项目的CRR。

分析用于验证的材料必须具有该方法的基质效应［4］。本研究首先通过一系列浓度的血清验证ASO测量的线性范围，避免基质效应的影响，然后通过倍比稀释实验确定ASO的临床可报告范围。从表1结果可看出，ASO的测量均值与预期值成很好的线性关系：Y=0.984 2 X+7.458 1，r2=0.998 7，验证后说明奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪测定ASO在7～1 094IU／mL线性良好，超出了试剂说明书规定的（7～800 IU／mL）范围。在实际工作中，仍应按照试剂说明书规定的线性为准，对于超出试剂说明书规定的线性范围的患者样本，作者建议稀释后重测。表2结果显示，对于倍比稀释血清，随着稀释倍数的增加，回收率逐渐增高，当稀释至1∶80倍时，回收率为122.9%，已经高于110.0%，结果不可靠。这可能是基质效应的影响，当稀释倍数不断增加，反应环境已发生较大变化。当患者标本ASO测定值超过最大线性范围时，必须稀释重做，但最大稀释度不宜超过40倍，即奥林巴斯AU5400全自动生化分析仪检测ASO的临床可报告范围为7～43 764IU／mL。

综上所述，对于超过线性范围的患者样本，稀释程序非常关键，为确保检测结果的准确性，建议临床实验室在编写标准化操作规程时，有必要规范样本稀释操作程序，为实验室提供进一步的质量保证，更好地为临床提供更准确的检测结果。

［1］陈文彬，潘祥林，康熙熊，等.诊断学［M］.6版.北京：人民卫生出版社，2004：482.

［2］杨有业，张秀明.临床检验方法学评价［M］.北京：人民卫生出版社，2008：168-195.

［3］潘锡龙.血清肌酸激酶活性检测的分析测量范围建立与评价［J］.检验医学与临床，2013，10（2）：167-168.

［4］潘超，王文龙，张国伟.定量检测中分析测量范围的验证［J］.检验医学，2010，25（4）：303.