慢性乙型肝炎患者细胞免疫功能对抗病毒疗效的影响

西安交通大学第一附属医院传染科 （西安710061） 沙小莹 赵英仁

为了观察HBeAg阳性慢性乙型肝炎（CHB）患者细胞免疫功能对抗病毒疗效的影响，我们自2010年2月至2012年2月从我院门诊及住院患者中选择60例HBeAg阳性的男性慢性乙型肝炎患者，按HBeAg水平高低分为两组，分别检测两组患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞（Treg细胞）表达率及外周血T淋巴细胞亚群并对两组患者同时应用阿德福韦酯联合苦参素胶囊治疗，现将观察结果报告如下

对象与方法

1 研究对象 根据2010年版的《慢性乙型肝炎防治指南》中慢性乙型肝炎的诊断标准，选择HBeAg阳性的男性慢性乙型肝炎患者，入选患者年龄18－60岁，（平均年龄38．8岁）入选患者血清 HBsAg、HBeAg、抗－HBC持续阳性6个月以上，HBeAg测定值1300－50S／CO，HBV DNA≥1×105拷贝／ml，丙氨酸转氨酶（ALT）≥2ULN，血清总胆红素＜34umol／L，排除肝硬化或重叠其它肝炎病毒感染者及伴有其它严重躯体疾病者。入选患者按HBeAg测定值分为A、B两组，A组30例 HBeAg测定值600－50S／CO （均值323±186），B组30例 HBeAg测定值1300－600S／CO（均值896±258），两组均值比较P＜0．01。A、B两组患者平均年龄，平均病程，均值比较均无统计学差异，两组患者均经过短期住院治疗之后出院门诊治疗。

2 方 法 A、B两组病人均口服阿德福韦酯胶囊10mg／次，每日1次（正大天晴公司生产），口服苦参素胶囊200mg／次，1日3次（正大天晴公司生产）。疗程均为24个月。治疗开始后两组患者均每3个月检测1次乙肝五项定量、HBV DNA、肝功能、肾功能，比较两组患者治疗24个月时HBeAg转阴率、HBeAg血清转换率、HBV DNA转阴率。肝功能、肾功能检测用日本产全自动生化分析仪、乙肝五项定量检测用电化学发光法，试剂由雅培公司提供），HBVDNA（实时荧光PCR法，试剂由上海复星医学科技发展有限公司提供）

流式细胞仪检测：入组患者治疗前均检测外周血T淋巴细胞亚群 CD3＋CD4＋数量、CD3＋CD8＋数量、CD4＋／CD8＋、CD4＋CD 25＋Foxp3＋调节性 T细胞表达率。T淋巴细胞亚群CD4、CD8、CD3标记按常规方法进行，CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞标记按试剂盒说明书进行操作，上机前将样本充分混匀。检测仪器及试剂：FACSCCalibur流式细胞仪为美国BD公司产品；CD4、CD8、CD3荧光标记单克隆抗体为美国BD公司产品。余试剂均购自美国eBioscience公司。

3 统计学处理 采用SPSS18．0软件，计量资料采用均数±标准差进行统计描述。符合方差齐性的两样本均数比较采用独立样本t检验；计数资料采用χ2检验；P＜0．05表示差异有统计学意义。

