蛋氨酸负荷对去卵巢大鼠血脂及一氧化氮的影响

尚 涛，田盼丽 (宁夏回族自治区人民医院，宁夏 银川 750002)

国内外研究表明，绝经后血浆同型半胱氨酸(Hcy)的水平显著上升，高同型半胱氨酸血症(HHcy)是近年来新发现的一个重要的、独立的心血管疾病危险因素，可引起动脉粥样硬化病变，但其具体的致病机制尚未完全明了。本研究探讨HHcy是否通过诱发脂代谢紊乱及NO水平的改变发挥致动脉粥样硬化作用效应。现报告如下。

1 材料和方法

1.1 材料:同型半胱氨酸ELISA试剂盒:美国CUSABIO生物技术有限责任公司产品。NO试剂盒:南京建成生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 实验动物及模型建立:健康4个月月龄雌性SD大鼠24只，体重(240±20)g，购自宁夏医科大学医学院。各组实验大鼠在无菌条件下行戊巴比妥钠60 mg/kg腹腔注射麻醉后，取下腹正中切口，切除双侧卵巢，结扎输卵管及伴行血管，冲洗闭合伤口。其余8只不切除卵巢，只切除相同大小的卵巢周围脂肪组织，作为假手术组。

1.2.2 分组及处理:①假手术组(SHAM组);②去卵巢组(OVX组);③蛋氨酸组(MET组):去卵巢术后1周，给予蛋氨酸1 g/(kg·d)灌胃，术后1周，SHAM、OVX组灌服蒸馏水，MET组开始蛋氨酸灌胃，共持续9周。实验期间所有大鼠置同一室内，自由饮水，进食普通饲料，每周称重1次，依体重变化调整给药剂量。

1.2.3 血清Hcy测定:所有动物术后10周腹主动脉穿刺取血，分离血清，-20℃保存，采用ELISA法测定，检测方法按照试剂盒说明进行。

1.2.4 血脂测定:血清标本采用全自动生化分析仪测定血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平。

1.2.5 血清NO的测定:使用硝酸还原酶法检测检测NO的水平。

2 结果

2.1 大鼠血清Hcy水平:与假手术组相比，去卵巢术后大鼠血清tHcy浓度明显升高(P＜0.01);给予蛋氨酸负荷，去势大鼠的血清tHcy浓度进一步升高(P＜0.01)。详见表1。

表1 各组大鼠血清Hcy水平

2.2 大鼠血脂水平:与SHAM组相比，OVX组、MET组血清TC、LDL-C浓度明显升高(P＜0.01)，HDL-C浓度降低(P＜0.05，P＜0.01);各组TG比较差异无统计学意义(P＞0.05);经相关分析表明，大鼠血清tHcy浓度与血清TC、LDL-C呈正相关(r=0.295，P=0.023;r=0.367，P=0.006)。详见表2。

表2 各组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的比较(±s，mmol/L)

表2 各组大鼠血清TC、TG、LDL-C、HDL-C的比较(±s，mmol/L)

注:与SHAM组比较，①P＜0.05;与OVX组比较，②P＜0.05

组别 动物数TC TG LDL-C HDL-C SHAM组8 1.83±0.15 1.73±0.31 0.42±0.11 1.91±0.21 OVX组 8 2.42±0.20①1.80±0.35 0.78±0.21① 1.53±0.22①MET组 8 2.69±0.18①1.81±0.32 0.95±0.19①1.18±0.21①②

2.3 大鼠NO水平:与假手术组相比，去卵巢术后大鼠血清NO浓度明显降低(P＜0.01);给予蛋氨酸负荷，去势大鼠的血清NO浓度进一步降低(P＜0.01)。经相关分析表明，大鼠血清Hcy浓度与血清NO呈负相关(r=-0.424，P=0.002)。详见表3。

表3 各组大鼠血清NO浓度的比较(±s)

表3 各组大鼠血清NO浓度的比较(±s)

注:与SHAM组比较，①P＜0.05;与OVX组比较，②P＜0.05

组别 动物数 NO(μmol/ml)SHAM组53.24±7.51 OVX组 8 35.39±2.36①MET组 8 22.14±6.15 8①②

3 讨论

绝经后，除过人们所熟知的激素水平的改变外，血浆同型半胱氨酸的水平也显著上升，去卵巢大鼠经蛋氨酸负荷后，蛋氨酸在体内可代谢为同型半胱氨酸而进一步加重高同型半胱氨酸血症(HHcy)［1］，HHcy是近年来新发现的一个重要的、独立的心血管疾病危险因素，可引起动脉粥样硬化病变［2］。本研究结果表明，大鼠去卵巢后血浆tHcy浓度升高，去势大鼠给予蛋氨酸负荷9周，可充分诱导HHcy。

众所周知，脂代谢异常是动脉粥样硬化和冠状动脉粥样硬化性心脏病的独立危险因素。高同型半胱氨酸血症影响血管内皮细胞胆固醇的代谢，使血管内皮细胞羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA和蛋白表达增强，引起脂代谢紊乱，高脂血症通过脂毒性损伤内皮细胞，受损的内皮细胞分泌趋化因子和黏附分子，如单核细胞趋化蛋白-1、E-选择素、细胞间黏附分子等来调节单核细胞黏附和迁移，单核细胞黏附于血管EC并进一步迁移进入血管壁，摄取脂质转化为泡沫细胞，泡沫细胞增加是AS形成早期的重要事件，在AS的形成中起关键作用。本实验结果表明，给予蛋氨酸的去卵巢大鼠血清TC、LDL-C明显升高，而HDL-C明显降低，且Hcy浓度与血清TC、LDL-C呈正相关，进一步说明高同型半胱氨酸血症可引起脂代谢紊乱，促进动脉粥样硬化的发生。

内皮损伤是动脉粥样硬化的发病机制之一，而内皮损伤必然导致内皮功能失调，后者则表现为NO生成减少。NO作为调节心血管系统的主要细胞信使分子和效应分子，在体内执行重要的生理功能，包括扩张血管、抗血小板聚集与活化、抑制血管平滑肌细胞增殖、抗氧化和抑制炎性反应介质的表达等作用。本研究显示给予蛋氨酸的去卵巢大鼠NO的合成与释放减少，经相关分析表明，血清Hcy浓度与血清NO水平呈负相关。

综上所述，本研究利用氨酸负荷去卵巢大鼠模型，观察了大鼠去卵巢后给予蛋氨酸负荷血浆tHcy、血脂及NO水平的变化，反映了高同型半胱氨酸血症通过引起脂代谢紊乱及减少NO的表达，参与了动脉粥样硬化的病理过程。

［1］ Meenakshi S，Santosh KR，Manisha T，et al.Effect of hyperhomocysteinemia on cardiovascular risk factors and initiation of atherosclerosis in Wistar rats［J］.European Journal of Pharmacology，2007，574(1):49.

［2］ 李静梅，高 奋，肖传实.心肌梗死患者同型半胱氨酸与冠心病传统危险因素的比较［J］.中国动脉硬化杂志，2001，9(2):137.