结 果

1 治疗前两组患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果 见表1。

2 治疗24个月时两组患者血清乙肝病毒标记物指标变化结果 见表2。

表1 治疗前两组患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果

表2 两组患者血清乙肝病毒标记物指标变化

讨 论

慢性乙型肝炎患者机体存在不同程度的细胞免疫缺陷［1］，固有免疫的NK细胞、NKT细胞、抗原提呈细胞及获得性免疫的乙肝病毒（HBV）特异辅助性T细胞、特异杀伤性T细胞数量严重不足，调节性T细胞数量异常增高，致使患者机体清除HBV的免疫反应受到明显抑制。目前研究认为HBeAg在诱导CHB患者机体产生免疫耐受、形成HBV持续感染中发挥重要作用［2］。研究显示HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者的外周血中调节性T细胞（Treg细胞）的比例明显高于HBeAg阴性的患者，体外实验的证据表明慢性HBV感染者外周血Treg细胞可以抑制CD4＋T细胞和CD8＋T细胞的活化，抑制HBV特异性细胞免疫应答［3，4］。研究还显示Treg细胞可以直接抑制NKT细胞的功能，也可通过转化生长因子（TGF）被他等细胞因子抑制NKT和NK细胞的功能［5］。Sakaguchi已证明CD4＋CD25＋Foxp3＋Treg细胞是一类在抑制自身免疫反应中起主要作用的Treg细胞，被认为是诱导自身耐受的关键，而且这种抑制作用有剂量依赖性。HBeAg可直接通过干扰抗原提呈细胞分泌炎症因子白细胞介子－12（IL－12）和IL－6，干扰抗原识别诱导调节性T细胞的分化，而调节性T细胞可以通过细胞－细胞直接接触及释放LI－10和TGFβ等抑制因子抑制HBV抗原特异杀伤性T淋巴细胞的增殖和活化，HBeAg阳性的CHB患者外周血中几乎检测不到HBV特异性杀伤性T细胞。HBV特异性T淋巴细胞的功能低下是造成HBV感染慢性化的主要原因。HBeAg导致Th1／Th2失衡，HBeAg刺激Th2细胞因子分泌增加，以及通过Fas－FasL介导的机制清除Th1细胞，引起Th1／Th2失衡，表现为CD4＋／CD8＋细胞比例下降，HBV特异杀伤性T淋巴细胞／抑制性T细胞比例明显下降，明显降低了清除HBV的细胞免疫反应，形成持续的HBV携带或慢性乙型肝炎状态。Milich等分别用HBeAg和HBcAg免疫小鼠发现HBcAg免疫后的小鼠表现为Th1反应类型，HBeAg免疫后的小鼠表现为Th2反应类型，研究证实HBeAg血清浓度在10ng／ml时即可引发T淋巴细胞耐受。故患者血清HBeAg水平的高低与患者机体清除HBV的细胞免疫功能高低有关。对各种抗乙肝病毒治疗药物的病毒学应答和e抗原血清学转换有良好的预测价值。

本组临床观察结果：治疗24个月时，A组HBeAg血清转阴率50．00%，B组20．00%，两组比较P＜0．01；A组 HBeAg血清转换率43．33%，B组16．66%，两组比较P＜0．01；A组 HBV DNA转阴率93．33%，B组HBV DNA转阴率73．33%，两组转阴率比较P＜0．05；HBeAg测定值较低的A组患者的CD4＋／CD8＋比值1．32±0．51，明显高于 HBeAg测定值较高的B组0．91±0．36，两组比值比较P＜0．05；A 组CHB患者外周血CD4＋CD25＋Foxp3＋调节性T细胞表达率4．21±1．26%，B组6．78±1．83%，A、B两组Treg细胞表达率比较，P＜0．05。进一步证实患者血清HBeAg水平的较低组患者机体清除HBV的细胞免疫功能好于HBeAg水平的较高组患者。更易取的抗病毒治疗的满意效果。

［1］ 张定风．乙型肝炎的免疫发病机制及治疗靶位的探讨［J］．中华肝脏病杂志．2012，20（1）：71－74．

［2］ Ferrari C，Missale G，Boni C，et al．Immunopathogenesis of hepatitis B．［J］．Hepatology，2003，39（1）：36－42．

［3］ Stoop JN，Van－DerMolen RG，Baan CCet al．Regulatory T cells contribute to the impaired immune response in patients with chronic hepatitis B virus infection ［J］．Hepatology，2005，41：771－778．

［4］ Xu D P，Fu J L，Jin L et al．Circulating and liver resident CD4＋CD25＋regulatory T cells actively influence the antiviral immune response and disease progression in patients with hepatitis B ［J］．J Immunol，2006，177（1）：739－747．

［5］ 刘 新，娄金丽，陈 煜，等．肝纤维化小鼠调节性T淋巴细胞的变化及意义 ［J］．中华肝脏病杂志，2014，22（4）：277－280．